一起實驗兔感染支氣管鮑特桿菌病的病例分析

鄭立鋒 鄧壽斌 詹先強 吳潤生 林 健 姚 堯 翁順太＊

（1.福建省人獸共患病研究重點實驗室，福建省疾病預防控制中心 福州 350001；2.福州大北農生物技術有限公司 福州 350014）

福建省某單位為完成一項課題，于2017年3月從上海某養殖單位購進38只雄性日本大耳白兔（體重1.0～1.5 kg，準備作預試驗用），經過140 d飼養管理，在未進行任何實驗處置的前提下，兔子相繼出現發病、死亡，每天1～3只，共死亡25只。通過現場調查和采樣檢查，掌握了飼養管理過程中存在的問題，確認為一起管理原因引發的傳染性疾病。

1 癥狀及細菌學檢查

1.1 臨床癥狀 食欲減退，消瘦，反應遲鈍，萎靡不振，雙眼無神，不活動，打噴嚏，鼻腔有分泌物，伴出血或黃色液體[1]。緊隨鼻炎卡他癥狀后即出現呼吸困難，籠內亂竄、迅速死亡，病程僅2～3 d。死亡前四肢亂蹬并發出痛苦的尖叫聲，肛門有糞便排出。

1.2 解剖癥狀 鼻腔、氣管黏膜充血，鼻腔內有漿液性分泌物。內臟病變主要集中在肺臟，表面光滑、水腫，解剖時有液體流出，充血發紅，有的甚至發黑呈暗紅色[2]。肝臟病變較少見，只有2只患兔肝臟表面可見黃豆大小的膿瘡。

1.3 細菌學檢查[3]

1.3.1 儀器與試劑 革蘭氏染色液、血瓊脂平皿、DHL瓊脂平皿及微量生化鑒定管，購自廣東環凱微生物科技有限公司；VITEK 2 GN卡（革蘭氏陰性菌鑒定卡）購自廣州江河生物科技有限公司；梅里埃VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定儀。

1.3.2 分離培養 分別采集4只死亡兔的病變肺臟各一小塊，接種于血瓊脂平皿和DHL瓊脂平皿置于培養箱（36±1℃）中培養48 h，觀察平皿上菌落生長情況。對分離菌株進行革蘭氏染色鏡檢，并進行生化實驗，同時按照VITEK 2 Compact自動鑒定儀GN鑒定卡的說明書進行操作，上機鑒定。

1.3.3 初步鑒定 在血瓊脂平皿上均形成1 mm左右呈灰白色的菌落；DHL瓊脂平皿上均形成半透明2 mm左右的菌落。將分離自血瓊脂平皿的可疑菌株接種于DHL瓊脂平皿中，置于培養箱（36±1℃）培養48 h，生長良好。經革蘭氏染色鏡檢，均為革蘭氏陰性小桿菌。微量管生化反應結果為：動力、尿素為陽性，葡萄糖、蔗糖、靛基質、硫化氫均為陰性。并將菌株使用VITEK 2 GN卡經梅里埃VITEK 2 Compact全自動細菌鑒定系統鑒定為支氣管鮑特桿菌，概率為99%。

1.4 診斷結果 綜合臨床癥狀、病理剖檢及細菌學檢查結果，可診斷為支氣管鮑特桿菌病。

2 臨床干預

2.1 發病初期 出現卡他癥狀時，用卡那霉素 0.2～0.4 g/只·次，肌肉注射，每日2次，效果不佳，仍陸續出現死亡現象。后使用卡那霉素（劑量、方法同上）和口服酞酰磺胺噻唑 （按每千克體重用0.2～0.3 g）聯合干預，2次/d，連用 5～7 d[4]，病情逐漸得以控制。

2.2 干預期間 每天用0.2%過氧乙酸溶液對各區域設施進行噴霧消毒。

3 分析與討論

支氣管鮑特桿菌為一種革蘭氏陰性小桿菌，有鞭毛、能運動，不形成芽胞，主要寄居于大鼠、豚鼠和家兔的上呼吸道。該病多發生在氣候多變的春秋兩季[5]，主要通過空氣傳播經呼吸道而感染，帶菌兔和患兔鼻腔分泌物中的病菌隨咳嗽、噴嚏飛沫污染飼料、飲水、籠舍和空氣，傳染給健康兔[6]。當機體受到各種因素如氣候驟變、感冒、寄生蟲病等的影響而降低機體的抵抗力，或其他誘因如灰塵和強烈性氣味的影響，使上呼吸道黏膜的保護屏障受到破壞，易導致發病。

實驗兔于7月底、8月初發病，與發病季節吻合。發病時已經成年，與大多文獻所報道的“幼兔發病率高，成年兔較少發病”有較大出入[7]。引發疾病的主要原因如下。

1）實驗室體積不大（3 m×4 m×2.6 m），放置 2 臺共12個籠位的兔平板架，平均每籠飼養3只，飼養密度過大。且回風管過濾網上沾滿蜘蛛網、兔毛和黑色粉塵，室內通風換氣不良，氨濃度明顯超標，是引發該病的主要原因。

2）工作人員沒有經過操作技能的專業培訓，對設施溫濕度的控制、通風換氣的控制、實驗動物的生活習性了解不多，專業理論知識、操作技能和管理經驗欠缺。當早期個別家兔出現鼻炎癥狀時得不到足夠重視，任病情發展和蔓延，導致最終暴發流行。

3）實驗室雖取得使用許可證，但衛生現狀很差，缺乏規范的衛生清理和環境消毒。通過了解，原來是沒有經過正規培訓的在校學生負責日常管理。發病時正值畢業季，參與管理的兩批學生沒有做好工作交接、沒有經過內部專業培訓就匆促上崗。

4）實驗兔從不具備生產許可證的單位購進，也是一種違規做法。國家標準中該病雖然不列為等級家兔應排除的病原菌，但它是以隱性感染狀態長期存在家兔體內，一旦外界環境改變、手術實驗等因素的刺激，很可能顯性蔓延，對兔群造成毀滅性的打擊[8]。

綜上述，該病例完全是由于管理不善引發的一起人為事故。如果能按既定管理制度和操作規程來規范管理，該起事故當可防、可控，應引以為鑒。

4 預防措施

1）加強飼養管理。從業人員（含科研人員、管理技術人員、飼養人員）應經過必要的專業理論學習和實踐操作技能的培訓，持證上崗。設施應保持恒溫恒濕，日溫差變化小于4℃，每天注意觀察實驗兔精神狀態，發現異常立即報告主管技術人員。患兔應隔離、觀察、治療，查明病因，同時加強衛生消毒，防止疫情蔓延擴散。

2）加強設施內部的通風換氣，平衡進風、排風時間，避免污濁空氣滯留，保證通風良好。該單位普通級實驗用兔設施的氣流組織形式是上送側下排，提示這種氣流組織形式很可能不適合普通級兔的生物學特性和生長、生活環境。減少室內各種有害氣體對家兔生長發育的影響，應定期清理動物的排泄物、保持適當的換氣次數，這樣才能有效降低氨濃度，有利于家兔正常的生長發育[9]。

3）定期進行衛生消毒。制定實驗室各部位、籠架具、室內空氣等定期衛生消毒制度并嚴格執行。及時清除糞便、尿垢等污物，保持實驗室、籠架具整潔，增強動物抵抗力。及時更換、清洗、消毒進風、回風管過濾網。

做好衛生消毒工作，強化無菌觀念是開展標準化實驗動物工作的根本保證。工作人員須更衣、戴帽、戴口罩、戴手套、更鞋方能進入實驗室，每天工作完畢，要對實驗室的地面、工作臺面等部位進行全面消毒，還要定期對設施內的空氣進行噴霧消毒。最好采用獨立的飲水方式。

4）嚴格按國家《實驗動物許可證管理辦法（試行）》[10]的規定開展實驗動物工作。其中第六條第一款明確規定 “使用的實驗動物必須來自持有生產許可證的單位或個人，質量合格”，這將直接影響科研工作的成敗，是先決條件。否則隨意從無生產許可證的單位或個人去購買，實驗動物的質量將無法保證。同時要索取實驗動物的生產許可證、質量合格證等相關證明材料。

5）對于中等以上實驗動物，剛引進時應當做好隔離檢疫工作，且檢疫期不少于14 d，經細菌檢查為陰性方可繼續使用。這樣可有效排除某些潛在隱性疾病對動物的影響。將所有患病動物進行隔離、觀察，禁止與健康動物混居一籠或混居一室[11]，以免造成交叉感染、疫情蔓延。及時找明原因、對癥治療。

6）該病例中經藥物治療而好轉的兔，雖幸存下來，但已失去應有的利用價值。用它們來繼續進行科研實驗，很可能會產生藥物的拮抗作用，導致實驗失敗。

[1]王偉,朱瑞良,李新蒼,等.兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及其免疫原性檢測[J].中國獸醫學報,2008(8):897-900.

[2]余樹民,鄧俊良.獺兔金黃色葡萄球菌和波氏桿菌混合感染的診治[J].四川畜牧獸醫,2002,29(B05):9-10.

[3]國家質量監督檢驗檢疫總局.GB/T14926.6-2001實驗動物 支氣管鮑特桿菌檢測方法[S].北京:中國標準出版社,2002.

[4]黃引賢,李乃津.兔波氏桿菌病的防治試驗初報[J].北京實驗動物科學與管理,1994(1):21.

[5]范志宇,惲時鋒,王芳,等.兔支氣管敗血波氏桿菌不同感染途徑研究[J].現代農業科技,2008(18):235-237.

[6]方喜業.醫學實驗動物學[M].北京:人民衛生出版社,1995:48-49.

[7]蔣金書.兔病學[M].北京:北京農業大學出版社,1991:46-48.

[8]鄭立鋒,高昔英,姚堯,等.剖腹凈化建立清潔級獺兔核心種子群研究[J].醫學動物防制,2017,33(5):518-520.

[9]翁順太,高昔英,徐海濱,等.雙致病菌混合感染引起家兔發病的調查分析[J].福建畜牧獸醫,2017,39(3):41-43.

[10]科學技術部,衛生部,教育部,農業部,國家質量監督檢驗檢疫局,國家中醫藥管理局,中國人民解放軍總后勤部衛生部.實驗動物許可證管理辦法 （試行）國科發財字［2001］545 號[EB/OL].(2001-12-05)[2017-09-13].http://www.lascn.net/Item/12630.aspx.

[11]汪洋,趙德明.一起兔支氣管敗血波氏桿菌病的診治[J].中國畜牧獸醫,2008,35(8):93-94.