基于膠體金免疫層析法快速篩查博羅縣水產品中的藥物殘留

梁彬霞，郭荷梅，陳冠禮，李愛群

（1.博羅縣農產品質量安全監督檢測中心，廣東惠州 516100；2.羅陽鎮農產品質量安全監督檢測站，廣東惠州 516100）

隨著水產養殖業的快速發展，我國水產業的國際地位也在逐步提升，但水產品質量安全問題也越來越受關注，水產品質量安全事件也時有發生，它直接關系到消費者身體健康，以及生產者和經營者的利益，甚至影響到社會穩定[1]。目前，水產品藥物殘留超標是危害水產品質量安全的主要因素之一，其具有代表性的藥物殘留種類包括硝基呋喃類、氯霉素、孔雀石綠等[2-3]。因此，如何加強水產品質量安全監控是我國目前面臨的最重要的問題。

博羅縣地處珠三角，是惠州市淡水養殖面積最大的縣區，全縣池塘養殖總面積近9 380 hm2，主要以草魚、鰱魚、鳙魚、羅非魚、鯽魚養殖為主，是珠三角淡水養殖水產品的主要產區之一。膠體金免疫層析技術是基于膜的檢測方法，具有特異性強、穩定性好、操作快捷簡便、定性或半定量的特點，近年來常被廣大基層檢驗人員用于現場檢測[4-8]。利用膠體金免疫層析快速檢測法對全縣農貿市場和各鎮主要養殖水產品進行藥殘測定，通過測定對全縣水產品的安全性進行評價，為建立適用于全縣水產品的質量安全檢測體系，促進全縣水產養殖向健康、安全、無公害的方面發展，提高消費者對全縣水產品質量安全的信心和水產養殖業的發展提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試樣品

檢測樣品來源于農貿市場和全縣各鎮養殖基地，將抽取的樣品帶回實驗室，樣本去皮與脂肪，取每份樣品的可食部分約100 g，用組織搗碎機充分絞碎、混勻，裝入樣品袋，標明標識，冷凍保存，備用。

1.1.2 試劑

膠體金快速檢測試劑盒（包括膠體金快速檢測試板、各種試劑）。

1.1.3 儀器

LC-2010型液相色譜儀、電子天平、移液器、均質機、水浴振蕩機、全自動氮吹儀、離心機等。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

（1） 孔雀石綠（MG）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質物于15 mL離心管中；加入2 mL提取劑A，再加入1瓶提取劑B（5 mL），振蕩3 min，在室溫（20～25℃） 下以轉速4 000 r/min離心5 min。取2 mL上層有機相至5 mL離心管中，加入100 μL氧化劑，振蕩混勻后，靜置1 min，于50～60℃水浴中用氮氣（或空氣） 吹干；然后加入0.3 mL緩沖液振蕩混勻20 s，待檢。

（2） 呋喃唑酮代謝物（AOE）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質物至50 mL離心管中。依次加入4 mL蒸餾水、0.5 mL試劑A和0.6 mL衍生化試劑，振蕩混勻5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL試劑B、0.4 mL試劑C和1瓶提取劑（6 mL），振蕩混勻5 min。在室溫（20～25℃） 下以轉速4 000 r/min離心5 min，取3 mL上層有機相至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮氣吹干。取1 mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.5 mL試劑D顛倒混勻10～15次，在室溫下（20～25℃）以轉速4 000 r/min離心2 min，待檢。

（3） 呋喃西林代謝物（SEM）。將樣本解凍至室溫，稱取3±0.05 g均質物至50 mL離心管中。依次加入4 mL蒸餾水、0.5 mL試劑A和0.6 mL衍生化試劑，振蕩混勻5 min，在65℃水浴中孵育30 min。依次加入1 mL試劑B、0.4 mL試劑C和1瓶提取劑（6 mL），振蕩混勻5 min。在室溫（20～25℃） 下以轉速4 000 r/min離心5 min，取3 mL上層有機相至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮氣吹干。取1 mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.5 mL試劑D振蕩混勻，在室溫下（20～25℃） 以轉速4 000 r/min離心2 min，待檢。

（4） 氯霉素（GAP）。將樣本解凍至室溫，稱取4±0.05 g均質物至50 mL離心管中。加入1瓶提取劑（5 mL），振蕩混勻5 min，在室溫（20～25℃） 下以轉速4 000 r/min離心5 min。取上層有機相全部轉移至5 mL離心管中，在50～60℃水浴中用氮氣吹干。取1 mL凈化劑溶解干燥物，再加入0.3 mL緩沖液振蕩混勻，在室溫下（20～25℃） 以轉速4 000 r/min離心2 min，待檢。

1.2.2 快篩的判定方法

測呋喃唑酮類代謝物、呋喃西林代謝物、氯霉素時，用移液器吸取待測液下層液體80 μL至加樣孔，靜置，按照規定時間內讀取結果。

測孔雀石綠時，用移液器吸取待檢液體80 μL至微孔中充分混勻，靜置2 min，然后全部滴加至檢測卡加樣孔，靜置，按照規定時間內讀取結果。

結果判讀示意圖見圖1。

圖1 結果判讀示意圖

1.2.3 符合性試驗[9]

對經試劑卡初篩、液相色譜確認的氯霉素、孔雀石綠、呋喃類代謝物等的陽性樣品和陰性樣品（各1份），按照1.2中各項目快篩方法分別進行測定，每個樣品做6次平行，計算檢出率，比較與原測值的符合性情況。

2 結果與分析

2.1 符合性試驗

通過符合性試驗，比較與原測值的情況，結果表明測試卡陽性樣品的假陰性率與陰性樣品的假陽性率均為0；檢測限能達到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石綠≤2 μg/kg，呋喃西林代謝物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代謝物≤1 μg/kg，快檢測試結果與樣品LC測定結果一致，符合國家規定的水產藥殘標準。

符合性試驗結果見表1。

表1 符合性試驗結果

2.2 水產藥物殘留情況分析

2016年10月至2017年10月，博羅縣農產品質量安全監督檢測中心抽查了全縣各農貿市場、養殖基地的鰱魚、鳙魚、鯉魚、草魚、鯰魚、羅非魚、鯽魚、鯪魚等13個品種268個樣品，應用膠體金免疫層析法快速篩查氯霉素、孔雀石綠、呋喃類代謝物等指標。

不同品種魚類檢測出違禁藥物使用情況調查結果見表2。

表2 不同品種魚類檢測出違禁藥物使用情況調查結果

結果表明，博羅縣水產品中仍出現違禁藥物氯霉素、孔雀石綠、呋喃唑酮類代謝物和呋喃西林類代謝物殘留檢出情況；抽檢涉及博羅縣主要經濟魚類13個品種的268個水產樣品中，9個檢測出氯霉素，8個檢測出孔雀石綠，4個檢測出呋喃唑酮類代謝物，3個檢測出呋喃西林類代謝物。從分析結果發現，氯霉素和孔雀石綠使用率在測試的違禁藥物中所占的比例較大，草魚、鳙魚和鯽魚違禁藥物使用率在抽檢的所有魚類品種中所占的比例較高。

3 結論

基于膠體金免疫層析技術的特點，結合符合性試驗對購置的試劑卡進行驗證，檢測限能達到：氯霉素≤0.3 μg/kg，孔雀石綠≤2 μg/kg，呋喃西林代謝物≤1 μg/kg，呋喃唑酮代謝物≤1 μg/kg；測試試劑卡陽性樣品的假陰性率與陰性樣品的假陽性率均為0；快檢測試結果與樣品LC測定結果基本一致，符合國家規定的水產藥殘標準。

試驗在符合性試驗的基礎上應用膠體金免疫層析法對博羅縣農貿市場和全縣各鎮養殖基地的陽性樣品進行快速篩查，結果表明博羅縣水產品中仍出現違禁藥物氯霉素、孔雀石綠、呋喃唑酮類代謝物和呋喃西林類代謝物殘留檢出情況，且氯霉素和孔雀石綠使用率在測試的違禁藥物中所占的比例較大，檢出率分別為3.36%和2.98%；草魚、鳙魚和鯽魚違禁藥物使用率在抽檢的所有魚類品種中所占的比例較高。該結論為水產品在質量安全監控中對于魚類品種和違禁藥物的使用重點跟蹤起到積極參考作用。

在我國，對高毒藥物是明令禁止的，但從研究數據可以看出博羅縣水產品仍然存在1%～4%的陽性樣品。由于禁用物質及其代謝產物多屬難降解物質，高濃度長期使用導致養殖用水和塘底泥受污染，在今后漁業養殖時雖未再使用禁用藥物，但仍可能導致水產品檢出禁用藥物殘留，造成水體及水產品的二次污染，這對水產品的監管提出了新的挑戰。在今后的工作中，加快建立適用于博羅縣水產品的質量安全檢測體系的步伐，加強對易超標高風險魚類品、易檢出違禁藥物實行年度專項抽檢；同時在年度監控計劃中將養殖用水也列入監控范圍，彌補以往這方面的監控空白，進一步確保餐桌上的水產品安全可靠，以保障消費者的健康。

參考文獻：

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[9]王駿，李建業.高效液相色譜-熒光檢測器測定水產品中孔雀石綠殘留總量的研究 [J].食品科學，2007，28（7）：364-367.◇