卵巢癌組織中IL—6與SOCS1陽性表達及其意義

[摘要]目的探討白細胞介素6（IL-6）和細胞因子信號轉導抑制因子1（SOCS1）在卵巢癌組織中的陽性表達及臨床意義。方法采用免疫組化二步法檢測不同卵巢組織中IL-6和SOCS1的陽性表達，分析兩者的表達及其與卵巢癌臨床病理參數間的關系。結果卵巢癌組織中IL-6和SOCS1的陽性表達率高于正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織（X²=6.094～28.983，P<0.05）。卵巢癌組織中IL-6的陽性表達與腫瘤的組織學分級、FIGO分期、腹水有關（X²=8.451～14.872，P<0.05），與病理類型、年齡、淋巴結轉移無關（P>0.05）。SOCS1陽性表達與腫瘤的組織學分級有關（X²=6.137，P<0.05），與病理類型、FIGO分期、腹水、年齡、淋巴結轉移無關（P>0.05）。卵巢癌組織中IL-6與SOCSl的表達呈正相關（r=0.297，P<0.05）。結論IL-6和SOCS1在卵巢癌中高表達，與卵巢癌的發生發展相關。

[關鍵詞]卵巢腫瘤；白細胞介素6；細胞因子信號轉導蛋白抑制因子；免疫組織化學

卵巢癌是婦科最致命的惡性腫瘤，全球每年大約有20萬人被診斷為卵巢癌，其5年病死率大于60%，嚴重威脅女性的生命健康。炎性細胞因子在腫瘤的發生及發展過程中起著重要作用，已經明確腫瘤細胞以及炎癥細胞產生的細胞因子如白細胞介素-1（IL-1）、IL-6、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）和趨化因子等可直接促進惡性腫瘤的進展。卵巢癌組織中過表達的IL-6作用于其受體后，可激活相關傳導通路如JAK/STAT、Ras/ERK/MAPK和P13K/AKT等，從而產生促進細胞增殖、抗凋亡、誘導血管增生、細胞浸潤和耐藥等作用。已有研究表明，IL-6可作為卵巢癌預后的獨立預測因子。細胞因子信號轉導抑制因子1（SOCS1）是阻斷多種細胞因子信號轉導過程的負性調控因子，其可直接抑制或通過抑制JAK/STAT、酪氨酸激酶受體（RTK）信號轉導通路來阻斷相關因子所介導的信號轉導，SOCS1的異常表達與卵巢癌的發生發展密切相關。本研究應用免疫組化二步法檢測IL-6和SOCSl在不同卵巢組織中的表達，探討兩者在卵巢癌發生發展中的作用。

1材料和方法

1.1材料來源

收集2011年12月-2015年12月在我院初次就診的105例卵巢癌和40例良性卵巢腫瘤病人的石蠟包埋組織標本，所有標本均經病理檢查證實。105例卵巢癌標本按病理類型分為漿液性78例、黏液性20例、子宮內膜樣腺癌5例和透明細胞癌2例。卵巢良性腫瘤標本按病理類型分為漿液性28例和黏液性12例。并以30例同期因子宮肌瘤行附件切除的正常卵巢組織標本作為對照組。所有卵巢癌病人均行腫瘤細胞減滅術或分期手術，術前均未接受化療、放療及免疫治療。

1.2主要試劑

兔抗人IL-6多克隆抗體（ab6672，稀釋度1：200）及兔抗人SOCSl多克隆抗體（ab83493，稀釋度1：200）購自美國Abcam公司，免疫組化PV-6001試劑盒、DAB顯色劑購自北京中山金橋生物技術有限公司。

1.3實驗方法及結果判定

1.3.1實驗方法石蠟包埋組織切片，烤片，并逐級脫蠟、水化。將切片依次放人二甲苯溶液3次，各5min；無水乙醇2次，各5 min，體積分數為0.95的乙醇5min，體積分數為0.70的乙醇5 min，體積分數為0.50的乙醇5 min；自來水沖洗3 min，PBS浸泡3次，各2 min；置于煮沸的含有抗原修復液的高壓鍋中修復2 min，自然冷卻后放入PBS浸泡3次，各5 min，以體積分數為0.03的過氧化氫溶液作用10min，阻斷內源性過氧化物酶活性；放人PBS浸泡3次，各5min后，加人一抗37℃溫箱孵育1 h；取出后置于PBS浸泡3次，各3 rain，加入IgG生物素連接的二抗37℃溫箱孵育30 min；置于PBS浸泡3次，每次5 min，DAB染色1 min，自來水沖洗2 min，蘇木精染色5 min，自來水沖洗5 min；隨后按濃度梯度依次放于乙醇溶液脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知的人乳癌IL-6和SOCS1陽性表達組織作為陽性對照。

1.3.2結果判定采用二級計分法，每張切片隨機選取5個高倍視野（400倍），細胞漿、細胞核或間質中有明顯棕黃色顆粒為陽性表達，以陽性細胞所占百分比和細胞著色程度分別評估。陽性細胞所占百分比的評分標準為：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。細胞著色程度評分標準為：無著色或者整個背景淡棕色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以陽性細胞百分比評分+細胞著色程度評分進行綜合評定：結果≥3分為陽性，<3分為陰性。

1.4統計學處理

采用SPSS 19.0軟件包進行統計學分析，兩組或多組計數資料間的比較采用X²檢驗；IL-6和SOCS1表達相關性采用Spearman相關分析。

2結果

2.1 IL-6和SOCS1表達

IL-6在卵巢癌組織中表達顯著升高，主要表現為卵巢癌細胞漿及間質中出現棕黃或棕褐色顆粒；SOCS1在卵巢癌組織中表達升高，主要表現為卵巢癌細胞漿及胞核中出現棕黃或棕褐色顆粒。在卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中IL-6的陽性表達率分別為71.43%（75/105）、22.50%（9/40）與16.70%（5/30），其中卵巢癌組織中IL-6的陽性表達率明顯高于正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織（X²=28.983、28.453，P<0.01），而良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中IL-6的陽性表達率差異無顯著性（X²=0.365，P>0.05）。卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中SOCSl的陽性率分別為37.14%（39/105）、15.00%（6/40）與13.30%（4/30），卵巢癌組織中SOCSl的陽性表達率高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織（X²=6.635、6.094，P>0.05），良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中SOCS1的陽性率差異無顯著性（P>0.05）。

2.2卵巢癌中IL-6和SOCS1表達與臨床病理參數的關系

卵巢癌組織中IL-6陽性表達與組織學分級、FIGO分期、腹水有關（X²=8.451～14.872，P<0.05）；而與腫瘤病理類型、年齡、淋巴結轉移無關（P>0.05）。卵巢癌組織中SOCSl陽性表達與組織學分級有關（X²=6.137，P<0.05）；而與病理類型、FIGO分期、腹水、年齡、淋巴結轉移無關（P>0.05）。見表1。

2.3卵巢癌組織中IL-6和SOCS1表達率相關性

本文105例卵巢癌組織中，IL-6與SOCS1共陽性35例，共陰性26例。Spearman相關分析表明，IL-6與SOCSl陽性表達呈正相關，差異具有顯著性（r=0.297，P<0.05）。

3討論

3.1不同卵巢組織中IL-6和SOCS1表達的意義

IL-6是迄今為止發現的功能最為廣泛的細胞因子之一。近年來研究顯示，IL-6在多種惡性腫瘤如多發性骨髓瘤、消化道惡性腫瘤、乳癌、卵巢癌等病人的血清中均有不同程度升高，并已證實IL-6與多種腫瘤的發生、發展及預后存在密切關系。SCAMBIA等早期便發現卵巢癌組織中高水平的IL-6與腫瘤進程及其體積變化有關，同時還降低了卵巢癌細胞對化療藥物的敏感性，縮短了病人的生存時間。已有研究證明，卵巢癌病人血清中IL-6的水平與疾病分期和預后呈正相關，是卵巢癌的獨立預后因素。本研究結果與上述報道相符。本文結果表明，卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中IL-6的陽性表達率明顯低于卵巢癌組織，且卵巢癌組織中IL-6陽性表達與組織學分級、FIGO分期、腹水呈正相關，說明卵巢癌惡性程度愈高、分期愈晚、腹水越多，IL-6陽性表達愈強，提示IL-6在卵巢癌發生發展過程中發揮重要作用。

SOCS家族是體內重要的抑制因子家族，它們具有相似的結構特點：中間的SH2結構域，C末端的\"SOCS盒”，N末端為一段可變序列。SOCS蛋白可被IL-6、IL-10、白血病抑制因子、粒細胞集落刺激因子、Y-干擾素、生長激素等多種細胞因子快速誘導表達。SOCS1是家族中最早被發現的因子，研究發現，SOCS1基因的啟動子含有STAT1、STAT3和STAT6的結合位點，將STAT3基因表達封閉后，IL-6無法誘導SOCS1陽性表達。本實驗結果顯示，卵巢癌組織中SOCS1的表達高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織，且與組織學分級有關，說明SOCS1也是卵巢癌發生發展過程中的重要因子，卵巢癌分化越低，SOCS1的表達越高，發揮的抑制作用越強。

3.2卵巢癌中IL-6和SOCS1表達的相關性

JAK/STAT信號通路是IL-6下游的重要通路，現已經明確，JAK/STAT信號通路的持續激活與多種惡性腫瘤的發生發展存在密切相關性。因此，SOCS1的激活和表達具有潛在的抑瘤作用。YANG等通過對51例肝細胞癌病人的研究發現，SOCS1基因的啟動子處于甲基化狀態。也有研究顯示，多種惡性腫瘤尤其是血液系統疾病存在SOCS1的啟動子甲基化和表達降低，而SOCS1的過表達則可以抑制腫瘤細胞的增殖。SUTHER-LAND等報道，原發性卵巢癌病人SOCS1和SOCS2啟動子CpG島的甲基化率分別為23%和14%，SOCS3的啟動子未發現被甲基化，實時PCR也證實SOCS1和SOCS2的表達均低于SOCS3。本文結果表明，卵巢癌組織中SOCS1與IL-6陽性表達呈正相關。然而，SOCS1的陽性表達率低于IL-6，這可能與SOCS1啟動子的甲基化有關，使其表達降低，而不足以抑制卵巢癌組織中顯著增高的IL-6的作用，從而導致卵巢癌的進展、惡化。但此機制尚待進一步驗證，這可能為尋找卵巢癌的治療方法提供了新靶點、開辟了新思路。