低頻電針對心肌缺血損傷大鼠相關經穴和非相關經穴皮膚溫度的影響?

吳嬌娟，程 凱，嵇 波，趙國楨，游 敏，王 丹，嚴明娜，孫曉敏，白紅新，戴 健，路雅雯，劉翼天，葛云鵬，蘇 杭

(北京中醫藥大學,北京 100029)

人體體表穴位、內臟之間存在特定的聯系，這種“內屬臟腑,外絡肢節”的經穴-臟腑相關學說構成了經絡學說的核心內容，也成為近年來中醫針灸研究的熱點。多數研究思路是從穴位到內臟，即刺激體表穴位，監測相關內臟指標，由外而內地研究兩者之間的關系，而涉及由內臟指向體表穴位相關性的研究較少，由內而外的逆向論證研究比較薄弱。有研究表明，機體處于同一狀態時，相關經穴和非相關經穴在陽性反應[1]、電阻值[2],、紅外輻射溫度[3]、痛閾值[4]、局部嘌呤物質[5]等方面存在差異，而內臟處于不同狀態時相關經穴與非相關經穴的差異性研究較少。本研究借助大鼠心肌缺血模型，探查相關經穴和非相關經穴在大鼠處于不同心肌狀態(正常生理態、病理缺血損傷態、低頻電針干預態)下體表溫度的變化差異，以求證相關經穴對于不同機體狀態的反應較非相關經穴是否存在差異及其特異性變化規律。進一步逆向論證經穴-臟腑相關理論，并為其提供實驗依據。

1 材料

1.1 動物

40只清潔級Wistar健康品系雄性大鼠，9 周齡，體質量(230±20) g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供(合格證號SCXK(京)2012-0001)。實驗前將動物飼養于室溫(24±1)℃、相對濕度(55±5)%的環境中，日光燈照射，12 h 明暗交替，以大鼠普通飼料、自由飲水適應性喂養3 d，排除飲食及環境等可能對動物產生的影響。

1.2 主要試劑、針具和儀器

20%烏拉坦(天津藥業焦作有限公司生產，批號 06051121)；青霉素(哈藥集團制藥總廠生產，批號 CD1408008-1)；針灸針：華佗牌無菌針灸針(蘇州醫療用品廠有限公司)0.20 mm×13 mm；電針儀：二導 HAN’s 穴位刺激儀(LH202H，北京華衛產業開發有限公司)；BL-420E+生物機能實驗系統：TM003-0024 成都泰盟科技有限責任公司；呼吸機：成都泰盟軟件有限公司 HX-300S 動物呼吸機；冷光源：上海安信光學儀器制造有限公司 LG100-2 醫用冷光源；SG-H1 型恒溫恒濕實驗系統：南京盛光光電醫療儀器有限責任公司；紅外熱像儀(FLIR SC640,FLIR SYSTEM，美國)；TX51 顯微鏡：日本 Olympus 公司。

2 方法

2.1 分組

雄性Wistar大鼠40只，按隨機數字表法分為5小組，包括空白對照組、假手術組、心肌缺血損傷組(簡稱模型組)、低頻電針內關組(簡稱低頻A組)、低頻電針非經非穴組(簡稱低頻B組)。

2.2 造模

造模前大鼠處理:實驗前2 d用脫毛膏將心包經“內關”、胃經“足三里”和膽經“陽陵泉”穴區部位的鼠毛脫掉，并洗凈殘余膏體，再將大鼠放回動物房正常飼養。造模按冠脈結扎法[6]并加以改良制備心肌缺血損傷模型：20%烏拉坦，4.5 mL/kg，腹腔注射麻醉，經口腔行氣管插管后連接動物呼吸機(潮氣量 80～90 ml；呼吸頻率8～10次/min，呼吸比1∶1)，保持呼吸通暢；連接BL-420E+生物機能系統檢測心電。于大鼠胸部正中偏左側備皮，常規消毒，沿第4.5肋間胸骨左緣縱向剪開胸部皮膚及肌肉，暴露肋骨及肋間肌，斷開第4.5胸肋連接處，將開瞼器縱向放入胸部切口，暫關呼吸機迅速撐開開瞼器，再打開呼吸機；在冷光源照射下，用眼科彎鑷撕破心包膜，在動脈圓錐和左心耳交界下約2 mm處進行結扎，進針深度約1～1.5 mm，將左冠狀靜脈和動脈一起結扎，快速排出胸腔氣體和液體后逐層縫合，傷口消毒，并在頸部皮下注射青霉素40萬U/次/d預防感染。結扎后心肌結扎部位的顏色發紺，心電圖J點抬高，初步證明造模成功。剔除結扎前心電圖不正常、造模失敗及中途死亡的大鼠。以暖光源照射觀察，待大鼠呼吸心律穩定撤除呼吸機，術后幫助排痰，注意保暖。

2.3 取穴

根據大鼠形態、解剖生理特點，參考《實驗針灸學》[7]穴位標準定位如下。內關：在前肢內側，距腕關節約3 mm的尺橈骨縫間;足三里：在膝關節后外側，腓骨小頭下約5 mm處;陽陵泉：在足三里上外側5 mm左右。非經非穴：在環跳穴(后肢髓關節后上緣)外5 mm左右。

2.4 處理方法

空白對照組常規飼養條件下不做任何處理，但在它組電針處理時抓取和固定1次共3 d；假手術組在大鼠冠狀動脈左前降支處穿線不結扎，其余操作同模型組；模型組在大鼠冠狀動脈左前降支處結扎，形成心肌缺血損傷，其抓取和固定同空白對照組；低頻A組造模成功后，用華佗牌規格0.20 mm×13 mm毫針直刺左側“內關”穴約0.2 cm，在穴位外上方0.5 cm非穴處皮下平刺1 mm，連接電針儀。電針參數設置：頻率2 Hz，強度以大鼠前肢微微顫動為度(1mA),20 min,造模后每日處理1次共3 d; 低頻B組除電針穴位為非穴外，其余均同經穴A組。

2.5 指標檢測

2.5.1 經穴紅外熱成像檢測 儀器設置:溫度-40～120℃，熱敏感度(FOV)25°× 19°,輻射率:0.98,室溫(24±1)℃，相對濕度55%～60%，反射溫度20.0 ℃，大氣溫度25.0 ℃，且在無日光直射環境下相對距離1 m。測試前將大鼠麻醉固定于臺架上，置于電熱板上保溫待測，測試時鏡頭垂直對準待測腧穴；經穴低頻A組、低頻B組于第3次電針處理后30 min進行檢測，另外3組與治療組同時進行檢測，檢測部位為內關、足三里、陽陵泉穴區；記錄輻射成像圖并用輻射成像處理軟件進行分析；通過3個像素點測溫合成，像素點間距17 μm，檢測范圍51 μm；取左、右側穴區溫度的平均值用于數據統計分析。

2.5.2 心肌組織HE染色 穴區皮膚溫度檢測完成后，開胸取出心臟置于生理鹽水中，讓其自行收縮排血，大約10 min后用無齒鑷輕壓心臟排盡余血，并用生理鹽水沖洗，再置于4%多聚甲醛液中保存固定。然后將固定好的標本常規脫水、浸蠟、包埋，石蠟切片、脫蠟、蘇木素染色、分色，返藍，伊紅染色、脫水、透明、封片，光鏡下觀察其形態學變化。

2.6 統計學方法

3 結果

3.1 各組大鼠心肌細胞HE染色結果

圖1顯示，空白對照組心肌細胞排列緊密規則，胞質、胞核顯示清晰，細胞膜完整，細胞核居中，未見炎性細胞；假手術組可見心肌細胞少量壞死，心肌纖維呈波浪狀改變，存在散在的白細胞浸潤；模型組細胞核碎裂、消失，胞質呈不規則粗顆粒狀，心肌纖維凝固性壞死并有間質水腫，存在少量中性粒細胞浸潤；低頻A組心肌細胞排列恢復緊密化，核居中，在缺血壞死區內開始出現增生細胞，炎細胞浸潤明顯減少；低頻B組細胞核碎裂，胞質呈不規則粗顆粒狀，心肌纖維凝固性壞死且間質水腫，有少量中性粒細胞浸潤。

圖1 各組大鼠心肌組織切片(HE染色 ×100)注：A.空白對照組； B.假手術組； C.模型組； D.低頻A組； E.低頻B組

3.2 不同心肌狀態時內關、足三里、陽陵泉穴區的溫度變化情況

表1顯示，心肌處于缺血損傷態時，相關經穴內關和非相關足三里皮膚溫度均降低(P<0.01,P<0.05)，其中內關較足三里明顯，而非相關經穴陽陵泉穴的皮膚溫度無明顯變化。低頻電針刺激內關穴3 d后，相關經穴內關穴溫度較模型組顯著升高(P<0.01)，非相關經穴足三里穴有上升趨勢，而非相關經穴陽陵泉穴溫度無明顯變化。低頻電針刺激非經非穴后，內關、足三里、陽陵泉穴穴位溫度較模型組均無明顯變化。心肌缺血時對比電針干預內關穴和非經非穴狀態下，內關和足三里穴溫度變化差異有統計學意義(P<0.01,P<0.05)。

表1 不同心肌狀態時內關、足三里、陽陵泉穴溫度變化比較

注：與空白對照組比較：*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較：▲▲P<0.01；與低頻A組比較：▇P<0.05，▇ ▇P<0.01

4 討論

經穴-臟腑相關是經絡學說的核心內容之一。早在2000多年前《素問·調經論》就有記載:“五臟之道，皆出于經隧，以行血氣，血氣不和，百病乃變化而生?！苯浰砑唇浢}，強調經脈與五臟的密切聯系?！鹅`樞·海論》云:“夫十二經脈者，內屬于府藏，外絡于支節”，說明十二經脈的重要功能是溝通臟腑與體表肢節。另《素問·藏氣法時論》有:“心病者，胸中痛……膺背肩甲間痛，兩臂內痛”，指出臟腑疾病在體表相關經穴會出現反應。近年來，有關經穴臟腑相關的諸多基礎和臨床研究[8-12]亦從不同側面肯定了經穴效應特異性的存在.

心肌缺血屬于中醫學“胸痹”“心痛”“厥心痛”等范疇。根據經脈臟腑相關理論，心包經與此病密切相關?！鹅`樞·經脈》載有:“主手厥陰心包絡之脈……諸邪之在于心者，皆在于心之包絡?！倍鴥汝P為手厥陰之絡脈，通陰維脈，可寧心理血，為治療心胸病要穴，素有“心胸內關謀”之說，其主治病證如《靈樞·經脈》所記載:“心系實則痛，虛則為煩心?！爆F代臨床和實驗研究證明[13- 16]，針刺“內關”改善急性心肌缺血療效確切。

自然界中一切高于絕對零度的物體，都在不斷向外發射紅外線。研究表明，紅外輻射與機體的能量代謝、體熱平衡、體溫調節及組織結構有著密切聯系，溫度越高輻射紅外線的本領越強[17]。紅外熱成像診斷技術通過接收人體輻射的紅外線，利用映像光學和計算機技術，顯示黑白或偽彩色圖像[18]。當機體某處發生病理或生理變化時，不同體表結構必將因其血流和代謝變化等產生溫度改變，引起紅外輻射改變，從而可反映組織不同機體狀態。

本研究借助心肌缺血大鼠模型，發現在心肌缺血損傷狀態下，心肌細胞存在炎性浸潤，相關經穴內關溫度明顯下降，低頻電針內關干預時心肌細胞排列開始恢復，相關經穴內關溫度明顯升高，非相關經穴足三里和陽陵泉則無此變化。且低頻電針非經非穴對各穴區體表溫度變化及心肌改善情況不大，表明心肌在不同狀態下，相關經穴體表溫度較非相關經穴存在一定的變化特征，能反映心肌所處狀態，且低頻電針內關穴可以改善心肌缺血及其誘發的相關經穴溫度下降，其機制尚有待進一步的研究。

參考文獻：

[1] 楊正飛，王蕊,史麗萍. 2型糖尿病患者背俞穴反應點臨床研究[J]. 河南中醫,2017,37(3):526-527.

[2] 劉君. 足三陰經相關經穴穴位體表電阻反應胞宮生理病理變化的特異性研究[D].石家莊：河北醫科大學,2015.

[3] 陸玉瑾，陳躍來. 膀胱過度活動癥患者膀胱俞穴及下合穴紅外輻射溫度特異性研究[J]. 針灸臨床雜志,2014,30(6):14-16.

[4] 劉偉哲. 慢性淺表性胃炎體表相關痛敏穴位研究[D].北京：中國中醫科學院,2011.

[5] 莊藝. 不同狀態下嘌呤信號循經變化特征及循經取穴針刺對心肌缺血模型大鼠心臟A_(2b)受體轉導調控的研究[D].成都：成都中醫藥大學,2015.

[6] SUN Q，KANG Z M，CAI J M，et al. Hydrogen-rich saline protects myocardium against ischemia /reperfusion injury in rats[J]. Experimental Biology & Medicine, 2009, 234(10):1212.

[7] 張露芬. 實驗針灸學[M].北京：化工工業出版社，2010:220.

[8] 陸鳳燕, 王圓圓, 辛娟娟,等. 從“肚腹三里留”論經穴效應的特異性[J]. 中國針灸, 2016, 36(8):840-844.

[9] 秦慶廣, 王海萍, 劉坤,等. 針刺天樞對正常、便秘和腹瀉模型大鼠不同腸段運動功能的雙向調節效應[J]. 世界中醫藥, 2013, 8(3):245-249.

[10] 陳婷. 基于“面口合谷收”理論的經穴體表特異性聯系研究[D].成都：成都中醫藥大學,2012.

[11] 丁玉龍,于金娜,劉志順. 電針中髎治療良性前列腺增生癥穴位特異性研究[J]. 針灸臨床雜志,2011,27(7):1-4.

[12] 黃頌敏. 辨證循經取穴治療牙痛30例[J]. 上海針灸雜志, 2010, 29(3):186.

[13] 卞鏑,劉玉麗,隋月皎,等. 電針內關對心肌缺血大鼠心肌保護作用的實驗研究[J]. 時珍國醫國藥,2015,26(5):1270-1272.

[14] WANG X R, LIN H, WANG Z H. Protective effects of electroacupuncture and Salviae Miltiorrhizae on myocardial ischemia/reperfusion in rabbits[J]. Acupuncture & electro-therapeutics research, 2003, 28(3-4):175-182.

[15] WANG S B, CHEN S P, GAO Y H, et al. Effects of electroacupuncture on cardiac and gastric activities in acute myocardial ischemia rats[J]. World Journal of Gastroenterology, 2008, 14(42):6496-6502.

[16] 李明磊, 王華, 陳澤斌. 電針內關穴對AMI大鼠的保護作用及其與心自主神經調節的相關性研究[J]. 山西中醫學院學報, 2007，8(3):17-19.

[17] 呂少文, 趙麗君, 李紅,等. 人體紅外熱圖像分析技術的應用原理和意義[J]. 中國體視學與圖像分析, 2002, 7(3):150-152.

[18] 魏臻, 童明強. 醫用紅外熱像診斷中的生物和物理機理[J]. 生命科學儀器, 2005, 3(2):20-22.