曾文軍 王柳均 鄧珍良 袁紹輝 張小敏 陳劍釗 皮紅泉 陳群

【摘要】 目的 研究解脲支原體（UU）不同生物亞群與男性尿道炎的關(guān)系。方法 120例男性尿道拭子標(biāo)本， 獲取120株UU臨床株， 分析檢查其尿液， 并以多條帶抗原基因?yàn)榘形辉O(shè)計(jì)分群引物進(jìn)行UU鑒定生物群。結(jié)果 本研究未發(fā)現(xiàn)兩生物亞群混合感染標(biāo)本。UU1生物亞群占UU檢測(cè)79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測(cè)率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無(wú)臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1是優(yōu)勢(shì)定植菌。結(jié)論 UU1生物亞群可能是優(yōu)勢(shì)定植菌群， UU2生物亞群更容易引起尿道炎癥。

【關(guān)鍵詞】 解脲支原體；生物亞群；尿道炎；聚合酶鏈反應(yīng)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.09.119

【Abstract】 Objective To study the relationship between different biological subgroups of Ureaplasma urealyticum （UU） and male urethritis. Methods A total of 120 UU clinical strains were obtained from 120 male urethra swabs specimens， and the urine samples were tested and analyzed. Multi-banding antigen target for designing cluster primers was used for UU identification of biota. Results No mixed infection specimens of two biological subsets were found in this study. UU1 biosubsets accounted for 79.17% （95/120） of UU detection， and UU2 biosubsets accounted for 20.83% （25/120） of UU detection. There were 12 cases with clinical symptoms （2 UU1 cases， 10 UU2 cases）， and 108 cases without clinical symptoms （93 UU1 cases， 15 UU2 cases）. The detection rate of UU2 in male urethritis was significantly higher than that of UU1， and the difference was statistically significant （χ2=31.58， P<0.01）. That is， UU2 has higher pathogenicity， and UU1 is the dominant colonization bacteria. Conclusion The UU1 biological subgroups may be the dominant colonization group， and the UU2 biological subgroups are more likely to cause urethritis.

【Key words】 Ureaplasma urealyticum； Biological subgroups； Urethritis； Polymerase chain reaction

UU是男女下生殖道的常見(jiàn)分離菌株， 臨床根據(jù)UU的表型和基因型特征分為UU1（即Parvo生物群， 包括1、3、6、14四種血清型）和UU2（即T960生物群， 包括另外2、4、5、7、13 10種血清型）兩種生物亞群。研究發(fā)現(xiàn)， 不同生物亞群致病性存在差異， 尤其在男性泌尿生殖道臨床癥狀不一[1]。為探討UU不同生物亞群與男性尿道炎的關(guān)系， 本文對(duì)120例男性尿道拭子標(biāo)本， 分離培養(yǎng)的UU菌株進(jìn)行分群鑒定， 并與相關(guān)臨床表現(xiàn)進(jìn)行分析， 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取120例男性尿道拭子標(biāo)本， 獲取120株UU臨床標(biāo)本， 患者年齡22～49歲， 平均年齡32.9歲。符合尿道炎診斷12例（診斷標(biāo)準(zhǔn)：尿痛癢、尿道分泌物及油鏡下查見(jiàn)多核白細(xì)胞≥5個(gè)）， 不符合尿道炎診斷108例。除外淋球菌、霉菌、沙眼衣原體、滴蟲、加特納桿菌、皰疹病毒、乳頭瘤病毒及梅毒、人類免疫缺陷病毒（HIV）感染。

1. 2 標(biāo)本來(lái)源 收集本院門診男性尿道拭子標(biāo)本， 獲取120株UU臨床株。所有標(biāo)本均經(jīng)液體培養(yǎng)、分離、純化及鑒定， 挑取單個(gè)典型菌落重復(fù)接種于液體培養(yǎng)基增菌后， 菌液置-20℃冰箱中備用。

1. 3 試劑及儀器 UU液體及固體培養(yǎng)基；聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）試劑盒及DNA marker；DNA引物；瓊脂糖；SU-CF-IF型凈化工作臺(tái)； PCR儀；電熱恒溫水箱；Clinibio 128C酶標(biāo)儀；國(guó)產(chǎn)洗板機(jī)；紫外線燈；UU1生物亞群標(biāo)準(zhǔn)菌株；UU2生物亞群標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1. 4 UU生物群鑒定[2， 3] ①菌株DNA提?。鹤缘蜏乇渲腥〕鰳?biāo)準(zhǔn)和臨床菌株液體培養(yǎng)基后解凍， 吸取500 μl菌液， 10000 r/min離心15 min， 吸棄上清液；加入100 μl的蛋白酶K溶液；55℃水浴1 h；95℃保溫滅活蛋白酶K10 min；10000 r/min 離心1 min， 取上清液作PCR模板試驗(yàn)。②PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳：UU1生物亞群擴(kuò)增產(chǎn)物為403 bp， UU2生物亞群為448 bp。PCR體系均為20 μm引物各2 μl， 3 U/μl Taq酶1μl， 10×PCR Buffer （含Mg2+）5 μl， 3 mM dNTP混合物5 μl， DNA模板3 μl， ddH2O 40 μl， 總反應(yīng)體積100 μl。UU分群引物：上游：5'-GTATTTGCAATCTTTATATGTTTTCG-3'；下游：5'-CAGCTGATGTAAGTGCAGCATTAAATTC-3'。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性3 min、95℃變性1 min、54℃退火1 min、72℃延伸1 min， 共40個(gè)循環(huán)， 72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳， 于紫外線燈上觀察及鑒定。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2 檢驗(yàn)。 P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

本研究未發(fā)現(xiàn)兩生物亞群混合感染標(biāo)本。UU1生物亞群占UU檢測(cè)79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測(cè)率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無(wú)臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1是優(yōu)勢(shì)定植菌。見(jiàn)表1。

3 討論

近年UU實(shí)驗(yàn)分離率呈上升趨勢(shì)， 臨床上分為UU1與UU2兩種生物亞群。由于UU是一種條件致病菌， 影響其致病原因多， 主要有[4]：①與血清型相關(guān)；②與UU濃度及感染時(shí)間相關(guān)；③與宿主狀態(tài)有關(guān)。UU作為一種條件致病微生物， 定植于宿主黏膜表面的UU會(huì)釋放出NH3、各種磷脂酶、蛋白水解酶、過(guò)氧化物等導(dǎo)致機(jī)體損傷和炎癥反應(yīng)[5]。

UU在人群分離率極高， 即便經(jīng)過(guò)抗菌消炎治療轉(zhuǎn)陰， 經(jīng)過(guò)一段時(shí)間復(fù)查又會(huì)轉(zhuǎn)陽(yáng)性[6]。如何判斷UU是感染狀態(tài)或攜帶狀態(tài)， 是臨床急需解決的問(wèn)題。雖然人們?yōu)樘接懖煌逍蚒U的致病性進(jìn)行大量研究， 但都無(wú)足以令人信服的證據(jù)說(shuō)明某種血清型肯定和某種疾病有關(guān)。辛亞維等[7]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)， UU2生物亞群在不孕患者中檢出比率高于正常女性， 并且具有一定相關(guān)性， 這可能與UU2生物亞群促單核細(xì)胞分泌巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（MIF）的能力高于UU1生物亞群有關(guān)， MIF的增加使機(jī)體對(duì)UU產(chǎn)生超敏反應(yīng)， 引起炎癥和機(jī)體損傷。研究發(fā)現(xiàn)[4]， 從宮頸發(fā)生鱗狀上皮內(nèi)病變女性患者的陰道后穹窿處分泌物、宮外孕患者的輸卵管內(nèi)膜和宮頸分泌物、不育男性精液分離出來(lái)的UU均以UU2生物亞群為主， 且感染UU2生物亞群的輸卵管發(fā)生纖毛粘附和脫落率高達(dá)90%， 而UU1僅僅10%?？赡茉蛑粸閁U2生物亞群的致病因子或致病島對(duì)宿主破壞性更大， 致病性更強(qiáng)[8]。多數(shù)研究?jī)A向于UU2生物亞群具備一定的致病力， 而UU1可能是優(yōu)勢(shì)定植菌群。

UU2生物亞群相較UU1生物群更容易引起炎癥， 與非淋菌性尿道炎、前列腺炎、盆腔炎關(guān)系更密切[9]。本研究結(jié)果顯示， UU1生物亞群占UU檢測(cè)79.17%（95/120）， UU2生物亞群占UU檢測(cè)率20.83%（25/120）。12例有臨床癥狀（其中2例UU1， 10例UU2）， 108例無(wú)臨床癥狀（其中93例UU1， 15例UU2）， UU2在男性尿道炎患者中檢出率顯著高于UU1， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.58， P<0.01）， 即UU2具有更高的致病性， UU1生物亞群是優(yōu)勢(shì)定植菌。早期研究發(fā)現(xiàn)， 男女不孕不育患者UU2與抗精子抗體及抗子宮內(nèi)膜抗體關(guān)系更密切[2， 3]， 更容易導(dǎo)致不孕不育。錢迎芬[10]研究發(fā)現(xiàn)， UU2具有毒性作用， 導(dǎo)致亞群比例失調(diào)而引發(fā)炎癥， 臨床分群對(duì)診療甚為必要。張俏忻等 [11]研究發(fā)現(xiàn)， 男性不育人群與正常人群支原體感染無(wú)差異性， 但與UU1比較， UU2感染更容易引起精子質(zhì)量下降和白細(xì)胞異常增加， 可導(dǎo)致男性不育的發(fā)生。UU1生物亞群可能為寄居泌尿生殖道的正常菌群， 而UU2生物亞群則有一定的致病力支原體， 本文研究中也驗(yàn)證了上述觀點(diǎn)。但亦有研究發(fā)現(xiàn)， 男性尿道UU感染攜帶中UU2檢出率高于UU1[12]， 這可能與地區(qū)分布、研究對(duì)象及樣本量因素差異有關(guān)。李會(huì)平等[13]研究證明， 積極治療UU生殖道感染有助于提高抗精子抗體及抗子宮內(nèi)膜抗體轉(zhuǎn)陰率， 阻止抗體形成， 對(duì)免疫性不孕治療有重要意義。臨床用藥方面， UU兩大生物群對(duì)多西環(huán)素敏感性較高， UU2較UU1有更高的耐藥性[14]。

總之， UU2生物亞群與尿道炎的關(guān)系更密切， 其致病機(jī)理有待更進(jìn)一步深入研究。臨床開展UU定量與分型， 有利于區(qū)別對(duì)待UU不同生物亞群的臨床診治， 合理應(yīng)用抗菌素， 對(duì)開展優(yōu)生優(yōu)育有重要意義。

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[收稿日期：2017-11-02]