血液病毒核酸集中化檢測的實踐和體會

石慶秋，羅必泰，謝家日，林丹英

(南寧中心血站檢驗科，廣西 南寧 530003)

為提高血液安全水平，進一步縮短“窗口期”，降低輸血傳播疾病風險。2013年，國家衛生計生委在 《全面推進血站核酸檢測工作實施方案》中提出，“積極推進血站核酸檢測工作，提高血站實驗室檢測能力。到2015年，血液篩查核酸檢測基本覆蓋全國。”由于廣西部分血站尚未開展核酸檢測，在廣西衛計委的協調下，南寧中心血站自2015年12月底承擔了崇左市、北海市和防城港市中心血站血液標本的核酸檢測工作，實現了核酸檢測全覆蓋。本文通過對檢測數據的分析，了解廣西西南部地區感染性輸血殘余風險，以及核酸集中化檢測對提高實驗室質量和血液安全的意義。

1 材料與方法

1.1 標本來源 來自于2015年12月至2017年1月廣西崇左市、北海市、防城港市無償獻血者的核酸檢測標本。獻血者均符合 《獻血者健康檢查要求》。使用EDTA-K2抗凝帶分離膠的真空采血管留取血樣5ml。標本均為兩遍ELISA檢測后HBsAg、抗-HCV、HIV抗原-抗體無反應性標本。

1.2 標本采集和運送 核酸標本采集后，在4h內離心，標本需要冰凍運輸或保存的，離心后24h內在-40℃～-18℃凍存。標本放置于冷藏儲存箱內運送，冰凍標本運輸溫度在-40℃～10℃，如果運輸時間不超過8h，采用2℃～10℃運輸。標本到達實驗室后72h內完成檢測，不可再次凍融。

1.3 儀器與試劑 羅氏Cobas s201全自動血液核酸篩查平臺：Hamilton Microlab Star全自動混樣儀，Cobas s201 AmpliPrep核酸提取儀，Cobas s201 TaqMan Analyzer核酸擴增檢測儀；科華核酸血液檢測系統：STAR核酸分離純化儀、ABI 7500型實時熒光定量PCR儀；核酸檢測試劑盒：Cobas TaqScreen MPX 2.0 test、科華核酸檢測試劑盒。

1.4 檢測方法和質量控制 采用羅氏6人份混樣、科華8人份混樣模式，初混無反應性的標本，判為檢測陰性；系統檢出的反應性混樣標本繼續進行拆分檢測，拆分試驗無反應性判定為NAT陰性，拆分試驗呈反應性標本判為陽性。每批次標本檢測均有陰陽性對照品和室內質控品(HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA)來控制質量和試驗有效性。本實驗室每年參加衛生部臨床檢驗中心組織的室間質量評價，總成績均合格。

1.5 統計學處理 運用SPSS 18.0統計學軟件進行統計分析，采用χ2檢驗行x列表資料多個樣本率的比較，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2015年12月至2017年1月，共檢測南寧、崇左市、北海市和防城港市中心血站ELISA無反應性核酸標本174127例，263例標本拆分結果為陽性，且均為HBV DNA陽性，陽性率為1.51‰。各中心血站核酸標本檢測陽性率非常接近，差異無統計學意義（χ2=4.35，P＞0.05），見表 1。

表1 血液標本核酸集中化檢測結果

3 討論

本次血液集中化檢測工作共檢測了核酸標本174127例，其中3家委托血站送檢標本為38444例，占比22.08%。從表1的數據可以看出，各中心血站核酸標本檢測陽性率非常接近，差異無統計學意義 （P＞0.05），總陽性率為1.51‰，高于上海（0.63‰）[1]、鄭州（0.57‰）[2]和新疆地區（1.10‰）[3]，低于南昌（2.44‰）[4]、新余(1.60‰）[5]和杭州地區（2.00‰）[6]。4家血站篩查出的陽性標本均為HBV DNA陽性（1.51‰），高于國內外一些地區報道[7-10]，未檢出HCV RNA和HIV RNA陽性，提示廣西西南部地區是HBV感染相對的高流行區。“窗口期”、病毒亞型及變異、隱匿性HBV感染等原因是影響血液安全的主要因素[11]，經酶免4項和ALT篩查陰性的血液仍然存在一定的輸血感染殘余風險。核酸檢測技術應用于血液篩查，特異性好、靈敏度高，可將HBV、HCV、HIV病毒檢測的 “窗口期”分別縮短約 50%、80%、50%[12]，還能檢出病毒抗體或抗原檢測陰性的慢性或隱匿攜帶者，以及變異株病毒感染者[13]。實施集中化檢測后，全面開展血液核酸檢測，最大限度的保障了集中化檢測區域內所有血站的血液質量安全。

集中化檢測有利于整合資源，降低行政管理和血液檢測成本，同時提高血液檢測水平[14]。廣西西南地區部分血站全年檢測標本量少，配備的實驗室檢測人員數量也少，由于核酸檢測設備較昂貴，核酸試劑成本高，對檢測技術要求高，若自行檢測費時費力。而通過集中化檢測，由南寧中心血站承擔周邊血站的核酸檢測工作，充分發揮核酸實驗室的檢驗資源優勢，可以減少更多的設備、檢測試劑和人力資源投入，同時，可以提高血液檢測規范化、系統化和科學化水平，更好的保證檢測質量。

血液集中化檢測工作中標本采集、運輸、接收、報告發放等每個工作環節的疏漏都可能影響血液檢測質量。經過1年多的實踐和探索，針對各環節出現的問題采取了必要措施，使集中化檢測工作模式逐步成熟：⑴標本采集、保存和運輸不當導致標本留樣不足、抗凝不良、溶血甚至試管破裂的情況時有發生。血液標本質量、留取和標識的正確性是保證血液質量和血液安全的關鍵，直接影響血液的檢測結果和血液的可追溯性[15]。要解決這些問題，首先各血站要完善質量管理體系文件，統一規范的操作程序，并對采集人員和標本運送人員進行系統全面的培訓。采集人員采血前要仔細檢查采血試管有無裂痕和滲漏，采血過程認真核對血袋、標本管和獻血者信息，保證標本同源性；標本采集后將標本管內抗凝劑與血液充分混勻，在4h內離心，臨時保存溫度為2～8℃。標本運送人員采用專用儲存箱運輸標本，運輸過程保持標本管口向上，避免劇烈震蕩；廣西夏季室外高溫，對標本的冷鏈運輸要求很高，應對冷鏈效果進行確認和定期監測；標本送達后，運送人員與實驗室工作人員當面交接，質量不符合要求的標本退回并要求委托血站重新留樣。⑵標本標簽粘貼不規范，條形碼不統一，導致標本無法正常掃描接收，在核酸檢測設備上無法識別。通過統一使用唐山血液信息管理系統，采用統一的編碼規則，充分保證了數據傳輸、接收的相容性和準確性。⑶檢驗報告發布和接收問題：對雙方血液信息管理系統進行升級對接，檢測實驗室發布血液檢測結果信息，同時打印結果紙質報告兩份，一份由檢測實驗室歸檔保存，一份交由委托血站歸檔保存。委托血站可通過信息管理軟件接收檢測結果，并依據檢測結果實施血液隔離和限行。⑷緊急情況下的血液供應問題：制定計算機信息系統應急預案，每天進行服務器數據備份，定期維護計算機信息系統的軟件和硬件，保證故障發生時能快速排除和恢復；制定應急采供血預案，各血站根據臨床用血需求，制定不同種類血液產品的最低、最高和合適庫存水平，儲存一定數量稀有血型血液和緊缺的血液產品，保證突發事件的血液供給，此外，可充分利用合作血站間血液資源，合理調配血液，血液標本無需重復檢驗。

綜上所述，集中化檢測后，廣西西南部地區全面實施血液核酸檢測，通過統一血液網絡化管理，統一核酸檢測資源，統一血液采集、運輸、檢測標準，有效降低了輸血風險，保障了區域內臨床用血的安全、有效。

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