離子液體提取射干中結構相似的鳶尾黃素同系物

李森林，高鑫，劉春明，黃彧，吳桐，李賽男，張語遲

(1.長春師范大學中心實驗室，吉林長春130032;2.山東省濱州市鄒平縣環境保護局，山東濱州256200)

1　材料與方法

1.1　材料、試劑與儀器

射干 (Belamcanda chinensis)藥材購于北京同仁堂長春分店，95%乙醇和甲醇為分析純試劑 (北京化工廠)。水為超純水 (18.2ΩPa)，0.45μm濾膜 (安捷倫公司)。離子液體 (［EMIM］［BF4］，［BMIM］［BF4］，［BMIM］ Cl，［BMIM］ Br)(上海思域化工科技有限公司)。

LCQ FLEET離子阱型串聯液質聯用儀 (美國 Thermo Scientific公司);Waters 2695(Waters 2998 DAD檢測器)分析型高效液相色譜儀;分析型色譜柱:SunFireTMC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，I.D.5μm，美國Waters公司);恒溫水浴鍋 (北京泰克儀器公司);HPLC流動相所用甲醇為色譜純 (美國 Thermo Fisher公司);實驗用水為超純水 (美國Millipore公司);其它試劑均為分析純 (北京化工廠);

1.2　射干及離子液體簡介

射干 (Belamcanda chinensis)為鳶尾科植物Belamcanda chinensis(L.)DC.，其干燥的根莖。具有解毒利咽，清熱化痰，散熱消結的作用［1，2］。為常用中藥材，射干藥材中主要有效成分為異黃酮類成分，現代研究表明，此類成分具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、清除自由基及抗癌等重要的藥理與藥效作用［3，4］。基于其顯著的藥理活性，因此對射干異黃酮類活性成分探究具有重要的研究價值。

離子液體 (Ionic Liquid)又稱室溫熔鹽，常簡稱離子液體，是由特定陽離子和陰離子構成的在室溫或近室溫下呈液態的熔鹽體系，一般由特定的、體積相對較大的、結構不對稱的有機陽離子和體積相對較小的無機陰離子組成［5-8］。

2　試驗方法及結果

2.1　離子液體提取射干的條件優化

運用不同的條件超聲輔助提取射干中四中鳶尾黃素同系物。條件包括相同濃度不同種類的離子液體提取溶劑:1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽［EMIM］［BF4］，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽 ［BMIM］［BF4］，1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽 ［BMIM］Cl，1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽［BMIM］Br和甲醇;提取溶液濃度:0.25，0.5，1.0，1.5和2.0 mol/L; 提取時間:15，30，45和60 min;液質比:10，20，30，40和50 mL/g。在不同的提取條件下，將制成的離子液體溶液，分別取3 mL于離心管中加入100 mg的射干粉末，在功率為250 W，溫度為25℃的條件下，進行超聲輔助提取后，使用0.22μm的濾膜過濾，利用高效液相色譜技術對其進行分離，并計算出主要化合物的提取率。提取率W=Me/Ms，其中Me是提取液中異黃酮的質量 (mg)，Ms是樣品的質量 (g)。不同提取條件下結果如圖2.1所示:

圖2　.1(a)不同提取溶劑提取效果圖;(b)不同濃度［EMIM］［BF4］提取效果圖;(c)不同提取時間提取效果圖;(d)不同液固比提取效果圖

綜上可得采用濃度為1.0 mol/L的［EMIM］［BF4］離子液體溶液，對液固比為30 mL/g的射干粉末，在功率為250 W，溫度為25℃的條件下，進行超聲輔助提取45 min，所得鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素效果最佳。

2.2　運用液質聯用法鑒定單體化合物結構

HPLC-ESI-MS條件;高效液相色譜選擇二元線性梯度洗脫:流動相A為0.05%醋酸水溶液，流動相B為乙腈，流動相梯度程序:0～10 min，20% ～40%B，10～15 min，40% ～50%B，15～25 min，50% ～75%B，25～30 min，75% ～80%B;流速0.5 mL/min;波長266 nm，進樣量10 μL，柱溫:30℃。電噴霧質譜分析條件:正離子模式;掃描范圍m/z:100～1000;離子阱條件:噴霧電壓4.5 kV，鞘氣輔助氣為氮氣，金屬毛細管溫度250℃，金屬毛細管電壓20 V。

對各單體的液相色譜和質譜數據進行了分析，結果如表2.1所示。通過與文獻對比得出化合物的結構見圖2.2。

表2　.1　射干離子液體提取液中主要成分的液質聯用分析

圖2　.2　四種射干離子液體提取物分離單體的結構

3　結果與討論

本研究采用離子液體-超聲輔助提取法，對射干中的黃酮類物質的提取工藝進行了探究。離子液體-超聲輔助提取技術是將“綠色溶劑”離子液體與超聲提取技術相結合的一種新型提取方法，不僅具有快速、高效的特點，而且溶劑用量少、耗能低、可以廣泛用于中藥中有效成分的提取。實驗得出離子液體-超聲輔助提取法，提取效率高，操作簡單，為射干中結構相似的鳶尾黃素同系列物質的分離、提取及大量制備提供了重要參考，同時可為射干的藥理研究提供物質基礎，與傳統的熱回流提取方法相比，提取效率高，避免了活性物質在高溫的條件下失活，也克服了傳統提取方法中所存在的易碳化、易水解、有機溶劑消耗量大、易燃、易爆的缺點。離子液體的極性可控，可以對中藥中的復雜成分進行選擇性提取，然而該技術在中藥中有效成分提取的應用還不夠成熟，將來還需要進一步的探索。

長春師范大學研究生教育創新基金項目 (NO.cscxy2017024)

參考文獻:

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