顆粒飼料中小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能和腸道屏障功能的影響

丁雪梅，鐘麗梅，李東東，曾秋鳳，張克英，白世平，王建萍

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所,成都611130)

粉碎是飼料加工過程的重要工序，對飼料的生產(chǎn)能耗、顆粒質(zhì)量和動物的生產(chǎn)性能、腸道健康都有很大的影響[1-3]。粉碎粒度過大，飼料在消化道內(nèi)的消化率低，動物排泄的氮、磷等增加，污染環(huán)境的同時造成資源的極大浪費(fèi)；而粒度過細(xì)，飼料能耗增加，同時容易造成動物胃腸道疾病，損害機(jī)體的健康。飼料粉碎粒度對家禽的影響與多種因素有關(guān)，如粉碎機(jī)類型(錘片式或?qū)伿?、飼料類型(玉米型或小麥型)、飼料物理形態(tài)(顆粒料或粉料)、飼糧的復(fù)雜度、家禽腸道發(fā)育情況等[4]。隨著小麥在飼糧中使用量的增加，小麥型飼糧中非淀粉多糖的問題被酶制劑減弱后，人們更關(guān)注如何通過飼料加工技術(shù)科學(xué)合理的使用小麥，而適宜的粉碎粒度是關(guān)鍵的問題之一。

關(guān)于小麥粉碎粒度對家禽的影響研究相對較少。本研究主要考察在添加木聚糖酶的情況下，顆粒飼料中不同小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能和腸道屏障功能的影響，為小麥型飼糧在肉雞中的合理應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

試驗采用單因子設(shè)計，小麥通過5種孔徑的篩片2、4、6、8、10 mm粉碎成5種粉碎粒度，共5個處理，每個處理7個重復(fù)，每個重復(fù)11只雞，共選用385只艾拔益加(AA)肉公雞。試驗期42 d，分1～21 d和22～42 d兩個階段。

1.2 試驗飼糧

試驗采用小麥-豆粕型飼糧。飼糧營養(yǎng)水平參照中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)，肉用仔雞營養(yǎng)需要結(jié)合生產(chǎn)中實(shí)際飼糧營養(yǎng)水平設(shè)定。試驗用豆粕粉碎過4 mm篩片。冷壓制粒。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所試驗場進(jìn)行。試驗肉雞均采用網(wǎng)上平養(yǎng)(高0.5 m×寬1 m×長1 m)。入雛前24 h將雞舍升溫至32～35 ℃，此后溫度每周降低2～3 ℃，直至保持在22～24 ℃為止。采用連續(xù)光照、自然通風(fēng)、自由采食和自由飲水的管理方式。定期打掃圈舍衛(wèi)生，常規(guī)免疫。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能測定 分別于試驗第22和43天提前12 h斷料，以重復(fù)為單位稱重，空腹稱量肉雞體重和剩余料重，計算階段體增重(BWG)、階段采食量(FI)和料肉比(F/G)。

1.4.2 空腸腸道形態(tài)觀察及測定 雞屠宰后，分離空腸，在空腸中段處剪下約1 cm的腸段，用0.9%的生理鹽水洗凈后放入4%甲醛固定液中固定。將固定好的空腸修理后用乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋進(jìn)行切片，然后用蘇木精-伊紅(HE)染色、光學(xué)顯微鏡下觀察。測量空腸絨毛高度、隱窩深度、腸黏膜厚度，并計算絨毛高度/隱窩深度比(絨隱比)。

1.4.3 空腸黏膜緊密連接蛋白和炎性因子基因相對表達(dá)量檢測 使用總RNA試劑盒(TaKaRa)RNAiso試劑盒(TaKaRa，中國大連)提取空腸黏膜總RNA。cDNA的合成采用primeScript RT試劑盒(TaKaRa，中國大連)，real-time PCR采用SYBR Premix Ex Taq(TaKaRa，中國大連)。采用Applied Biosystems 7900HT Real Time PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems，CA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增體系：SYBRGreenMix 10.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，雙蒸水8 μL，cDNA模板 1.0 μL，總體積為20.0 μL。擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性10 s， 60 ℃ 退火30 s，40個循環(huán)。基因表達(dá)水平的計算參考K.J.Livak和T.D.Schmittgen[5]的方法。采用384孔板，每個樣品測定3個平行。基因相對表達(dá)量采用2-△△CT法分析，內(nèi)參基因選用GAPDH。以6 mm的小麥粉碎粒度為對照組，引物設(shè)計使用Primer3.0軟件。基因引物序列如表2所示。

表1基礎(chǔ)飼糧組成及與營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

Table1Compositionandnutrientlevelsofdiets(air-drybasis) %

1. 多維為每千克飼糧提供：維生素A 12 000 IU，維生素D33 000 IU，維生素E 7.5 IU，維生素K21.5 mg，維生素B10.6 mg，維生素B24.8 mg，維生素B61.8 mg，維生素B120.009 mg，煙酸 10.5 mg，D-泛酸鈣 7.5 mg，葉酸 0.15 mg。2. 預(yù)混料為每千克試驗飼糧提供：鐵100 mg (FeSO4·H2O)，銅 8 mg (CuSO4·5H2O)，錳 120 mg (MnSO4·H2O)，鋅 100 mg (ZnSO4·H2O)，碘 0.7 mg(KI)，硒 0.35 mg (Na2SeO3)，500 mg·kg-1木聚糖酶。3. 營養(yǎng)水平為計算值

1. Compound vitamin provided the following per kilogram of experimental diets：VA 12 000 IU，VD33 000 IU，VE 7.5 IU，VK21.5 mg，VB10.6 mg，VB24.8 mg，VB61.8 mg，VB120.009 mg，niacin acid 10.5 mg， D-calcium pantothenate 7.5 mg，folic acid 0.15 mg.2. Premix provided the following per kilogram of experimental diets：Fe 100 mg (FeSO4·H2O)，Cu 8 mg (CuSO4·5H2O)，Mn 120 mg (MnSO4·H2O)，Zn 100 mg (ZnSO4·H2O)，I 0.7 mg(KI)，Se 0.35 mg (Na2SeO3)，500 mg·kg-1xylanase.3. Nutrient levels were calculated values

1.4.4 盲腸微生物數(shù)量檢測 使用RT-PCR Taqman探針法(表3)測定盲腸微生物數(shù)量。取肉雞盲腸食糜樣品，保存于液氮中，采用Bio-Rad公司CFX96實(shí)時定量PCR儀，乳酸桿菌、沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌及大腸桿菌數(shù)量應(yīng)用Taqman探針進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，使用SuperReal MaterMix試劑盒(TIANGEN，中國，北京)進(jìn)行測定，采用10 μL反應(yīng)體系：包括2×SuperRealpreMix 5 μL，上下游引物各0.3 μL，探針0.2 μL，ddH2O 3.2 μL和1 μL的DNA模板。總菌使用SYBR Premix Ex TaqTM II (Tli RNaseH Plus)試劑盒(TIANGEN，中國，北京)進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，采用20 μL反應(yīng)體系：包括 SYBR Premix Ex Taq Ⅱ10 μL，上、下游引物各0.8 μL，50×ROX Reference Dye 0.4 μL，ddH2O 6 μL和2 μL的DNA模板。

乳酸桿菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌及沙門氏菌數(shù)量采用Taqman探針法PCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)程序。大腸桿菌：95 ℃預(yù)變性15 min；95 ℃ 3 s，60 ℃ 30 s，共40個循環(huán)。大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌和沙門氏菌分別共40個循環(huán)，乳酸桿菌共50個循環(huán)。

總菌采用SYBR法PCR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)程序：95 ℃預(yù)變性10 s；95 ℃ 5 s，59.5 ℃ 25 s，共40個循環(huán)；熔解曲線條件為65 ℃ 5 s，95 ℃ 1 min，95 ℃ 10 s。

結(jié)果用每克內(nèi)容物中細(xì)菌數(shù)量的常用對數(shù)表示[lg (copies·g-1)]。總細(xì)菌引物序列參考N.Fierer等[6]的方法；乳酸桿菌屬及大腸桿菌屬引物和探針序列參考葛忠源[7]的研究；沙門氏菌屬引物和探針序列參考S.H.Lee等[8]的研究；產(chǎn)氣莢膜梭菌屬引物序列參考石玉玲等[9]的研究。

表2擴(kuò)增目的基因和內(nèi)參基因的引物序列

Table2Theprimersequencesamplifyingtargetgenesandhouse-keepinggene

基因Gene基因序列號GenBankNo.序列(5'-3')Forwardprimer序列(5'-3')Reverseprimer片段長度/bpSizeoccludinNM_205128.1GCTGAGATGGACAGCATCAACCTCTGCCACATCCTGGTAT97claudin-1NM_001013611.2CATGAAGTGCATGGAGGATGGTGCTGACAGACCTGCAATG89ZO-1XM_413773.4TAAGGGGAAGCCAACTGATGGAAGGAGCAGGAGGAGGAGT99IL-1βNM_204524.1GCCTCAGCGAAGAGACCTTGTCCACTGTGGTGTGCTCAG86IL-6NM_204628.1CTCCTCGCCAATCTGAAGTCCCCTCACGGTCTTCTCCATA100IL-4NM_001007079.1GAGAGGTTTCCTGCGTCAAGAACAATTGTGGAGGCTTTGC98TNF-αNM_204267.1AGATGGGAAGGGAATGAACCACTGGGCGGTCATAGAACAG120GAPDHK01458GGTGGTGCTAAGCGTGTTATACCTCTGTCATCTCTCCACA264

表3肉雞盲腸微生物檢測引物及探針序列

Table3Sequencesoftheprimerandprobeforthedetectionspecificforcecalbacteriasinbroiler

項目Item引物/探針名稱及序列(5'-3')Primer/probenameandsequence總菌TotalbacteriaEub338F:ACTCCTACGGGAGGCAGCAGEub518R:ATTACCGCGGCTGCTGG乳酸桿菌LactobacillusRS-F:GTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCRS-R:CCACCTTCCTCCGGTTTGTRS-P:(FMA)CGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCA沙門氏菌SalmonellaSQ-F:AAATCGTGCAGTGGCTTASQ-R:AAGGCGCGGTCTTTACTATCSQ-P:TTTTTCCGCGTATCAGCCTTGTA產(chǎn)氣莢膜梭菌C.perfringensYB-F:CGCATAACGTTGAAAGATGGYB-R:CCTTGGTAGGCCGTTACCCYB-P:(FMA)TCATCATTCAACCAAAGGAGCAATCC(BHQ-1)大腸桿菌EscherichiacoliDC-F:AATGGCGCATACAAAGAGAAGCDC-R:GTTGCAGACTCCAATCCGGADC-P:CACTTTATGAGGTCCGCTTGCTCTCGC

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計

采用SPSS21.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)及線性(Linear)和二次(Quadratic)相關(guān)分析，差異顯著者采用LSD法進(jìn)行多重比較。分析結(jié)果用“平均值±SEM”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 肉雞顆粒飼料中的小麥粉碎粒度

錘片粉碎機(jī)分別用孔徑為2、4、6、8、10 mm的篩片進(jìn)行粉碎，對應(yīng)篩片粉碎小麥實(shí)測幾何平均粒度分別為460、580、760、880、1 100 μm。具體粒度分布見圖1。

2.2 小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能的影響

從表4可知，小麥粉碎粒度顯著影響肉雞1～21 d平均階段增重(BWG)和采食量(FI)，當(dāng)粒度為4 mm時，BWG顯著高于2、8、10 mm組(P<0.05)，且BWG與小麥粉碎粒度呈顯著的二次曲線關(guān)系(P<0.05)；1～21 d當(dāng)粒度為4和6 mm時，F(xiàn)I顯著高于粒度為2 mm組(P<0.05)，與其余各組沒有顯著差異；小麥粉碎粒度對22～42 d和1～42 d BWG和FI均無顯著影響(P>0.05)；小麥粉碎粒度顯著影響肉雞各階段料肉比(F/G)(P<0.05)，粒度為6 mm 時，1～21 d肉雞的F/G顯著低于2、8、10 mm組(P<0.05)；粒度為10 mm 時，22～42 d和1～42 d 肉雞的F/G顯著高于其余各組(P<0.05)，且F/G與小麥粉碎粒度呈顯著的線性相關(guān)(P<0.05)。

圖1 5種不同孔徑篩片粉碎的小麥粒度分布Fig.1 Particle size distribution of wheat with 5 different screen sizes

表4小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能的影響

Table4Effectsofwheatgrindingparticlesizeongrowthperformanceofbroilers

項目Item篩片孔徑/mmAperturesizeofscreensurface246810SEMP-值P-valueTreatmentLinearQuadratic階段增重/gBWG1～21d728.3c828.7a819.4ab752.6c772.0bc18.60.0020.8500.00422～42d1787.91882.41843.11871.51783.160.00.6700.9150.1941～42d2516.22711.12662.52624.12555.062.30.1980.9630.034采食量/gFI1～21d1097.9b1222.8a1195.2a1144.0ab1182.3ab29.00.0440.3350.08022～42d3185.93375.43336.43380.23359.0106.60.6820.30600.4031～42d4283.84598.14531.64524.24541.3110.20.3200.2150.204料肉比F/G1～21d1.51ab1.47bc1.46c1.52a1.53a0.020.0110.0660.00922～42d1.79b1.79b1.81b1.81b1.88a0.020.0110.0020.1101～42d1.69b1.69b1.69b1.71b1.76a0.020.0090.0020.130

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference(P<0.05),while values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference(P>0.05).The same as below

2.3 小麥粉碎粒度對肉雞空腸形態(tài)的影響

從表5可以看出，小麥粉碎粒度對肉雞21和42 d的空腸腸道形態(tài)存在顯著的影響(P<0.05)。21 d時，4、6 mm組空腸絨毛高度顯著高于2、8 mm組(P<0.05)，與10 mm組差異不顯著(P>0.05)；與2 mm組相比，4、6、8、10 mm組空腸隱窩深度顯著降低(P<0.05)，絨隱比顯著增加(P<0.05)，二者與小麥粉碎粒度呈顯著的二次曲線關(guān)系(P<0.05)；8 mm組空腸黏膜厚度顯著低于4、6、10 mm組(P<0.05)。42 d時，絨毛高度、黏膜厚度和絨隱比呈顯著的線性增加(P<0.05)；4 mm組隱窩深度顯著低于2、6、10 mm組，且隱窩深度與小麥粉碎粒度呈顯著的二次曲線關(guān)系(P<0.05)。

2.4 小麥粉碎粒度對肉雞空腸黏膜緊密連接蛋白基因表達(dá)的影響

由表6可知，隨著小麥粉碎粒度的增加，21 d時，肉雞空腸黏膜ZO-1、occludin和claudin-1 的mRNA表達(dá)量也相應(yīng)提高，10 mm組occludin的mRNA表達(dá)量顯著高于2、4和6 mm組(P<0.05)，且ZO-1和occludin的mRNA表達(dá)量呈顯著的線性增加(P<0.05)；但42 d時，各組間沒有顯著差異(P>0.05)。

表5小麥粉碎粒度對肉雞空腸腸道形態(tài)的影響

Table5Effectsofwheatgrindingparticlesizeonjejunummorphologyofbroilers

μm

表6小麥粉碎粒度對肉雞空腸黏膜緊密連接蛋白mRNA相對表達(dá)量的影響

Table6EffectsofwheatgrindingparticlesizeontherelativeexpressionoftightjointproteinmRNAofbroilers

項目Item篩片孔徑/mmAperturesizeofscreensurface246810SEMP-值P-valueANOVALinearQuadratic21dZO-10.941.112.022.272.920.580.1220.0120.886occludin0.78b1.15b1.66b2.19ab3.93a0.660.0260.0020.251claudin-12.673.085.575.848.312.460.4770.0860.83342dZO-11.081.331.130.721.670.840.9160.7940.671occludin0.480.611.650.240.440.390.1070.6330.079claudin-10.661.431.190.570.850.490.5140.7050.393

2.5 小麥粉碎粒度對肉雞空腸黏膜細(xì)胞因子基因表達(dá)的影響

由表7可知，21 d時，與2 mm組相比，隨著小麥粉碎粒度的增加，肉雞空腸黏膜IL-4的mRNA表達(dá)量顯著提高(P<0.05)，且呈顯著的線性增加(P<0.05)；對TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)量沒有顯著影響 (P>0.05)。42 d時，各組間無顯著差異(P>0.05)。

2.6 小麥粉碎粒度對肉雞盲腸微生物的影響

由表8可知，隨著小麥粉碎粒度的增加，肉雞盲腸食糜中乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加(P<0.05)，呈顯著的線性增加(P<0.05)，沙門氏菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量顯著降低(P<0.05)，呈顯著的線性降低(P<0.05)，而總菌數(shù)量與小麥粉碎粒度呈顯著的二次曲線關(guān)系(P<0.05)。

表7小麥粉碎粒度對肉雞空腸黏膜炎性因子mRNA相對表達(dá)量的影響

Table7EffectsofwheatgrindingparticlesizeonmRNAexpressionforinflammatoryfactorsofjejunuminbroiler

項目Item篩片孔徑/mmAperturesizeofscreensurface246810SEMP-值P-valueTreatmentLinearQuadratic21d腫瘤壞死因子α1.940.861.372.012.540.500.1490.1140.054TNF-α白介素6IL-61.382.332.593.524.661.170.4380.0650.818白介素1βIL-1β2.443.412.703.065.201.190.4850.1640.420白介素4IL-40.27a1.18b1.26b1.67b3.83b0.730.0330.0040.29342d腫瘤壞死因子α1.921.351.060.991.790.530.4870.6430.098TNF-α白介素6IL-60.110.861.480.163.470.640.4490.1780.563白介素1βIL-1β0.380.621.030.260.600.250.2030.9110.230白介素4IL-40.210.752.680.240.540.820.1960.9480.102

表8小麥粉碎粒度對肉雞盲腸微生物數(shù)量的影響

Table8Effectsofwheatgrindingparticlesizeonmicrobialcountincaecumofbroilers

copies·g-1

3 討 論

3.1 顆粒飼料中小麥粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能的影響

大量研究表明，飼料原料的粉碎粒度對肉雞生長性能有著很重要的影響，粉碎粒度過大或者過小都不利于肉雞的生長。同時，粉碎粒度對生產(chǎn)性能的影響與料型有很大關(guān)系。經(jīng)過制粒后，粉碎粒度就主要取決于顆粒飼料在嗉囊內(nèi)溶化破碎后的粒度[10]。有研究表明，不同粉碎粒度的玉米型日糧、小麥型日糧和玉米-小麥型日糧均不影響肉雞的采食量、體增重和飼料轉(zhuǎn)化率[11-13]。但本研究表明，小麥粉碎粒度與肉雞體增重和采食量呈二次曲線關(guān)系，而與前期料肉比呈顯著的二次曲線關(guān)系，與后期和全期料肉比呈顯著的線性關(guān)系，這和A.M. Amerah等[14]得到的顆粒料中粗粉碎(7 mm孔徑)相對中等粉碎(3 mm孔徑)的料肉比要低的結(jié)果一致。同時也有報道認(rèn)為，粉碎粒度較小的玉米日糧提高了肉雞的體增重和飼料轉(zhuǎn)化率[15]，這與本試驗中粉碎較小的小麥型飼糧對肉雞生產(chǎn)性能的影響作用也是一致的。且I. Nir等[10]研究報道，肉雞飼料谷物的粉碎粒度為中粒度即700～900 μm時，肉雞的生長性能最佳；有關(guān)研究報道，粉碎粒度從0.9 mm增加到1.47～1.75 mm，肉仔雞的增重及飼料轉(zhuǎn)化率明顯降低。本試驗結(jié)果也表明，4～6 mm孔徑(幾何粒徑為580～760 μm)時，肉雞的生產(chǎn)性能最佳，當(dāng)粒徑再增加時生產(chǎn)性能降低，這與前人結(jié)果基本一致。但在W.A.Dozier等[16]的研究中發(fā)現(xiàn)，料肉比和玉米粉碎粒度沒有顯著關(guān)系。P.M.Clark等[17]也發(fā)現(xiàn)，飼喂玉米型飼糧時，料肉比隨粉碎粒度增大而遞減。張現(xiàn)玲等[18]在玉米-豆粕型飼糧中，谷物通過1.5、2.0、2.5和3 mm 4個不同的篩片孔徑粉碎，在相同調(diào)質(zhì)溫度下，隨著粒度的增加，體重和采食量也顯著增加，但對料肉比沒有顯著影響。說明，顆粒飼料中粉碎粒度對肉雞生產(chǎn)性能仍然有一定的影響，這種影響可能與谷物種類，谷物特性以及試驗動物品種都有一定的關(guān)系。

研究發(fā)現(xiàn)，在1～21 d肉雞中，小麥粒度不影響肉雞生產(chǎn)性能，添加酶制劑也不影響體增重和采食量，但飼料粒度和酶制劑在料肉比上存在顯著的互作效應(yīng)，粗粒度(7 mm孔徑)飼糧添加酶制劑降低了料肉比[14]。本試驗飼糧類型為小麥-豆粕型，所以在飼糧中添加了相同劑量的木聚糖酶。從本試驗結(jié)果來看，小麥通過4～6 mm孔徑(幾何粒徑為580～760 μm)時，肉雞的生產(chǎn)性能最佳，當(dāng)粒徑再增加時生產(chǎn)性能卻出現(xiàn)降低。這與前人的研究結(jié)果一致。說明不同粉碎粒度小麥對肉雞生產(chǎn)性能的影響與飼糧中木聚糖酶的添加也有一定關(guān)系。

3.2 顆粒飼料中小麥粉碎粒度對肉雞空腸機(jī)械屏障的影響

機(jī)械屏障又稱物理屏障，在腸道屏障中尤為重要，它是由腸黏膜上皮細(xì)胞及其緊密連接等組成的完整的彼此緊密連接的腸道上皮結(jié)構(gòu)[19]。空腸是營養(yǎng)物質(zhì)吸收的重要部位，其上皮細(xì)胞發(fā)育狀況直接影響營養(yǎng)代謝和生長性能。張春蘭等[20]在蛋雞上的研究發(fā)現(xiàn)，十二指腸絨毛高度、絨隱比隨玉米粒度的增加而增加，而隱窩深度相應(yīng)降低(P<0.05)。田玉民等[21]發(fā)現(xiàn)，飼喂粗粉碎粒度的肉雞空腸絨毛較高，而空腸肌層厚度較薄。本研究表明，肉雞空腸絨毛高、黏膜層厚和絨隱比都隨粉碎粒度的增大線性遞增及先增大后減小的二次曲線關(guān)系。這與前人的研究結(jié)果一致。可能是由于粒度大的飼糧在消化道中流通時間較長，對腸絨毛及腸腺的刺激作用導(dǎo)致的。G.G.Zhang等[22]得到類似結(jié)論。但也有不一致的報道，有研究報道表明，粉碎粒度對肉雞腸道形態(tài)沒有顯著影響[23]。I.R?he等[24]研究發(fā)現(xiàn)，無論是粉料還是破碎料，細(xì)粉碎組的絨毛均高于粗粉碎組。造成這種不一致可能是試驗階段及飼糧類型不同所導(dǎo)致的。

緊密連接主要由跨膜蛋白(Occludin、claudins、Junctional adhesion molecules、Tricellulin和Nectin)、胞質(zhì)蛋白ZO(Zonula occludens proteins)家族和細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)共同構(gòu)成的復(fù)合物。J. W.Zhao等[25]發(fā)現(xiàn)，occludin和claudin能夠通過影響緊密連接通透性維持來調(diào)節(jié)腸道物理屏障功能。本研究表明，飼喂顆粒料21 d，ZO-1、occludin和claudinmRNA相對表達(dá)量均隨小麥粉碎粒度的增大呈線性遞增。42 d時ZO-1、occludin和claudin1相對表達(dá)量沒有顯著影響。說明在1～21 d增大粉碎粒度有利于維持空腸黏膜機(jī)械屏障的完整性，利于腸道健康，但不是越大越好。關(guān)于飼料粉碎粒度對腸道緊密連接蛋白基因表達(dá)的研究目前未見報道。有研究表明，腸道上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的基因表達(dá)量與腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物有關(guān)[26]。有害微生物黏附于腸道上皮細(xì)胞，會引起腸黏膜功能紊亂，緊密連接屏障被破壞[27]。飼料粉碎粒度可能通過影響腸道微生物進(jìn)而影響腸道黏膜緊密連接蛋白的基因表達(dá)，但其具體作用機(jī)理還需進(jìn)一步研究。

3.3 顆粒飼料中小麥粉碎粒度對空腸免疫屏障功能的影響

腸道作為動物體中最大的免疫器官承擔(dān)著耐受飼糧抗原和免疫防御的雙重任務(wù)。白介素(Interteukin,IL)對免疫細(xì)胞分化及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)有重要作用[28]。IL-1、IL-6為促炎細(xì)胞因子，參與細(xì)胞免疫反應(yīng)；而IL-4為抗炎細(xì)胞因子，參與體液免疫[29]。IL-1β和IL-6能激活多種免疫和炎癥細(xì)胞，引起腸道炎癥反應(yīng)及組織破壞，其mRNA的表達(dá)與腸道炎癥的發(fā)生密切相關(guān)[30]。D.C. Baumgart和S.R. Carding[31]研究證實(shí)，動物腸道黏膜免疫功能常與細(xì)胞因子調(diào)控的炎癥反應(yīng)有關(guān)。關(guān)于飼料粉碎粒度對腸道免疫屏障功能的影響目前未見報道。本試驗結(jié)果表明，隨著小麥粉碎粒度的增加，21 d時肉雞空腸黏膜IL-4的mRNA表達(dá)量顯著提高(P<0.05)，呈顯著的線性遞增，但小麥粉碎粒度對TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)量沒有顯著影響。鑒于腸道健康與細(xì)胞因子間的關(guān)系，可以推測，粉碎粒度可能通過影響腸道健康進(jìn)而影響細(xì)胞因子的表達(dá)量，小麥粉碎粒度較大，有利于腸道健康。而腸道健康與腸道微生物有密切關(guān)系。研究表明，在肉仔雞飼糧中添加鮑氏酵母菌和枯草芽孢桿菌可顯著增加occludin、claudin-2、claudin-3的mRNA表達(dá)，并顯著增加小腸絨毛高度、寬度、杯狀細(xì)胞數(shù)量，顯著改善腸道的白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)等的含量[32]。飼料粉碎粒度可促進(jìn)腸道乳酸桿菌等有益菌的生長[33-34]。粉碎粒度對腸道免疫屏障功能的影響還有待進(jìn)一步的研究。

3.4 顆粒飼料中小麥粉碎粒度對盲腸微生物屏障的影響

腸道微生物屏障是一個由腸道共生菌與宿主的微空間結(jié)構(gòu)形成的微生態(tài)系統(tǒng)。腸道微生物對宿主的作用有兩面性，正常情況下可幫助宿主消化難以吸收的物質(zhì)，并轉(zhuǎn)化為宿主所能利用的養(yǎng)分，如氨基酸、揮發(fā)性脂肪酸等；當(dāng)微生態(tài)失去平衡時，則可能轉(zhuǎn)化為潛在危害。有研究表明，細(xì)粉碎的飼料能增加禽類盲腸內(nèi)病原微生物的數(shù)量，危害宿主健康[35]。G. Glünder[36]研究表明，飼料中添加整粒的谷物能增加腸道乳酸桿菌并減少大腸桿菌數(shù)。C. Jacobs等[33]在21 d肉雞上的研究發(fā)現(xiàn)，乳酸桿菌數(shù)隨粉碎粒度的增大而遞增(玉米粉碎粒度為557、858、1 210、1 387 μm)。Y. Singh等[34]發(fā)現(xiàn)，隨著玉米粉碎粒度的增加，乳酸桿菌呈線性遞增，而總菌則呈線性遞減。本研究表明，21和42 d乳酸桿菌都隨粉碎粒度的增大而呈線性遞增或二次曲線變化；沙門氏菌、大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌隨粉碎粒度的增大線性遞減。這與前人的報道一致。其原因可能是較大粒度促進(jìn)肌胃發(fā)育，增加胃酸的分泌及進(jìn)入腸道，降低腸道pH而有益于乳酸桿菌的生長，不利于沙門氏菌、大腸桿菌等有害微生物的生長[37-38]。但Z. Bao等[39]研究發(fā)現(xiàn)，在豬上大腸桿菌數(shù)量隨粉碎粒度的增加先降低后增加，而乳酸桿菌數(shù)量隨玉米粉碎粒度的增大先增高后降低(玉米粉碎粒度為330、430、450、470、580和670 μm)。張春蘭等[20]在蛋雞上的研究發(fā)現(xiàn)，乳酸桿菌隨玉米粉碎粒度的增大呈先增高后降低的趨勢，而對大腸桿菌數(shù)影響不顯著。C. Jacobs等[33]得到類似結(jié)果，即玉米粉碎粒度對肉雞大腸桿菌數(shù)影響不顯著。導(dǎo)致研究結(jié)果不完全一致的原因可能與飼料類型、原料種類及動物種類不同有關(guān)；也可能與不同粒度原料在通過前腸消化后，到達(dá)后腸時食糜中的組分不同以及食糜的表面結(jié)構(gòu)不同進(jìn)而影響微生物的增殖有關(guān)。

4 結(jié) 論

本試驗條件下，小麥粉碎粒度顯著影響肉雞1～21 d 的生產(chǎn)性能，以中細(xì)粉碎粒度較為適宜。小麥粉碎粒度顯著改善21 d肉雞空腸形態(tài)和空腸黏膜occludin和IL-4 mRNA的表達(dá)量，顯著增加肉雞盲腸食糜中乳酸桿菌的數(shù)量，降低沙門氏菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量，以中粗粉碎粒度效果更好。綜合考慮，在肉雞顆粒飼糧(含木聚糖酶)中小麥通過4～6 mm篩片粉碎時較適宜。

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