Klk6、Her—2蛋白及Ki—67在子宮內膜癌中的表達及臨床病理意義

鄒云峰　熊雅波　楊春林

[摘要] 目的 探討組織型激肽釋放酶6（Klk6）、Her-2蛋白及Ki-67在子宮內膜癌中表達的意義。 方法 應用免疫組化檢測正常增生期內膜、單純性增生性內膜、復雜性不典型增生性內膜各19例和子宮內膜樣腺癌38例中Klk6、Her-2蛋白、Ki-67的表達情況。利用統計學軟件SPSS 17.0和Graphpad Prism 5進行統計學分析檢測并探討其意義。 結果 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在癌組織中表達高于其他病變（P<0.05），Klk6在不同腫瘤臨床分期中表達有明顯統計學差異（P<0.05）；而Klk6、Her-2蛋白在子宮內膜癌分級及淋巴結有無轉移表達無統計學差異（P>0.05）。 結論 Klk6、Her-2蛋白、Ki-67在子宮內膜癌中的表達與腫瘤發生有一定的相關性，特別是Klk6與子宮內膜癌分期相關，對臨床診斷、治療及評估預后具有一定的價值。

[關鍵詞] 子宮內膜癌；Klk6；Her-2蛋白；Ki-67；免疫組織化學

[中圖分類號] R737.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）04-0025-04

[Abstract] Objective To investigate the significance of expression of tissue-specific kallikrein 6 （Klk6）， Her-2 protein and Ki-67 in endometrial carcinoma. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in normal proliferative endometrium（n=19）， simple proliferative endometrium（n=19）， complex atypical hyperplastic endometrium （n=19） and endometrioid adenocarcinoma（n=38）. Statistical software SPSS 17.0 and Graphpad Prism 5 were used to detect and explore its significance. Results The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 in cancer tissues was higher than that in other lesions（P<0.05）. There was statistically significant difference in the Klk6 expression among different clinical stages（P<0.05）. There was no significant difference in the expression of Klk6 and Her-2 protein among different grades of endometrial carcinoma or in endometrial carcinoma with or without lymph node metastasis（P>0.05）. Conclusion The expression of Klk6， Her-2 protein and Ki-67 has some correlation with the occurrence of endometrial carcinoma， and has certain value for clinical diagnosis， treatment and prognosis evaluation， of which especially Klk6 is associated with staging of endometrial cancer.

[Key words] Endometrium carcinoma； Klk6； Her-2 protein； Ki-67； Immunohistochemistry

組織激肽釋放酶基因家族（kallikreins，Klks）是廣泛存在于人體各組織中編碼絲氨酸蛋白酶的一組同源基因。現已發現Klks基因家族所編碼的組織激肽釋放酶共15種[1，2]，參與細胞到組織發生、發展的許多正常生理過程，如牙齒及神經、生殖系統的發育[3-5]等，此外，還與腫瘤的轉移有關。大量研究表明Klks在許多腫瘤及非腫瘤疾病中有一定的表達差異，從而應用于臨床診斷中，如Klk3即前列腺特異性抗原（PSA）已被廣泛應用于前列腺腺癌的篩查，是診斷、預后、監測最重要的標記物之一[5，6]；也有研究表明Klk6在卵巢癌的發生發展、浸潤轉移等方面有一定作用[7]，但在子宮內膜相關病變中研究較少。Her-2基因是某些腫瘤分子靶向治療檢測基因之一，現臨床對Her-2基因陽性的腫瘤分子靶向治療具有良好的效果，如胃癌、乳腺癌等[8-11]。Ki-67是細胞增殖指數，對腫瘤預后的評估有一定作用。本實驗通過檢測正常增生期、良性增生及子宮內膜癌中的Klk6、Her-2蛋白的表達及Ki-67增殖指數，分析與臨床病理參數的相關性，以探討在子宮內膜癌發生發展中的作用，為子宮內膜癌的診斷、治療、預后提供參考數據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集余姚市人民醫院病理科2009年1月～2017年3月間存檔資料，經病理明確診斷女性患者病例：增生期子宮內膜19例（A組），年齡30～54歲，平均（45.58±6.41）歲；單純性增生19例（B組），年齡27～55歲，平均（46.21±6.59）歲；復雜性不典型增生19例（C組），年齡28～63歲，平均（50.50±9.68）歲；子宮內膜樣腺癌38例（D組），年齡38～77歲，平均（59.15±9.45）歲。各組間年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05）。38例子宮內膜樣腺癌中：1級10例（D1）、2級11例（D2）、3級17例（D3）；淋巴結轉移5例，無轉移33例；27例Ⅰ期、4例Ⅱ期、7例Ⅲ期（按照2009 FIGO手術分期進行分期）。

1.2 免疫組化

Klk6抗體來自美國R&D;公司，Her-2、Ki-67抗體和SP免疫組化試劑盒均來自福州邁新生物技術開發公司。組織采用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，連續4 μm厚切片，采用鏈霉卵蛋白素染色（SP法）檢測Klk6、Her-2、Ki-67蛋白。按SP免疫組化試劑盒（福州邁新生物技術開發公司）說明書進行基本步驟：切片脫蠟→沖洗→PBS稀釋的山羊血清封閉→沖洗→加生物素標記二抗工作液→PBS沖洗→滴加適量的堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素工作液→PBS沖洗→DAB液顯色→蘇木精復染→梯度酒精脫水干燥→二甲苯透明→中性樹膠封片→鏡下觀察。

1.3 結果判定

（1）Klk6蛋白染色結果判定標準：主要是子宮內膜腺上皮細胞質中呈棕色顆粒為陽性細胞，隨機觀察10個高倍鏡視野（×400）并計數，每個視野至少計數100個細胞，取其平均值為該病例的細胞陽性率。視野中無細胞陽性著色或陽性細胞<10%為陰性（0），陽性細胞在10%～50%為陽性（1+），陽性細胞>50%為強陽性（2+）。（2）Her-2蛋白定位于細胞膜上，染色結果根據陽性信號強度及著色方式進行評估：無陽性細胞或膜陽性細胞<10%為陰性（0），>10%的細胞有微弱或難以察覺的膜著色或僅部分細胞膜著色為陽性（1+），>10%的細胞有弱或中等強度的完整“U”型膜著色為陽性（2+），>10%的細胞有中等或強的完整“U”型膜著色為陽性（3+）。Klk6及Her-2蛋白以免疫組化結果（1+）為陽性標準。（3）Ki-67定位于細胞核，胞核染為棕黃色或棕褐色視為陽性表達，Ki-67增殖指數評判標準：選擇腫瘤細胞豐富、陽性細胞較多的熱點區域，選擇至少10個高倍鏡視野，計算這些視野腫瘤細胞中陽性細胞的平均值（%），作為Ki-67的增殖指數。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0和Graphpad Prism 5軟件進行統計學分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Klk6蛋白在子宮內膜病變中的表達

Klk6蛋白在正常增生期子宮內膜，單純性子宮內膜增生均不表達，陽性率分別為0（0/19）、0（0/19），復雜性不典型性增生陽性率100%（19/19），子宮內膜癌陽性率94.74%（36/38），Klk6蛋白在復雜性不典型性增生和子宮內膜癌中的表達水平明顯高于良性子宮內膜病變（P<0.05）（表1，封三圖4）。在子宮內膜癌1級、2級、3級中陽性表達無統計學差異（P>0.05）（表2）；在淋巴結轉移與無轉移之間表達無統計學差異（P>0.05）（表3）；但在不同臨床分期中表達有明顯統計學差異（P<0.05）（表4）。

2.2 Her-2蛋白在子宮內膜病變上的表達

Her-2蛋白在正常增生期子宮內膜陽性率為47.37%（1+，9/19），單純性子宮內膜增生陽性率47.37%（1+，9/19），復雜性不典型性增生陽性率26.32%（1+，5/19），子宮內膜癌陽性率73.68%（1+，13/38；2+，12/38；3+，3/38），Her-2蛋白在子宮內膜癌中的表達水平明顯高于增生期子宮內膜和其他內膜病變（P<0.05）（表5，封三圖5）。在子宮內膜癌不同分級、有無轉移及不同臨床分期間表達無統計學差異（P均>0.05）（表6～8）。

2.3 不同子宮內膜病變Ki-67增殖指數的表達分析

Ki-67增殖指數在增生型內膜平均陽性率56.84%，單純性子宮內膜增生平均陽性率33.42%，復雜性不典型性增生陽性率46.47%，子宮內膜癌陽性率55.68%，雖然Ki-67增殖指數在子宮內膜癌中表達高于單純性增生（P<0.05）（封三圖6，表9），但在子宮內膜癌不同組織學分級、是否轉移及不同臨床分期中無明顯統計學差異（表10～12）。

3 討論

子宮內膜癌是女性生殖系統常見惡性腫瘤之一。近年來子宮內膜癌的發生率有上升趨勢[12]，多發生于絕經后婦女，發病高峰在50～70歲。其發病率增高原因有多種，如人類壽命的延長使高齡婦女增多，從而內膜癌高發年齡人群基數增大；良好營養使雌激素水平相對增高；此外，初潮年齡過早、絕經后延、未產、肥胖、高血壓、糖尿病等都可以影響子宮內膜癌的發生。通過大量研究表明，雌激素水平的升高及子宮內膜長時間接受雌激素的刺激是引起子宮內膜癌發生的關鍵。

Klk6蛋白受類固醇激素調控，在乳腺癌、卵巢癌、睪丸癌和前列腺腺癌等激素相關的惡性腫瘤中異常表達[3-5]，有研究表明Klk6可引起宮頸癌細胞增殖及轉移[13]。本研究發現Klk6在子宮內膜癌中陽性表達明顯高于正常增生期子宮內膜和其他子宮內膜病變（P<0.05），在子宮內膜癌1級、2級、3級中陽性表達無統計學差異（P>0.05）；但在不同臨床分期中表達有明顯統計學差異（P<0.05）。提示Klk6在子宮內膜癌的發生發展中起到一定的作用，與臨床分期有一定的相關性。與佟麗波等[14，15]研究Klk6及Klk7在子宮內膜癌中的意義相一致。

Her-2基因是某些腫瘤分子靶向治療檢測基因之一，如胃癌、乳腺癌等[8，16，17]，本實驗發現Her-2蛋白在子宮內膜癌中的表達水平明顯高于正常增生期子宮內膜和其他子宮內膜病變（P<0.05）。但在子宮內膜癌不同分級及淋巴結有無轉移間無統計學差異（P>0.05），提示Her-2基因在子宮內膜癌發生的早期起到一定作用。

Ki-67可檢測癌細胞增殖指數，表示癌細胞增殖活性，對內膜癌的診斷與預后的評估起到一定的作用[18，19]。本實驗顯示Ki-67增殖指數在子宮內膜癌中表達高于單純性增生，具有統計學差異（P<0.05），而在其他子宮內膜病變無明顯差異。

Klks家族主要是編碼絲氨酸蛋白酶[3]，即一種重要的蛋白水解酶，其中Klk6作用是降解細胞外基質中纖維蛋白，加強腫瘤細胞轉移的可能[20]。Her-2是表皮生長因子受體家族成員之一，主要是通過與EGF結合從而促進細胞增殖及轉移[21]。我們設想Klk6和Her-2同時表達是否加強腫瘤轉移的可能性，雙重判斷預后，但由于本實驗樣本數較少，暫時未做相關統計，有待后續進一步研究。

綜上所述，本研究提示Klk6、Her-2、Ki-67對子宮內膜癌的發生發展起到一定的作用。并且Klk6與臨床分期有一定的相關性，且提示Klk6有可能成為臨床早期篩查子宮內膜癌重要標志物，可能成為腫瘤治療的有效靶點。

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（收稿日期：2017-11-01）