兒科肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液肺炎支原體DNA結(jié)果分析

馬秋林

[摘要] 目的 探討兒科肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中肺炎支原體感染情況。方法 回顧分析該院2015年1月—2017年6月所有送檢168例。利用PCR方法檢測(cè)肺泡灌洗液樣本肺炎支原體DNA，按不同年齡、性別統(tǒng)計(jì)分析陽(yáng)性率，并分析有無(wú)差異。結(jié)果 168例肺泡灌洗液檢測(cè)肺炎支原體總陽(yáng)性率為25.6%，男性患兒陽(yáng)性率為27.4%，女性患兒陽(yáng)性率為23.3%，而且都是4～6歲年齡段陽(yáng)性率最高，達(dá)到53.3%，小于1歲年齡段陽(yáng)性率最低。結(jié)論 肺泡灌洗液檢測(cè)肺炎支原體總陽(yáng)性率無(wú)性別差異，各年齡段感染率有差異。

[關(guān)鍵詞] 肺炎；肺泡灌洗液；肺炎支原體

[中圖分類號(hào)] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2018）01（c）-0033-03

[Abstract] Objective This paper tries to investigate the infection of mycoplasma pneumoniae and bronchoalveolar lavage fluid in children with pneumonia. Methods Retrospective analysis of this hospital from January 2015 to June 2017 of all 168 cases of submission was conducted. The Mycoplasma pneumoniae DNA in bronchoalveolar lavage fluid was detected by PCR， and the positive rates were analyzed by age and gender， and there was no difference between them. Results The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae detected by bronchoalveolar lavage fluid was 25.5%， the masculine positive rate was 27.3%， the female positive rate was 23.2%， and the positive rate was highest between 4 to 6 years old， reaching 53.3%， less than 1 years old， the lowest positive rate. Conclusion The total positive rate of Mycoplasma pneumoniae was not detected by bronchoalveolar lavage fluid， there was no difference in gender， and the infection rates were different in different age groups.

[Key words] Pneumonia； BALF； Mycoplasma pneumoniae

兒童支氣管肺炎作為常見的幼兒下呼吸道感染性疾病，主要是由病原體感染所致，無(wú)論是發(fā)病率還是死亡率都相對(duì)比較高，對(duì)于幼兒的生命安全和身體健康有著很大的威脅。調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，每年全球大概有100 萬(wàn)～200萬(wàn)的兒童是因?yàn)樾悍窝字滤繹1-2]，其中肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）占兒童類肺炎中的比例在20%～40%，并且這一比例隨著兒童年齡的增加而有上升的趨勢(shì)[3-4]。從肺炎的診治情況來(lái)看，目前臨床診斷MPP感染通常仍然采用血清學(xué)方法，而這種診斷方法受到抗體出現(xiàn)的時(shí)相等多方面因素影響的概率比較大[5-6]，進(jìn)而對(duì)支氣管肺炎的診治造成了一定的干擾。支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）是以纖維支氣管鏡嵌入到肺段或亞段支氣管水平反復(fù)以無(wú)菌生理鹽水灌洗回收的液體，對(duì)肺泡灌洗液對(duì)行肺炎支原體檢測(cè)并分析分布作為研究肺部疾病病因發(fā)病機(jī)制是診斷評(píng)價(jià)療效和判斷預(yù)后的一項(xiàng)手段，其檢測(cè)結(jié)果對(duì)促進(jìn)患兒的治療、用藥、康復(fù)、減少并發(fā)癥有極大的幫助。利用PCR方法直接檢測(cè)肺炎支原體DNA，是現(xiàn)階段最有效的檢測(cè)方法，具有低成本、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，該文即是對(duì)2015年1月—2017年6月間東莞市婦幼保健院168例送檢的BALF進(jìn)行進(jìn)行肺炎支原體DNA檢測(cè)，現(xiàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果總結(jié)分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧分析該院所有送檢168例，BALF樣本利用熒光PCR方法檢測(cè)肺炎支原體DNA，BALF樣本按患兒性別設(shè)男95例、女73例兩組，按不同年齡階段把受檢患兒分為<1歲72例、1～3歲43例、4～6歲30例、≥7歲23例共4個(gè)年齡組。

1.2 樣本采集

所有患兒均符合文獻(xiàn)[7]《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》支氣管鏡檢查的適應(yīng)證，予電子支氣管鏡檢查。采用Olympus公司生產(chǎn)的EVIS LUCERA CV-260 系列型電子支氣管鏡。纖維支氣管鏡檢查，術(shù)前6 h禁食，予以靜脈鎮(zhèn)靜加局部麻醉的方法，采用2%利多卡因咽喉部局麻，纖維支氣管鏡經(jīng)鼻、咽喉、聲門進(jìn)入氣道，觀察支氣管形態(tài)，37℃生理鹽水灌洗至炎癥嚴(yán)重的肺段，1.0 mL/kg 至少灌洗3次，隨即負(fù)壓吸引以獲取BALF，標(biāo)本置一次性無(wú)菌硅化收集器中。

1.3 檢測(cè)方法

BALF檢測(cè)：主要利熒光PCR方法，以MP保守基因片段設(shè)計(jì)特異引物及特異Taqman探針，采用ABI 7500 FAST熒光PCR儀，項(xiàng)目試劑來(lái)自廣州達(dá)安基因科技有限公司，將BALF標(biāo)本充分振蕩搖勻，吸取液體轉(zhuǎn)至1.5 mL離心管中，1 200 r/min離心5 min，棄上清液，取沉淀加入50 μL核酸提取液，混勻后2 000 r/min離心10 s，100℃干浴10 min，12 000 r/min離心10 min，2 μL上清液加入43 μL反應(yīng)液中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。設(shè)備操作嚴(yán)格按照說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別較

168例肺泡灌洗液檢測(cè)肺炎支原體結(jié)果顯示43例陽(yáng)性，總的陽(yáng)性率為25.6%。男性患樣樣本95例，陽(yáng)性26例，陽(yáng)性率為27.3% （26/95），女性患樣樣本73例，陽(yáng)性17例，陽(yáng)性率為23.2%（17/73），統(tǒng)計(jì)顯示不同性別MP陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.361，P=0.548）。見表1。

2.2 不同年齡段比較

統(tǒng)計(jì)顯示不同年齡段MP陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=24.5，P<0.05），其中4～6歲年齡段陽(yáng)性率最高，達(dá)到53.3%（16/30），小于1歲年齡段陽(yáng)性率最低。見表2。

2.3 不同性別、年齡段比較

統(tǒng)計(jì)顯示，相同年齡段，不同性別MP陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)顯示相同性別各年齡段陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，男性組和女性組都顯示小于1歲的陽(yáng)性率明顯低于4～6歲年齡段。見表3。

3 討論

小兒肺炎是兒科常見病，是嬰幼兒死亡的常見原因，在眾多引起小兒肺炎的因素中，病原體感染占很大的比例，而在病原體感染的肺炎中，MPP肺炎所占的比例在10%～20%，且呈現(xiàn)出逐年增加的趨勢(shì)，在流行年份更是高達(dá)30%。在發(fā)病的時(shí)間方面，MPP肺炎全年均可發(fā)生[8-9]。相關(guān)研究表明，MPP的發(fā)病率近年來(lái)呈現(xiàn)出逐漸增高的趨勢(shì)，并且重癥患者的比例也在逐年增長(zhǎng)，而MPP治愈后通常會(huì)帶有諸如閉塞性支氣管炎、閉塞性細(xì)支氣管炎、支氣管擴(kuò)張及透明肺等后遺癥，對(duì)于兒童的身體健康成長(zhǎng)和發(fā)育產(chǎn)生重大的威脅[10]。對(duì)于肺炎支原體的檢測(cè)臨床主要有檢測(cè)血清IgM抗體，雖然該方法操作起來(lái)相對(duì)比較簡(jiǎn)單，所需要的時(shí)間也相對(duì)比較短，但是這種方法的敏感性不高，IgM抗體一般在感染后7～10 d才會(huì)出現(xiàn)，體內(nèi)存在時(shí)間長(zhǎng)，感染控制后，抗體仍可存在2個(gè)月余，且免疫功能低下者可能出現(xiàn)抗體產(chǎn)生不足，容易導(dǎo)致結(jié)果檢測(cè)失??；另外抗體滴度的高低與臨床癥狀輕重的相關(guān)性不高，而且抗體檢測(cè)容易出交叉反應(yīng)而出現(xiàn)假陰性。還有一種是咽拭了標(biāo)本檢測(cè)肺炎支原體DNA，但其標(biāo)本采集有局限性，不能準(zhǔn)確表達(dá)下呼吸道病原體，而且對(duì)取材操作要求很高。鼻咽拭子雖可反映上、下呼吸道感染，但對(duì)上呼吸道感染更敏感，而BALF是直接從下呼吸道感染部位獲取的標(biāo)本，對(duì)兒童肺炎病原學(xué)診斷具有重要意義[11]，BALF是應(yīng)用纖維支氣管鏡進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，利用支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行病原體直接檢測(cè)，對(duì)一些下呼吸道疾病和診斷、病情觀察和預(yù)后判斷開辟了一條新途徑。BALF在肺部感染的病原學(xué)診斷中價(jià)值較高，該文即是利用BALF對(duì)引起小兒支氣管肺炎的常見肺炎支原體進(jìn)行DNA檢測(cè)，分析168例BALF檢測(cè)MP-DNA結(jié)果顯示43例陽(yáng)性，總的陽(yáng)性率為25.6%，低于陳微等研究報(bào)道的陽(yáng)性率（80.0%）[12]，可能與所有BALF患兒是普通肺炎患兒，未進(jìn)行篩選，統(tǒng)計(jì)顯示感染率無(wú)性別差異，對(duì)各年齡階段的陽(yáng)性率的研究，未見報(bào)道，該文是第一次涉及，4～6歲年齡段陽(yáng)性率最高，達(dá)到53.3%（16/30），符合陽(yáng)性率隨年齡而增加的報(bào)道，小于1歲年齡段陽(yáng)性率最低。

綜上所述，BALF細(xì)胞學(xué)計(jì)數(shù)和MP耐藥基因檢測(cè)對(duì)兒童RMPP早期識(shí)別有一定的參考價(jià)值。對(duì)于BALF檢測(cè)項(xiàng)目方面，本文只涉及到MP-DNA檢測(cè)，其實(shí)可以拓展到很多項(xiàng)目的檢測(cè)，如肺炎衣原體、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等，為臨床這些病原體感染的肺炎開辟了一個(gè)新的標(biāo)本類型檢測(cè)方案，彌補(bǔ)現(xiàn)有血清、咽拭了標(biāo)本檢測(cè)方面的不足。而且，由于該研究納入病例數(shù)量較少，且觀察時(shí)間短，故存在一定的局限性。相關(guān)結(jié)論還需要多中心大樣本的臨床資料進(jìn)一步探究。

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（收稿日期：2017-10-24）