JJG861-2007《酶標分析儀》檢定規程解讀和探析

(福建省三明市計量所 福建 三明 365000)

一、概述

酶標分析儀(以下簡稱酶標儀)廣泛地應用在艾滋病檢測、臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中，是對酶聯免疫檢測(EIA)實驗結果進行讀取和分析的專業儀器。

酶標儀可簡單地分為半自動和全自動2大類。而規程的規定按單雙波長和通道的區別分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三類。目前企事業單位中，半自動或Ⅰ類的儀器較為普及。近年來，全自動酶免儀逐漸得到應用，它將酶免分析和洗板機聯成一體，操作過程標準化、規范化，避免了手工操作的誤差和交叉污染，提高了檢測的精確度和特異性，重復性好，同時大大降低了操作人員的勞動強度，提高了工作效率。

二、主要內容解讀和探析

(一)范圍

規程不僅適用于酶標儀的首次、后續檢定和使用中檢驗，還可用于型式評價和樣機試驗，說明該規程比一般的規程適用范圍更大一些。但筆者以為，對于全自動酶免儀的檢定是否適用，有待商榷。因為全自動酶免儀中增加了洗板機的功能，自動對酶標板進行清洗，清洗干凈與否嚴重影響到檢測結果。判斷酶標板是否清洗干凈，通常用每孔清洗液殘留量來表示，而規程中對此沒有做任何規定。

(二)計量性能要求

1.關于吸光度指標

對照JJG861-1994酶標分析儀舊規程，筆者發現:新規程刪去了對“線性誤差、換檔誤差、測試速度和波長透光特性”等檢定項目的要求，增加了對“波長重復性、通道差異”等檢定項目的要求，此外，對吸光度單位作了重大修改：舊規程吸光度的單位用“A”表述，而新規程則采用吸光度無單位的表述。筆者認為這是一個正確的修改，因為根據郎伯-比爾定律的數學表達式吸光度A=abc,a、b、c都是有單位的，分別為L/(g·cm)、cm、g/L，三者相乘后，是無單位的。而且，吸光度A值也稱光密度OD值,而光密度的定義是入射光強度與透射光強度之比值的常用對數值，是沒有量綱單位的一個對數值，顯然也是無單位的。此舉更正了長期以來業內對吸光度單位描述的失誤，并與國際通行的描述接軌了。

2.關于靈敏度指標

規程中靈敏度的單位為L/mg，而在規程中檢定方法里對靈敏度的檢定沒有作計算公式的描述，筆者認為這是該規程的一大失誤。其值應為測得的吸光度值除以酶標儀用靈敏度溶液標準物質的濃度值5mg/L，比值大于0.01L/mg時，則可判定該指標符合規程要求。該算法應在規程中明晰地表達出來，以免發生歧解。

(三)通用技術要求

規程中對樣品室和運動部分作了明確的規定，確實很有必要。因為酶標儀實質上就是分光光度計，光源的單色尤為重要。樣品室若有漏光現象，就會直接影響測量結果。還有，運動部分若有顯著的空回，會造成酶標板往返不在同一位置上，也會直接影響測量結果，造成誤判。

(四)計量器具控制

1.環境條件

此項中，對光線和振動的要求往往容易被忽略，而這兩項尤為重要。光線的直射顯然跟樣品室漏光一樣，直接影響測量結果。酶標儀在測樣品的測試過程中，大都要對酶標板里的樣品要進行震蕩，若有振動干擾，必對測試極為不利。因此，酶標儀應放置在遠離窗戶、遠離室內照明燈的陰暗處為佳。

2.檢定設備

規程表3中，對兆歐表的等級要求為0.1級。筆者以為，似乎高了些。規程表1“計量性能要求”里對絕緣電阻并沒有特別的規定，只在“通用技術要求”中作了“不小于20MΩ”的規定，并在后續檢定中不作要求。而在其他大多數醫用電子儀器檢定規程中，若有絕緣電阻要求的，對兆歐表的等級也只要求到10級。因此，筆者認為，兆歐表的等級要求到10級即可。

3.標準物質

規程規定，必須使用有證標準物質。在此建議光譜中性濾光片還是向模擬酶標板大小、濾光片固定嵌在其中的制作機構購買，因為若濾光片固定不好，會造成誤差。

4.檢定項目和檢定方法

(1)對照JJG861-1994《酶標分析儀》舊規程，新規程將“波長示值誤差”由舊規程的必檢項目改為首檢項目，在后續檢定中不需檢定，這大大增強了在實際工作的可操作性，避免了以前檢定“波長示值誤差”時因為要取下酶標儀所附干涉濾光片而幾乎無法實施檢定的尷尬局面。當然，對于需首次檢定和經維修后可能對儀器有較大影響的儀器，“波長示值誤差”和“波長重復性”仍要進行檢定，此時，最好請儀器廠家的售后服務技術人員將酶標儀所附干涉濾光片進行拆卸，用Ⅰ級雙光束分光光度計檢定完后再安裝回去。

(2)示值穩定性的檢定中，特別要注意儀器吸光度的最大值應取5min、10min中的大者，與初始值相減，并不是我們通常理解的最大值減最小值。

(3)吸光度示值誤差和重復性、通道差異的檢定，都是使用特定的光譜中性濾光片。目前，很多計量機構仍在使用單片定值的四個濾光片進行檢定，此時，特別要注意的是:第一，濾光片要固定好位置，不能在移動酶標板的過程中有絲毫的位置變動；第二，吸光度的讀數必須使用同一個孔的吸光度值，否則就會引入通道差異的誤差，影響測量結果；第三，對通道差異的檢定，規程并沒有規定6個吸光度值必須按一定順序取值，因此，取值的通道應以能固定好濾光片為原則，任意在每個通道上取6次即可。可見，這種使用單片定值的四個濾光片進行檢定，給實際操作帶來不便，并且容易因位置的變動帶來誤差。據悉，已有人研制出把四個濾光片固定在96孔微孔酶標板上的裝置，使用該裝置，就能完全避免位置誤差，實際操作極為便利。

(4)在靈敏度的檢定中，必須特別強調：第一，所使用的微孔酶標板中的某一孔，必須未含有任何抗原或抗體，換言之，就是必須使用經洗板機清洗甩干后干凈的酶標杯；第二，所使用的加樣器必須是經檢定合格的A級加樣器。

三、結束語

酶標儀屬于醫療衛生計量器具，儀器準確與否直接關系到廣大人民群眾的身體健康和生命安全，因此，認真做好酶標儀的檢定是從業人員義不容辭的責任。筆者結合工作實際，提出了對規程的一些可能不成熟的理解和心得體會，若有不當之處，歡迎批評指正。