痛風靈散中非法添加吲哚美辛和醋酸潑尼松的檢測研究

陳銀華，徐凡，李海霞 (十堰市食品藥品監(jiān)督檢驗所, 湖北 十堰 442000)

李志浩 (湖北醫(yī)藥學院附屬東風醫(yī)院, 湖北 十堰 442000)

中成藥、保健品非法添加化學藥品現(xiàn)象在我國屢見不鮮，多年來，藥品監(jiān)督管理部門從未停止過對非法添加的專項整治和打擊，但面對巨大的市場誘惑，不法商人仍然愿意鋌而走險，打著中藥治病，純天然保健的旗號，偷偷在中成藥和保健品中加入西藥成分。非法添加化學藥品的中成藥和保健品多用于治療慢性病和一些疑難病癥，短期內可以起到明顯的療效，但是給人民群眾的用藥安全帶來巨大風險。譬如在治療難以治愈的痛風病等中藥制劑中非法添加激素類、鎮(zhèn)痛抗炎類等化學藥品，長期服用會給患者帶來不良后果[1]。

吲哚美辛和醋酸潑尼松為臨床上較為常見的非甾體抗炎藥和糖皮質激素，其消炎、退熱、鎮(zhèn)痛效果顯著，且價廉見效快。因此常被不法商人添加進用于治療痛風病等慢性疾病的中成藥和保健品中，但其副作用極大。為了有效打擊制假行為，筆者采用旨在建立HPLC-二極管陣列法(DAD)，以檢測出其中非法添加的吲哚美辛和醋酸潑尼松。現(xiàn)報道如下。

1 儀器和試藥

Dianox U-3000高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器(美國戴安公司)；XS105十萬分之一電子天平(德國METTLER TLLEDO)；元素型1840A超純水器(重慶摩爾)；吲哚美辛對照品(批號100258，含量100%)、雙氯芬酸鈉對照品(批號:100334-200302，含量:100% )、布洛芬對照品(批號100179-200804，含量100.0%)、醋酸潑尼松對照品(批號10012-0105)、醋酸地塞米松對照品(批號100122-201206)、地塞米松對照品(批號100129-201105)、氫化可的松對照品(批號100152-200206)均由中國食品生物制品研究院提供，供含量測定用；痛風靈散1批(市民送樣，稱購自私人診所)；乙腈為色譜純(美國天地)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

精密稱取上述對照品適量，加甲醇分別制成濃度為0.2mg/mL的溶液作為對照品溶液。取樣品痛風靈散內容物，混合均勻，精密稱取約相當于一包的量，置100mL量瓶中，加甲醇80mL，超聲提取30min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，過濾，濾液作為供試品溶液。

2.2 薄層色譜初篩

取供試品溶液和各對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-冰乙酸(10∶10∶0.2)為展開劑，預飽和20分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品色譜相應的位置上，檢出了相應的熒光淬滅斑點。見圖1。

圖1 供試品和各對照品溶液色譜圖

2.3 高效液相色譜條件

色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以庚烷磺酸鈉(庚烷磺酸鈉15.2mg，加三乙胺0.8mL，加水至1000mL，用冰乙酸調pH值至3.3)-甲醇-乙腈(25∶30∶0.18)為流動相，檢測波長為254nm(全波長掃描)，柱溫30℃，流速1ml/min，進樣10uL。

2.4 線性關系考察

由于薄層色譜初篩及液相色譜只檢出了吲哚美辛和醋酸潑尼松兩個成分，因此含量測定的方法只考慮這兩個成分。精密量取吲哚美辛對照品溶液1、2、4、6、8、10mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度；精密量取醋酸潑尼松對照品溶液1、2、4、6、8、10mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述方法測定，以峰面積(A)對進樣濃度(C)作標準曲線，分別計算吲哚美辛和醋酸潑尼松的回歸方程。吲哚美辛：A=246.9920C-6.6451,r=0.9995。吲哚美辛在0.069～0.691mg/mL范圍內具有良好的線性。醋酸潑尼松：A=157.5508C-0.2081，r=0.9997。醋酸潑尼松在0.035～0.352mg/mL范圍內具有良好的線性。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液，在2.3項的色譜條件下連續(xù)進樣6次，計算吲哚美辛和醋酸潑尼松的RSD，分別為0.25%和0.30%(n=6)

圖2 供試品與醋酸潑尼松和吲哚美辛對照品溶液的全波長匹配

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，在2.3項色譜條件下，每2h測定一次，連續(xù)測定7次，結果表明供試品溶液在12h內穩(wěn)定，樣品中吲哚美辛和醋酸潑尼松的RSD分別為0.44%和0.67%(n=7)。

2.7 加樣回收試驗

取已知含量的樣品(相當于0.5包痛風靈散)，精密稱取3份，分別加入吲哚美辛對照品16.8、21.0、25.2mg和醋酸潑尼松6.4、8.0、9.6mg，按2.1項下的方法制備供試品溶液，以2.3項下的色譜條件測定，計算回收率。吲哚美辛的平均回收率為99.0%，RSD為1.68%(n=3)；醋酸潑尼松的平均回收率為98.3%，RSD為1.81%(n=3)。

2.8 樣品的檢驗結果

用2.2和2.3項色譜條件對該散劑進行檢驗，該樣品薄層色譜圖中只有兩個熒光淬滅斑點，其Rf值與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品一致；液相色譜圖中也只顯示兩個峰，它們的HPLC保留時間與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品一致，經(jīng)過全波長光譜的匹配度檢驗，與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品的庫相似度分別為999.81和999.89。見圖2。基本可以確定為吲哚美辛和醋酸潑尼松。經(jīng)含量測定，結果每包痛風靈散中含有吲哚美辛42.1mg，醋酸潑尼松16.7mg。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

參考相關文獻[2～4]，曾試用不同比例的甲醇-水,甲醇-磷酸-水，乙睛-冰醋酸-水，乙睛-水等流動相系統(tǒng)進行等度和梯度洗脫分離。經(jīng)過試驗，上述流動相系統(tǒng)在測定五種化學物質時，有的分離度較差，有的理論板數(shù)過低。最終采用了庚烷磺酸鈉(庚烷磺酸鈉15.2mg，加三乙胺0.8mL，加水至1000mL，用冰乙酸調pH值至3.3)-甲醇-乙腈(25∶30∶0.18)為流動相，結果顯示本法操作簡便，供試品溶液中組分分離度良好，塔板數(shù)較高。

3.2 含量測定檢測波長的選擇

從兩種物質全波長掃描圖可以看出，吲哚美辛的最大吸收在257nm，醋酸潑尼松的最大吸收在242nm，均在254nm附近有比較大的吸收值，故選擇254 nm作為檢測波長。

3.3 提取溶劑和提取時間的選擇

取適量樣品7份，分別加甲醇、60%甲醇、20%甲醇、無水乙醇、60%乙醇、20%乙醇、水20mL，超聲提取30min，過濾，測定，結果用甲醇處理效果最佳。取樣品，加甲醇，分別超聲處理10、20、30、40、50、60min后，測定，計算，結果在30min內提取完全。故選擇溶劑甲醇、超聲30min。

3.4 檢驗結果分析

經(jīng)檢驗，該散劑薄層色譜只有兩個熒光淬滅斑點，HPLC基線平整，且只有兩個色譜峰，初步判斷該散劑中可能不含中藥成分，僅含兩種化學藥，其薄層Rf值及液相保留時間與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品一致。對兩個峰進行二極管陣列紫外光譜檢測，與吲哚美辛和醋酸潑尼松對照品匹配。因此可以基本判斷出該假藥非法添加了這吲哚美辛和醋酸潑尼松。下一步將采用HPLC-MASS進行進一步驗證。

該批樣品為群眾投訴樣品。該樣品標注名稱為“痛風靈散”，為一個體醫(yī)生中藥祖?zhèn)髅胤剑幏讲还_，無生產(chǎn)廠家。每日服用兩次，每次1包，患者服用后療效顯著，痛風癥狀立即減輕，服用兩天后關節(jié)紅腫疼痛基本消失，但頭痛、惡心等反應較嚴重，懷疑是藥物的副作用大，遂送檢。經(jīng)檢驗，每包中含有吲哚美辛42.1mg，醋酸潑尼松16.7mg，屬非法添加，且劑量過大，長期服用此類假藥會造成藥源性疾病，造成嚴重的毒副作用。

本方法靈敏度高、專屬性強、操作簡便快捷、環(huán)保安全、成本低廉，適用于基層單位的快速篩查吲哚美辛和醋酸潑尼松的非法添加，有效提高監(jiān)督檢驗的效率和靶向性，打擊違法行為。

[參考文獻]

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[2]張少敏,陳斌,凌善文,等.非法添加抗痛風類化學藥檢測方法的研究[J],藥學服務與研究，2012,12(3):199～201.

[3]徐軍輝,李存金,王仕平,等.中成藥中非法添加化學藥品吲哚美辛檢測方法的研究[J].中國藥品標準,2010,11(6):416～420.

[4]郭宏,張月輝.HPLC法同時測定抗風濕類中成藥中的5種糖皮質激素[J].遼寧中醫(yī)雜志,2015,42(9):1721～1723.