豬瘟疫苗在豬場的免疫評估

翟志安，崔尚金

（中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，北京 100000）

通過對近10年來的調查，國內豬場的豬瘟疫苗免疫覆蓋率可以說是100%，沒有發現哪個豬場不免疫豬瘟疫苗。但免疫程序卻有較大不同，次數不同，劑量不同，間隔時間不同，后備豬群：配種前免疫2～3次，1～4頭份/次；種豬群大概有2種免疫方式，l)全群免疫：每次1～4頭份不等，①全群普免，每年3～4次，每3～4月1次；②春秋普防，3～4月份，免疫2次，間隔3～4周；9～10月份，免疫2次，間隔3～4周；2)跟胎免疫：每次1～4頭份不等，①跟胎1次，產后2～4周；②跟胎2次，產后2～4周，間隔3～4周，第2次免疫。商品豬群，有些豬場仍然采取乳前免疫(超前免疫)l頭份；仔豬群首免時間，3～5周齡，1～2頭份；二免時間：7～9周齡，1～2頭份[1]。

在國內豬場，豬瘟疫苗得以廣泛應用，但免疫效果到底如何呢？許多中小型豬場基本是通過臨床是否發病來判斷疫苗效果；集團化、大型豬場大都進行實驗室檢測予以判定。2017年第2季度對4個不同省份28個豬場的豬瘟抗體檢測數據進行分析，結果發現不同胎次組母豬豬瘟抗體水平不同(見表1)：4～7胎母豬抗體水平顯著低后備母豬和l～3胎母豬。所以說，母豬胎次對豬場豬瘟杭體合格率有重要影響，及時淘汰生產繁殖性能差的老齡母豬不僅有助于提高母豬場生產成績，也有助于提升豬群豬瘟抗體水平。

同樣的這28個豬場，其商品豬群不同周齡段的豬瘟抗體水平也有不同，如表2所示，3～4周齡、6～7周齡段的豬群豬瘟抗體水平偏低。在仔豬首免前的抗體，主要是母源抗體，可見母源抗體在3～4周齡豬群中已有相當大的消失；6～7周齡的豬群豬瘟抗體有所下降，這部分豬群大都是首免1～2周后不等的豬群；10周齡豬群，是首免4～5周不等的豬群，也是加強免疫前后1周左右的豬群。12周齡豬群抗體陽性率最高。這些抗體是疫苗免疫產生還是由野毒感染刺激產生，該檢測技術沒有進行區分。總體來看，商品豬群豬瘟抗體陽性率并不高。

在2016年對23省份457份血清樣品檢測(圖1，李曉成研究員資料)發現，保育豬群的抗體陽性率最低，其次是生長育肥豬群。

表1　不同胎次母豬抗體水平

表2　不同周齡段豬瘟抗體水平

圖1　2016年不同生長階段豬群抗體陽性率

母豬群的抗體陽性率與2017年的數據非常接近，差異較大的是哺乳仔豬群與上述3～4周齡豬群的抗體陽性率。總之，種豬群免疫率100%，陽性率80%以上；保育豬群陽性率較低，低于70%。仔豬群首免(斷奶前后)與加強免疫之間，大約有4～5周時間，抗體陽性率比較低，這是個普遍現象。

在這樣的免疫狀態下，某些豬場雖然豬群100%免疫，但仍有豬瘟發生的情形。說明這樣的免疫狀態是不安全的，是疫苗質控方面，如抗原含量及批次生產的穩定性，出現了什么問題？還是疫苗冷鏈管理(疫苗運輸、貯存、稀釋、注射）出現了漏洞？或許，疫苗毒株保護力對現在豬場野毒保護力下降？免疫程序制定、修訂、實施的不夠合理、到位？群免疫密度沒有達到100%？免疫操作粗放？還是機體免疫應答弱？豬群健康狀態(營養、毒素、應激、其他疾病……)不佳？或者豬場生物安全措施管理疏忽？豬群流動管理異常？目前，我們尚沒有一個很好的評估機制來全面評估這些問題。一旦出現問題，不容易正確全面地找出原因，很多時候就是采取一個模糊策略，問題解決了以后，也不知道采取的手段哪些是有效的；還有個問題，就是大多數實驗室檢測的數據是一個時間點，而不是一個連續的動態的線，不能借助檢測數據等評估手段正確預警。

當下我們所要做的，就是要制定適合豬群的合理免疫程序，發揮出現有疫苗的應有效果。值得說明的是，免疫程序制定應建立在科學檢測的基礎上，必須了解：1)豬瘟抗體消長規律；2)豬體排毒方式；3)豬群臨床癥狀；4)豬瘟疫苗起效時間和免疫保護時長以及其他疫苗對豬瘟疫苗的影響；5)存在的其他豬病免疫程序制定后，要對免疫實施后的各生產階段豬群進行抗體、病原監測，及生產成績評估，根據這些監測、評估的數據，進行分析，對免疫程序適時做出調整[1]；6)是否有其他免疫抑制病的干擾。

那么，如何科學地檢測豬瘟疫苗的免疫效果？下面就介紹一下不同試劑盒對豬瘟疫苗免疫效果檢測評價。

1　4種檢測方法評價疫苗免疫效果

如表3所示，67份豬瘟疫苗免疫血清樣品經中和試驗、IHA（間接血凝試驗）、間接ELISA和阻斷ELISA檢測后，分別檢測出陽性樣品55份、48份、56份和59份，陽性率分別為82.09% ， 71.64%， 83.58% 和 88.06%，陽性率均大于我國農業部要求的豬瘟群體免疫合格率70.0%的標準，所抽檢的豬群豬瘟疫苗免疫合格。

如表4所示，IHA、間接ELISA、阻斷ELISA與中和試驗的總符合率分別為89.55%、92.53%和94.03%，符合率均較高。其中在陽性抗體的符合率方面，阻斷ELISA與中和試驗的陽性抗體符合率達100%，而在陰性抗體的符合率方面，IHA與中和試驗的陰性抗體符合率達100%。以IHA的符合率最低，敏感性最低，以阻斷ELISA的符合率最高，敏感性最強[2]。

2　3種檢測試劑盒與中和試驗結果評價

中和試驗是《中國獸藥典》中法定的豬瘟抗體陰性豬篩選方法，可以認為是豬瘟抗體檢測的“金標準”，其準確性無需置疑，但該方法需要用豬瘟活毒工作抗原和試驗兔進行檢測，檢測結果易受試驗豬個體差異、健康狀況和飼養環境等因素影響，且檢測周期長、工作量大及成本高。隨著現代分子生物學和免疫學技術的快速發展，各種豬瘟抗體檢測試劑盒不斷得到開發和推廣應用，IHA、間接ELISA和阻斷ELISA 3種抗體檢測試劑盒與中和試驗的符合率均在89%以上，3種抗體檢測試劑盒均具有良好的準確性。IHA試劑盒檢測67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率為71.64%，明顯低于中和試驗、間接ELISA、阻斷ELISA方法的陽性率，IHA方法采用全病毒作為抗原，受抗原制備過程與病毒純化等方面的限制，導致了IHA方法敏感性較低，同時該方法還存在血清樣品需經過滅活處理，檢測結果肉眼判讀、誤差大等缺陷，但該方法操作簡便、檢測反應時間短且無需特殊儀器設備，特別適合基層實驗室操作。ELISA采用基因工程重組蛋白作為抗原，其檢測的敏感性和特異性均大大提高，間接ELISA、阻斷ELISA試劑盒檢測67份豬瘟疫苗免疫豬血清樣品的陽性率分別為83.58%和88.06%，阻斷ELISA的敏感性較間接ELISA更高，且ELISA方法具有微量、高通量等優點，特別適合臨床大批量樣品的檢測，但ELISA方法尤其是阻斷ELISA方法操作較復雜，操作人員需要具有一定的獸醫技術水平，且需要酶標儀等儀器設備，隨著我國基層獸醫實驗室的不斷建設與完善，ELISA檢測試劑盒將具有廣闊的發展空間和應用前景。綜合來看，3種檢測試劑盒均具有各自的優缺點，不同實驗室可根據自身試驗條件合理選擇，或選擇2種檢測試劑盒聯合使用，確保檢測結果的準確與可靠。

表3　4種檢測方法的檢測結果

表4　與中和試驗的抗體陽性符合率

3　新型試劑盒診斷技術

王澤洲博士介紹了應用鑭系元素做熒光標記物建立一種既具有金標層析技術簡單方便、快捷，又具有ELISA準確、特異、敏感的豬瘟抗體鑭系免疫層析檢測試劑盒。鑭系熒光免疫層析方法(LFICA)是在時間分辨熒光免疫分析基礎上建立起來的一種超微量快速免疫檢測技術，它集合了酶標記技術、放射標記技術和同位素標記技術的優點，具有靈敏度高、特異性強、穩定性好、無污染，且測定范圍寬，試劑盒壽命長，操作簡單和非放射性的優點，越來越受到各科學領域科研工作者的關注。

Aruna Ambagala教授介紹了加拿大豬瘟的診斷和研究情況，詳細介紹了新開發出的一種快速檢測豬瘟的試劑盒，常溫保存、60 min出結果，在豬瘟感染后的2 d就可以檢測出、非常敏感，唯一的缺點是每次檢測的樣品數較少，只能檢測8個樣品[3]。

4　結語

豬瘟疫苗在我國養殖場已經普免，但免疫程序和免疫效果各有不同，還存在許多弊端和隱形的問題需要解決，所以要及時診斷，科學選用疫苗[4]，制定科學合理的免疫程序，嚴格按照使用說明書正確使用疫苗，并利用先進的試劑盒進行免疫效果評估，不斷優化免疫程序，不斷提高陽性抗體率和抗體維持保護時間。

[1] 朱連德.國內豬場豬瘟免疫現狀及控制、凈化所面臨的主要挑戰[J].豬業科學 ，2017，34(11)：54-55.

[2] 范振濤.3種豬瘟抗體檢測試劑盒的比較與分析[J].中國動物保健 ，2017，19(11)：15-17.

[3] 張金輝.2107豬瘟防控技術研討會精彩報告薈萃[J].豬業科學 ，2017，34(11)：36-39.

[4] 胡圣林，張智瞳.豬瘟防控存在的問題及對策措施[J].中國畜牧獸醫文摘 ，2017，33(11)：139-143.