中草藥益生菌復(fù)合制劑對(duì)生長(zhǎng)豬血液常規(guī)、血清生化和血清免疫指標(biāo)的影響

段明房， 胡紅偉， 閆凌鵬，麻嘯濤，楊京娥，黨亞朋， 李自茹， 趙　帥，周振紅

（1.山西大禹生物工程股份有限公司，山西芮城044600；2.平陸縣宏遠(yuǎn)養(yǎng)豬專(zhuān)業(yè)合作社，山西平陸044300）

中草藥用于動(dòng)物保健，具有在動(dòng)物體內(nèi)及其產(chǎn)品中無(wú)毒副殘留，對(duì)機(jī)體不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)勢(shì)（王冉，2015），同時(shí)中草藥資源豐富，使用成本不高。蒲公英和魚(yú)腥草均為藥食同源藥材，且具有清熱解毒、抗菌、抗炎的功效。蒲公英中的多種活性成分，如綠原酸、糖類(lèi)、膽堿以及皂苷等，具有顯著抑菌、抑制腫瘤、抗氧化、抵抗炎癥等功效（林云等，2011；Budzianowski等，1997）， 而且能夠明顯地促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)和泌乳 （劉杰等，2010；李玲等，1998）。魚(yú)腥草和蒲公英類(lèi)似，性辛，味微寒，具有清熱解毒、消癰排膿和利尿通淋等功效（孫謙等，2014）。研究報(bào)道，切除脾臟小鼠灌胃魚(yú)腥草素能增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提高血清溶血素水平，表明魚(yú)腥草素可以增強(qiáng)脾切除致免疫功能低下小鼠的特異性、非特異性免疫功能（邵蘭等，1999）。劉志昌等（2015）研究表明，合成魚(yú)腥草素能提高肉雞免疫器官指數(shù)、血清中白細(xì)胞介素-2、4含量和抗體滴度。另外，大量研究表明，益生菌具有提高動(dòng)物免疫器官指數(shù)，增強(qiáng)血液免疫因子的活性，加強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體綜合免疫能力的作用（劉輝等，2015；劉虎傳等，2012）。但中草藥和益生菌共同作用對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫影響的報(bào)道較少，因此本研究以蒲公英和魚(yú)腥草等中草藥材為主體，復(fù)配益生菌，研究復(fù)合制劑對(duì)生長(zhǎng)豬血液常規(guī)、血清生化和血清免疫指標(biāo)的影響，為中草藥和益生菌的綜合開(kāi)發(fā)提供一定參考。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料中草藥益生菌復(fù)合制劑 （活抗，HK）由山西大禹生物工程股份有限公司生產(chǎn)。HK是以蒲公英（62%）、魚(yú)腥草（23%）等中草藥材細(xì)粉碎以后與糞腸球菌、枯草芽孢桿菌和酵母細(xì)胞壁多糖等混合而成。除中草藥材以外產(chǎn)品主要成分及衛(wèi)生指標(biāo)見(jiàn)表1。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)選取體重為 （55±5）kg的健康杜×長(zhǎng)×大三元雜交豬100頭，隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組兩組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭豬。對(duì)照組飼喂玉米豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在每1000 kg基礎(chǔ)日糧中加入3 kg HK。飼養(yǎng)管理按照試驗(yàn)場(chǎng)日常管理進(jìn)行，試驗(yàn)周期40 d。

表1　HK主要組成成分及衛(wèi)生指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選 1頭豬，共10頭豬，前腔靜脈采血，先用普通真空采血管采血 5 mL（3500 r/min離心 5 min，分離血清，保存在-20℃ 冰箱），用于測(cè)定血清指標(biāo)，然后用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管采血5 mL，用于血液常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)。

基礎(chǔ)日糧參考中國(guó)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn) （NY/T 65-2004）中的生長(zhǎng)育肥豬標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì)，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。

表2　日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1血常規(guī)指標(biāo)、血清生化指標(biāo)檢測(cè)樣品送至芮城縣中醫(yī)院檢測(cè)。

白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比、中間細(xì)胞百分比、粒細(xì)胞百分比、紅細(xì)胞、血紅蛋白、平均血紅蛋白濃度、平均血紅蛋白含量、紅細(xì)胞平均體積、紅細(xì)胞分布寬度CV、紅細(xì)胞分布寬度SD、紅細(xì)胞壓積、血小板、血小板平均體積、血小板分布寬度、血小板壓積、大血小板比率用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比、尿素氮、葡萄糖、鈣用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.3.2血清免疫指標(biāo)檢測(cè)免疫球蛋白A、M、G，α-腫瘤壞死因子 （TNF-α）、β-干擾素 （IFN-β）、CD3、CD4、白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）用 ELISA 方法檢測(cè)，試劑盒由上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司提供；酶標(biāo)儀（Multiskan FC）為賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司生產(chǎn)。

1.4統(tǒng)計(jì)分析采用Excel和SAS 9.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算和方差分析。

2　試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1HK對(duì)生長(zhǎng)豬血常規(guī)指標(biāo)的影響從表3可知，在生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后血小板壓積顯著下降了48.20%（P＜0.05），但是對(duì)其他血常規(guī)指標(biāo)沒(méi)有顯著性影響。

表3　HK對(duì)生長(zhǎng)豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

2.2HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)的影響從表4可知，生長(zhǎng)豬飼料中添加HK組血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和白蛋白濃度提高58.58%和13.80%（P＜0.01）；血清白球比顯著提高 19.40%（P＜0.05）；但是血清葡萄糖濃度顯著下降了21.24%（P＜0.05）。然而對(duì)其他指標(biāo)沒(méi)有顯著影響。

表4　HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清免疫指標(biāo)的影響從表5可知，在生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后，血清中免疫球蛋白M含量提高了15.27%（P＜0.05）；白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-6、β-干擾素的含量分別極顯著提高了 33.32%、33.30%、76.77%（P ＜ 0.01）；但是血清中CD3含量顯著降低了 11.19%（P＜0.05）。另外，其他指標(biāo)兩組之間差異不顯著。

表5　HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清免疫指標(biāo)的影響

3　討論

3.1HK對(duì)生長(zhǎng)豬血常規(guī)指標(biāo)的影響血液中各種生化組分是新陳代謝的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量的變化可反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)新陳代謝機(jī)能和生理活動(dòng)的規(guī)律。影響這些指標(biāo)變化的因素也很多，例如，運(yùn)動(dòng)、飲食、疾病以及一些藥物等。

研究表明，藥物在消化道消化吸收后，可通過(guò)血液循環(huán)輸送到各臟器以及組織，藥物的功能組分可以利用影響造血功能、激素分泌及直接破壞血細(xì)胞等方式致使血細(xì)胞數(shù)量或形態(tài)改變，而且有些是可逆的（王付等，2015）。血小板在身體正常狀態(tài)下的數(shù)量及形態(tài)分布變化較小，其功能主要表現(xiàn)在止血、血栓形成、傷口閉合、炎癥發(fā)生等方面。胡興義等（2017）研究證實(shí)，給哺乳仔豬灌服復(fù)合益生菌制劑可以顯著提高血小板壓積（PCT），但血小板平均體積（MPV）和血小板總數(shù)（PLT）雖有提升趨勢(shì)，但差異不顯著。由于PCT＝MPV×PLT，因此PCT變化應(yīng)該是PLT或MPV變化所致，本試驗(yàn)結(jié)果表明，生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后，顯著降低了PCT，但PLT或MPV變化不顯著，而且對(duì)其他血常規(guī)指標(biāo)均沒(méi)有顯著性影響。因此，HK導(dǎo)致的PCT變化對(duì)動(dòng)物機(jī)體實(shí)質(zhì)性影響還需進(jìn)一步研究。

3.2HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)的影響血液生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物各組織器官的功能狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)代謝水平和生產(chǎn)性能。總蛋白、球蛋白、白蛋白、白球比、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等指標(biāo)主要可反映機(jī)體的肝功能健康狀況；尿素氮可反映機(jī)體腎功能健康狀態(tài)和蛋白質(zhì)代謝狀況。血清白蛋白的生理功能主要體現(xiàn)在維持膠體滲透壓，體內(nèi)代謝物質(zhì)運(yùn)輸、免疫、修復(fù)受損組織等方面，而且血清白蛋白含量與動(dòng)物生長(zhǎng)速度呈正相關(guān)（周洪松等，1994）。血清球蛋白含量反映了動(dòng)物機(jī)體的免疫水平。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶是廣泛存在于動(dòng)物線粒體中的重要氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，其活性變化可以反映肝細(xì)胞和心臟細(xì)胞受損傷程度。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶可參與機(jī)體蛋白質(zhì)新陳代謝的酶，可以促進(jìn)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸轉(zhuǎn)化。機(jī)體未受到損傷時(shí)，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶濃度很低，且非常靈敏。當(dāng)心臟和肝臟組織細(xì)胞受損時(shí)，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶大量進(jìn)入血清，因此活性升高。但一般認(rèn)為，當(dāng)乙肝患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高到正常值上限的2倍以上時(shí)才有診斷價(jià)值 （呂學(xué)琴等，2012）。

研究發(fā)現(xiàn)，魚(yú)腥草和蒲公英均具有抗炎作用，能夠有效減輕機(jī)體損傷（陳婧等，2014；杜軍英等，2012）。然而本試驗(yàn)中，添加HK后，豬血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著提高了58.58%，但沒(méi)達(dá)到對(duì)照組上限的2倍，說(shuō)明這種變化是非病理性的，原因可能是中草藥和益生菌共同作用促進(jìn)了丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶分泌。另外，血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著提高能夠促進(jìn)氨基酸代謝，進(jìn)而提高蛋白質(zhì)合成的速率，同時(shí)白蛋白和白球比水平均顯著提高，進(jìn)一步說(shuō)明了HK可以促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收利用。然而，血糖濃度顯著下降了21.24%，原因可能是蒲公英和魚(yú)腥草能夠阻礙胰島素生成以及抑制腸道中葡萄糖吸收，進(jìn)而導(dǎo)致了血糖濃度有所降低（李雪石等，2013；趙堅(jiān)華等，2010；劉艷旭等，2010）。總之，在生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后可以促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

3.3HK對(duì)生長(zhǎng)豬血清免疫指標(biāo)的影響體液免疫是機(jī)體特異性免疫的一個(gè)重要組成部分，抗體對(duì)病原及毒素清除、免疫調(diào)節(jié)、吞噬功能等作用均與免疫球蛋白含量成正相關(guān)關(guān)系。血清中Ig A、Ig G、Ig M含量的多少?zèng)Q定機(jī)體體液免疫水平。Ig M主要由B細(xì)胞產(chǎn)生，是B細(xì)胞表面表達(dá)分泌最早的抗體，而且在機(jī)體早期免疫防護(hù)中起重要作用（楊帆等，2011；Nordtveit等，1994）。楊銳等（2013）研究證實(shí)，生長(zhǎng)肉兔日糧中添加蒲公英多糖可以提高免疫蛋白M、G含量。另外，研究表明益生菌也具有提高豬免疫水平功效，在豬日糧中添加益生菌可以顯著提高免疫球蛋白A、M和G含量（劉輝等，2015；王博等，2015；劉虎傳等，2012）。本試驗(yàn)中，添加HK顯著提高了免疫蛋白M的濃度，可能是由于魚(yú)腥草和蒲公英中魚(yú)腥草素、綠原酸、多糖等活性成分具有一定的免疫調(diào)節(jié)能力，協(xié)同酵母細(xì)胞壁多糖（Shen等，2009），益生菌及其代謝物共同作用動(dòng)物機(jī)體，從而提高了免疫蛋白M的含量。

CD3和CD4分子均是T細(xì)胞重要的表面標(biāo)志，也是T細(xì)胞系發(fā)揮作用的最早信號(hào)（Edward等，1996）。因此CD3和CD4分子含量可以間接反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。CD3＋、CD4＋T淋巴細(xì)胞在輔助B淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)、自身免疫、超敏反應(yīng)、調(diào)節(jié)炎癥和抗腫瘤等方面發(fā)揮著重要作用（Swain 等，2012；李曉英等，2012；Zhu等，2008； Nurieva等，2008；Veldhoen 等，2008）。 研究表明，添加蒲公英多糖，可以提升雞血液T淋巴細(xì)胞表達(dá)和CD4＋T淋巴細(xì)胞水平（王坤等，2014；陳文英等，2011）。另外，黃俊文等（2005）在斷奶仔豬使用甘露寡糖和納豆菌復(fù)合制劑，顯著提高了CD3＋、CD4＋T淋巴細(xì)胞含量。然而本試驗(yàn)在生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后顯著降低了CD3含量，而CD4分子沒(méi)有顯著性變化，可能與中草藥使用量和益生菌種類(lèi)有關(guān)，機(jī)理需要進(jìn)一步研究。

細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。IL-2主要促進(jìn)T細(xì)胞增殖、介導(dǎo)細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)。IL-4和IL-6具有刺激B細(xì)胞生長(zhǎng)增殖，產(chǎn)生免疫球蛋白，從而促進(jìn)體液免疫應(yīng)答功能（Smith等，2013；Diehl等，2000），同時(shí)能夠抑制 Th1型細(xì)胞的分化而促進(jìn)Th2型細(xì)胞分化，起免疫抑制的作用。干擾素是機(jī)體受到滅活的或活的病毒作用于易感細(xì)胞后，由易感細(xì)胞基因組編碼而產(chǎn)生的一種多功能活性糖蛋白。IFN-β可以通過(guò)抑制某些病毒的吸附、脫殼、轉(zhuǎn)錄、釋放等不同環(huán)節(jié)來(lái)起到抗病毒作用。炎癥和免疫是機(jī)體對(duì)外界刺激的兩種不同機(jī)理的應(yīng)答，兩者雖然開(kāi)始時(shí)間不同，但在炎癥發(fā)生的部位、細(xì)胞、分子水平上是密切結(jié)合、共同作用的。魚(yú)腥草、蒲公英等中草藥對(duì)免疫調(diào)節(jié)是個(gè)雙向過(guò)程，既具有促進(jìn)抗體分泌，提高免疫功效，又可以抑制炎癥的發(fā)生 （Du等，2012；杜軍英等，2012；Kim等，2009）。本試驗(yàn)結(jié)果表明HK可顯著提高血清中IL-4、IL-6和IFN-β含量，說(shuō)明HK具有促進(jìn)B細(xì)胞分泌，抑制炎癥過(guò)度反應(yīng)的作用，又可以顯著提高血清中IFN-β含量，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體抗病毒的能力。總之，在生長(zhǎng)豬飼料中添加HK后可以提高豬免疫力，而且具有雙向調(diào)節(jié)功能。

4　結(jié)論

在生長(zhǎng)豬日糧中添加0.3%HK不僅對(duì)其血液常規(guī)沒(méi)有實(shí)質(zhì)影響，而且能夠促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化，提高動(dòng)物免疫因子含量。

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