外周血循環(huán)腫瘤細胞與非小細胞肺癌患者臨床分期的相關性

胡瑞娟，吳兆紅 (廣州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院心胸外科，廣東 廣州 510150)

近年來，肺癌已成為所有癌癥中發(fā)病人數最多的疾病，其死亡率和和病死率呈逐年上升趨勢，已居城市惡性腫瘤之首，肺癌又可細分為小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，后者占據肺癌發(fā)病率的80%，其復發(fā)和轉移是致使患者死亡的主要原因[1]。循環(huán)腫瘤細胞(CTCs)為自發(fā)或因診斷和治療操作導致實體瘤或轉移灶釋放進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞[2]。我們采用免疫磁珠富集腫瘤細胞結合免疫熒光染色和熒光原位雜交的循環(huán)腫瘤細胞檢測技術[3]，檢測不同分期的非小細胞肺癌患者的CTCs數目，外周血循環(huán)腫瘤細胞與非小細胞肺癌患者臨床分期的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2015年6月至2017年6月，經手術、支氣管鏡、縱隔鏡等方式活檢或者經細胞學檢查確診為非小細胞肺癌的72例患者，其中組織病理分型為：腺癌46例，鱗癌22例，腺鱗癌3例，大細胞癌1例；男性35例,女性37例；年齡41～78歲，中位年齡為61歲。臨床分期根據術中、術后的病理、胸部CT、纖維支氣管鏡檢查的結果，采用國際抗癌聯(lián)盟新頒布的2017第8版肺癌的TNM分期標準分期；其中ⅠA期的病例8例，ⅠB期的10例，ⅡA期5例，ⅡB期5例，ⅢA期8例，ⅢB期5例，ⅢC期6例，ⅣA期的10例，ⅣB期15例。沒有患其他惡性腫瘤或合并其他惡性腫瘤，即原發(fā)腫瘤為肺癌；也同時排除其他器官有重大疾病史、器官功能不全以及器官移植患者。該組病例CTCs檢測前確定沒有接受過任何抗腫瘤的治療。同期抽取來我院體檢的健康對照者28例外周血清標本。本研究方案經醫(yī)院倫理委員會審議通過，所有患者都予以告知研究意義及方案并獲得同意。

1.2 檢測方法

采用免疫磁珠富集腫瘤細胞結合免疫熒光染色和熒光原位雜交的循環(huán)腫瘤細胞檢測技術[3]。應用真空采血管采集肘正中靜脈血。為防止靜脈穿刺過程中上皮細胞污染，前2mL血不采集，采集此后的3.2mL靜脈血于ACD抗凝管中。采集的血液在48h內去除血漿，裂解液去除紅細胞，磁珠孵育混勻去除白細胞，分離液分離富集腫瘤細胞。使用CD45抗體進行細胞免疫熒光檢測，用7、8號著絲粒探針進行熒光原位雜交。在熒光顯微鏡下計數，二倍體信號或者CD45陽性為正常細胞，大于等于三倍體且CD45陰性為異常細胞，≥2個異常細胞判斷為循環(huán)腫瘤細胞陽性。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

經免疫磁珠陰性法富集后，利用7、8號染色體著絲粒探針標記細胞，通過雜交信號判斷是否存在超二倍體細胞。72例惡性腫瘤患者中有40例出現7、8號染色體拷貝數增多，即超二倍體細胞(陽性率為55.56%)。而健康組的陽性率為0%。

循環(huán)腫瘤細胞陽性率為55.56%(40/72)，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的陽性率分別是33.3%、60.0%、57.9%、68.0%，陽性病例：ⅠA期3例(3/8)，ⅠB期3例(3/10)，ⅡA期3例(3/5)，ⅡB期3例(3/5)，ⅢA期5例(5/8)，ⅢB期3例(5/8)，ⅢC期3例(3/6)，ⅣA期6例(6/10)，ⅣB期11例(11/15)。表現為陰性32例(假陰性率44.44%)：ⅠA期5例，ⅠB期7例，ⅡA期2例，ⅡB期2例，ⅢA期3例，ⅢB期2例，ⅢC期3例，ⅣA期4例，ⅣB期4例。循環(huán)腫瘤細胞陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。此外，Ⅲ期和Ⅳ期CTCs達到5以上的患者人數明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期，見表1。

表1 循環(huán)腫瘤細胞陽性率與非小細胞肺癌臨床分期的關系

3 討論

在本研究中，非小細胞肺癌患者的循環(huán)腫瘤細胞的檢測總陽性率為55.56%，而同期非惡性腫瘤患者中循環(huán)腫瘤細胞的檢測率為0%，這說明本研究使用的循環(huán)腫瘤細胞的檢測方法有較好的特異性。本研究使用的方法是使用磁珠富集腫瘤細胞，并結合了免疫熒光染色和熒光原位雜交兩種技術，不受上皮標志物表達所限，可提高循環(huán)腫瘤細胞檢測的敏感性和特異性[4]。

臨床分期是評價非小細胞肺癌的基本方法。本研究發(fā)現，在ⅠA、ⅠB、ⅡA、ⅡB、ⅢA、ⅢB、ⅢC、ⅣA、ⅣB期CTCs陽性率分別為37.5%、30.0%、60.0%、60.0%、62.5%、60.0%、50.0%、60.0%、73.3%。說明CTCs陽性率及數目可以成為臨床分期的一個重要指標和佐證。

由于循環(huán)腫瘤細胞是腫瘤細胞脫落進入血液系統(tǒng)的，故極易隨著血流進入身體其他器官，導致腫瘤轉移[5,6]。有研究在非小細胞肺癌患者中發(fā)現，CTCs可以早期預測腫瘤的轉移[7]，本研究入組病例數少、特別是早期病例不多，還需要進一步研究證實。此外，還有研究結果發(fā)現非小細胞肺癌患者外周血中存在的CTCs與患者的療效及預后有極大相關性，當CTCs≥5時，預后更差[8]。

綜上所述，CTCs檢測的陽性率與非小細胞肺癌的臨床不同分期呈正相關性，可用于NSCLC的病情監(jiān)測、療效評估及預測預后。但循環(huán)腫瘤細胞的檢測中仍存在假陰性，對于非小細胞肺癌的臨床意義還有待進一步的驗證。

[參考文獻]

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[8] 馮也倩.循環(huán)腫瘤細胞計數在非小細胞肺癌患者的臨床應用研究[D].長沙：中南大學,2009.DOI:10.7666/d.y1535990.