豬流行性腹瀉病毒、偽狂犬病毒和大腸桿菌混合感染的診斷

丁尊俄，周碧君，王開功，胡興義，張 海，張 旭

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

2017年1月貴州省某豬場(chǎng)的新生仔豬出現(xiàn)精神沉郁、消瘦、水樣腹瀉、嘔吐等臨床癥狀。為了解該豬場(chǎng)的疫病感染狀況，根據(jù)剖檢病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷等方法，確診為豬流行性腹瀉病毒、偽狂犬病毒和大腸桿菌混合感染。筆者就本病例診治過程做出總結(jié)與分析，以期為類似病例診斷做出一定的實(shí)踐參考。

1　發(fā)病情況

該豬場(chǎng)存欄豬約1500頭，2016年12月下旬3日齡左右哺乳仔豬約20%發(fā)生水樣腹瀉，10日齡哺乳仔豬約50%發(fā)生水樣腹瀉和嘔吐，部分哺乳仔豬已經(jīng)死亡，另外母豬也有水樣腹瀉發(fā)生。母豬產(chǎn)前使用過腹瀉疫苗進(jìn)行跟胎免疫，但效果不佳。

2　臨床癥狀

發(fā)病仔豬大都出現(xiàn)消瘦、水樣腹瀉、四肢無(wú)力、皮膚蒼白、精神萎靡、被毛粗亂、甚至食欲廢絕。根據(jù)臨床癥狀初步懷疑是豬病毒性腹瀉、細(xì)菌和偽狂犬病毒感染。

3　病理剖檢變化

通過對(duì)2頭1月齡內(nèi)的仔豬進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)：豬只的腹股溝淋巴結(jié)充血（見圖1）；肝臟壞死（見圖2）；肺臟壞死（圖見3）；腎臟針尖狀出血點(diǎn)；腸段充氣腫脹（見圖4）。

圖1　腹股溝淋巴結(jié)充血

圖2　肝臟壞死

圖3　肺臟壞死

圖4　腸段充氣、腫脹

圖5　細(xì)菌在血平板培養(yǎng)結(jié)果

圖6　細(xì)菌在麥康凱培養(yǎng)基上菌落形態(tài)

4　實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定

將送檢的2頭仔豬的肝臟混合物接種于鮮血瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)16 h，見圓形隆起，邊緣整齊，表面有光澤、濕潤(rùn)、光滑、灰白色小菌落（見圖5），在鑒別性培養(yǎng)基（麥康凱瓊脂培養(yǎng)基）上形成粉紅色、圓形隆起、光滑濕潤(rùn)、邊緣整齊的小菌落（見圖6）；將純化后細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色后鏡檢，為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短小桿菌（見圖7）；取經(jīng)純培養(yǎng)的細(xì)菌在無(wú)菌條件下進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)，同時(shí)接種生化管。三糖鐵試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)產(chǎn)氣現(xiàn)象，生化試驗(yàn)結(jié)果與典型大腸桿菌一致。

圖74　×100倍革蘭氏陰性桿菌

圖8　部分藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表1　分離細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

圖9　豬流行性腹瀉病毒RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果

圖10　偽狂犬病毒RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

4.2 藥物敏感試驗(yàn)

將純化的革蘭氏陰性桿菌（大腸桿菌）接種于普通瓊脂平板進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，結(jié)果（見圖8、表1）顯示，豬病速治穿心蓮、復(fù)方磺胺和氟苯尼考等藥物可作為本菌的敏感藥物使用。

4.3 病原核酸檢測(cè)

取送檢的2頭1月齡內(nèi)的仔豬小腸和胃內(nèi)容物加入適量的DEPC水研磨成勻漿，分別離心取上清，采用北京世紀(jì)元亨RNA試劑盒提取總RNA，分別針對(duì)豬流行性腹瀉病毒(目的片段964 bp)、豬輪狀病毒（目的片段270 bp）和豬傳染性胃腸炎（目的片段859 bp）進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增；同時(shí)用北京世紀(jì)元亨DNA試劑盒提取總DNA，針對(duì)偽狂犬病毒（目的片段217 bp）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其擴(kuò)增產(chǎn)物均通過1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果見圖9、圖10。送檢的2 頭1月齡內(nèi)仔豬均檢出豬流行性腹瀉病毒特異性片段，其中1頭檢出了偽狂犬病毒特異性片段，豬輪狀病毒和豬傳染性胃腸炎病毒未檢出。

5　結(jié)果與討論

通過對(duì)送檢病豬進(jìn)行豬流行腹瀉、豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒、偽狂犬病原核酸檢測(cè)和細(xì)菌分離鑒定。結(jié)果顯示，送檢的2頭1月齡內(nèi)仔豬中，豬流行性腹瀉病毒和偽狂犬病毒為陽(yáng)性，且有大腸桿菌感染；豬傳染性胃腸炎病毒為陰性和豬輪狀病毒為陰性。豬流行性腹瀉和偽狂犬疫病因尚無(wú)特效藥進(jìn)行治療，只能通過目前可行的疫苗免疫接種來(lái)預(yù)防該病的發(fā)生[1]；對(duì)于豬致病性大腸桿菌，它被認(rèn)為是養(yǎng)豬業(yè)最常見的疫病，可引起仔豬黃、白痢和水腫病等[2]，可以選擇對(duì)其敏感性高的藥物，如：氟苯尼考、復(fù)方磺胺等交替使用。同一豬場(chǎng)感染多種病原也來(lái)越常見，養(yǎng)豬人不容忽視[3-4]。因此，在做好生物安全措施，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理的同時(shí)，也要注重疫苗免疫接種和選擇合理的免疫程序，必要時(shí)進(jìn)行緊急免疫接種，加強(qiáng)保溫，給豬群一個(gè)干凈又舒適的環(huán)境，減少疫病的發(fā)生，從而獲得最大效益。

[1] 陶長(zhǎng)城，朱保權(quán)，李波. PEDV、PR V和PCV2混合感染引起新生仔豬腹瀉的診治與分析[J].湖北畜牧獸醫(yī) ，2015，36(5)：15-16.

[2] 周華林，熊江林，王長(zhǎng)義，等. 豬致病性大腸桿菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī) ，2009，36(1)：109-111.

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[4] 宋春蓮.PRV和PCV2混合感染仔豬致病特點(diǎn)及豬偽狂犬病防控技術(shù)研究[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2016.