丹參調節腎組織AQP2效應與其活血利尿功效的相關性研究

吳慶昕

河南省息縣人民醫院中醫科(息縣464300)

祖國醫學稱“血不利則為水，血水本同源”，提示血和水在生理上相互化生且功用相近，病理上則“瘀水關聯”，強調對血瘀證治療關鍵是活血利水。水通道蛋白2(AQP2)廣泛存在于腎臟遠端小管和集合管的主細胞頂膜中，其作用作用是參與尿濃縮和稀釋功能，和腎的“利尿”作用相近。丹參作為臨床上應用最廣泛的中醫藥材，其具有“活血化瘀、曲瘀止痛、涼血養血，安神”等功效，現代藥理學證實，丹參具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、抗血栓形成，同時能改善微循環和減少血管內皮細胞損傷，能降低血管通透性，能減少組織水腫，同時能調節AQP2表達[1]。研究[2]指出，中醫活血利尿本質是上調AQP2蛋白表達，促使局部肌肉和腎組織水吸收入紅細胞和血漿，通過代謝將水液消耗，降低AQP2蛋白表達，促使腎組織水通過尿液排出，實現消腫利尿，從而減輕組織血瘀和水腫病理狀態。基于此，本次研究做如下實驗，以證實該結論，為臨床用藥提供有力依據。

材料與方法

1 材 料 收集30只大鼠，分成正常組、模型組和丹參組，每組均為10只，均為雄性，體重150～210g，平均(180±20)g；藥物均購自復旦大學臨床實驗室研究中心，丹參根據《中國藥點》提取稱丹參干燥成粉劑，給藥前用生理鹽水調成混懸液，將丹參調劑成1g/ml。

2 方 法 將30只大鼠分成三組，正常組不建立模型，每日常規喂養生理鹽水10 μl/g。模型組和丹參組則采用定量化打擊法進行造模型，即將大鼠右后肢放置在打擊器上，砝碼為500 g，高度為58 cm，自由落下后打擊在后肢內側中上部，成功標志為單側肢體跛行，無皮膚破損，無出血，無骨折，模型組繼續生理鹽水10 μl/g灌胃，丹參組則用丹參混懸液1 g/kg灌胃，均連續治療1周。12周后處死，取局部肌肉和腎組織，部分標本迅速放入在4%多聚甲醛中進行固定，進行免疫組化和病理學觀察，用腎組織勻漿Western Blot法檢測AQP2蛋白表達。觀察在腎組織AQP2蛋白表達情況。

結 果

1 各組尿量和AQP2濃度等指標比較 尿量上以丹參組含量最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而在AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上以模型組最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而正常組和丹參組在以上三個指標上比較差異則不顯著(P>0.05)，見表1。

表1 各組尿量和AQP2濃度等指標比較

2 三組病理組織學觀察 正常組肌纖維結構清晰，腎小球正常，腎小管上皮細胞排列整齊。模型組局部肌纖維索損傷，周圍炎性細胞浸潤顯著，腎小球不同程度擴張，上皮細胞增生，毛細血管腫脹，腎小管擴張變性，毛細血管充血顯著。丹參組肌纖維接近正常，腎小管-間質變顯著改善，僅有少數毛細血管擴張，但程度均較輕。

討 論

水通道蛋白是近20年發現的一種廣泛存在機體各器官組織內，對水高度選擇性的細胞膜轉運蛋白，其主要分布在和液體吸收和分泌緊密相關的內皮細胞和上皮細胞上，參與調節和水跨細胞膜轉運相關的病理和生理過程[3-4]。目前對AQP在臨床上可分成13個亞型，AQP2主要分布在腎臟中，其主要是表達在遠端小管和集合管主細胞頂膜中，其主要參與尿液稀釋濃縮。研究[5-6]稱，AQP2集合管中約有3%隨尿液排出體外，在不同生理或病理下，其排出量不同，故可將AQP2作為腎功能的一個重要檢測指標。

結果顯示，AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上以模型組最高，而在尿量上則以丹參組最高，這點和報道[7-8]結論是一致的，實驗證明，糖尿病腎損傷模型組織AQP2表達增多，丹參則能顯著降低糖尿病大鼠腎組織中的AQP2蛋白表達，在腎臟AQP1高表達中近端小管和髓袢支細段上皮細胞頂膜和側膜，其主要參與水重吸收。當AQP1表達下降則代表腎臟對水重吸收功能減弱，AQP2表達增加則表示其原尿重吸收能力增加，故兩者有協同作用，能促使尿量增加[9]。這也證實外傷后血瘀證大鼠在AQP2表達上增加顯著，故尿液較正常顯著增加。

丹參在臨床上能降低血管通透性，能減輕血管源性水腫，能增加腎血流，且有利尿、調節腎組織局部微循環等作用。研究[10-11]指出，丹參能上調急慢性肺損傷的微血管內皮細胞AQP2蛋白的表達，能降低膽汁淤積性肝硬化大鼠肝硬化AQP2表達。報道稱，丹參能減輕血瘀證大鼠局部肌肉和腎組織血管內皮細胞損傷，能調高血管內皮細胞膜中的水通道蛋白表達，能減輕局部腎組織瘀腫，故丹參有很好“活血消腫”作用。結果顯示，丹參組在AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上和正常組相近，而在尿量上則顯著高于正常組和模型組，且在病理組織學上也和正常組相近，這證實丹參能下調腎組織AQP2表達，能增加腎排出尿液功能[12-15]，推斷出AQP2能促使腎小管對原尿水重吸收有關，故丹參的活血功效其中主要和腎臟的利尿是一致的。

總之，丹參能降低腎臟遠端小管和集合管主細胞的AQP2表達，能升高近端血管上皮細胞的AQP1表達，故其能減少腎對原尿的重吸收功能，增加尿量，同時能減少腎水腫。而當體內水液不足，則AQP2表達增加，尿量減少，因AQP2能隨尿液排出3%，故其能在一定程度上反映腎組織利尿和水腫疾病相關性[16-17]，故丹參的“活血利尿”功效可能和其調節腎小管AQP2水平緊密相關[18-19]。

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