豬流行性腹瀉病毒、偽狂犬病毒和大腸桿菌混合感染的診斷

丁尊俄，周碧君，王開功，胡興義，張 海，張 旭

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

2017年1月貴州省某豬場的新生仔豬出現精神沉郁、消瘦、水樣腹瀉、嘔吐等臨床癥狀。為了解該豬場的疫病感染狀況，根據剖檢病理變化、實驗室診斷等方法，確診為豬流行性腹瀉病毒、偽狂犬病毒和大腸桿菌混合感染。筆者就本病例診治過程做出總結與分析，以期為類似病例診斷做出一定的實踐參考。

1　發病情況

該豬場存欄豬約1500頭，2016年12月下旬3日齡左右哺乳仔豬約20%發生水樣腹瀉，10日齡哺乳仔豬約50%發生水樣腹瀉和嘔吐，部分哺乳仔豬已經死亡，另外母豬也有水樣腹瀉發生。母豬產前使用過腹瀉疫苗進行跟胎免疫，但效果不佳。

2　臨床癥狀

發病仔豬大都出現消瘦、水樣腹瀉、四肢無力、皮膚蒼白、精神萎靡、被毛粗亂、甚至食欲廢絕。根據臨床癥狀初步懷疑是豬病毒性腹瀉、細菌和偽狂犬病毒感染。

3　病理剖檢變化

通過對2頭1月齡內的仔豬進行剖檢發現：豬只的腹股溝淋巴結充血（見圖1）；肝臟壞死（見圖2）；肺臟壞死（圖見3）；腎臟針尖狀出血點；腸段充氣腫脹（見圖4）。

圖1　腹股溝淋巴結充血

圖2　肝臟壞死

圖3　肺臟壞死

圖4　腸段充氣、腫脹

圖5　細菌在血平板培養結果

圖6　細菌在麥康凱培養基上菌落形態

4　實驗室診斷

4.1 細菌分離培養及鑒定

將送檢的2頭仔豬的肝臟混合物接種于鮮血瓊脂平板，37 ℃培養16 h，見圓形隆起，邊緣整齊，表面有光澤、濕潤、光滑、灰白色小菌落（見圖5），在鑒別性培養基（麥康凱瓊脂培養基）上形成粉紅色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊的小菌落（見圖6）；將純化后細菌進行革蘭氏染色后鏡檢，為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短小桿菌（見圖7）；取經純培養的細菌在無菌條件下進行三糖鐵試驗，同時接種生化管。三糖鐵試驗結果出現產氣現象，生化試驗結果與典型大腸桿菌一致。

圖74　×100倍革蘭氏陰性桿菌

圖8　部分藥敏試驗結果

表1　分離細菌藥敏試驗結果

圖9　豬流行性腹瀉病毒RT-PCR 擴增結果

圖10　偽狂犬病毒RT-PCR擴增結果

4.2 藥物敏感試驗

將純化的革蘭氏陰性桿菌（大腸桿菌）接種于普通瓊脂平板進行藥物敏感試驗，結果（見圖8、表1）顯示，豬病速治穿心蓮、復方磺胺和氟苯尼考等藥物可作為本菌的敏感藥物使用。

4.3 病原核酸檢測

取送檢的2頭1月齡內的仔豬小腸和胃內容物加入適量的DEPC水研磨成勻漿，分別離心取上清，采用北京世紀元亨RNA試劑盒提取總RNA，分別針對豬流行性腹瀉病毒(目的片段964 bp)、豬輪狀病毒（目的片段270 bp）和豬傳染性胃腸炎（目的片段859 bp）進行RT-PCR擴增；同時用北京世紀元亨DNA試劑盒提取總DNA，針對偽狂犬病毒（目的片段217 bp）進行PCR擴增。其擴增產物均通過1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結果見圖9、圖10。送檢的2 頭1月齡內仔豬均檢出豬流行性腹瀉病毒特異性片段，其中1頭檢出了偽狂犬病毒特異性片段，豬輪狀病毒和豬傳染性胃腸炎病毒未檢出。

5　結果與討論

通過對送檢病豬進行豬流行腹瀉、豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒、偽狂犬病原核酸檢測和細菌分離鑒定。結果顯示，送檢的2頭1月齡內仔豬中，豬流行性腹瀉病毒和偽狂犬病毒為陽性，且有大腸桿菌感染；豬傳染性胃腸炎病毒為陰性和豬輪狀病毒為陰性。豬流行性腹瀉和偽狂犬疫病因尚無特效藥進行治療，只能通過目前可行的疫苗免疫接種來預防該病的發生[1]；對于豬致病性大腸桿菌，它被認為是養豬業最常見的疫病，可引起仔豬黃、白痢和水腫病等[2]，可以選擇對其敏感性高的藥物，如：氟苯尼考、復方磺胺等交替使用。同一豬場感染多種病原也來越常見，養豬人不容忽視[3-4]。因此，在做好生物安全措施，加強飼養管理的同時，也要注重疫苗免疫接種和選擇合理的免疫程序，必要時進行緊急免疫接種，加強保溫，給豬群一個干凈又舒適的環境，減少疫病的發生，從而獲得最大效益。

[1] 陶長城，朱保權，李波. PEDV、PR V和PCV2混合感染引起新生仔豬腹瀉的診治與分析[J].湖北畜牧獸醫 ，2015，36(5)：15-16.

[2] 周華林，熊江林，王長義，等. 豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國畜牧獸醫 ，2009，36(1)：109-111.

[3] 劉洋，庫旭鋼，劉曉麗，等.豬流行性腹瀉病和豬圓環病毒病混合感染的診治[J].中國畜牧獸醫 ，2015，42(10)：2753-2761.

[4] 宋春蓮.PRV和PCV2混合感染仔豬致病特點及豬偽狂犬病防控技術研究[D].揚州：揚州大學，2016.