外周血中循環(huán)腫瘤細胞檢測在肺部良惡性病變診斷中的價值

陳 衛(wèi) 琴

(番禺區(qū)中醫(yī)院檢驗科微生物室 廣州 511400)

肺癌是世界范圍內發(fā)病率和死亡率增長最快、最高，對人類生命健康威脅最大的惡性腫瘤之一，遠處轉移是造成患者死亡的主要原因[1]。外周血中的循環(huán)腫瘤細胞(Circulating Tumor Cell，簡稱CTC)是指存在于外周血的腫瘤細胞，具有高度活力和高度轉移潛能的CTC可以在循環(huán)系統中存活，并在合適的環(huán)境中增殖，導致腫瘤的復發(fā)和轉移[2]。為探究外周血中CTC檢測在肺部良惡性病變診斷中的應用價值，本院選取133例經X線/CT檢查確診為肺部實性占位性病變患者為研究對象進行CTC檢測和腫瘤標志物檢測，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1納入標準

(1)X線/CT檢查顯示肺部最大直徑≤35mm；(2)無鈣化；(3)所有入組患者均未接受過化療；(4)本實驗經醫(yī)院倫理委員會審查通過，患者及家屬對本實驗目的及方式知情，并自愿簽署同意書。

1.1.2排除標準

(1)合并其他器質性疾病患者；(2)免疫系統疾病患者；(3)凝血功能障礙者；(4)急、慢性感染患者；(5)精神障礙者。

1.1.3分組資料

選取2014年11月～2016年11月期間于我院經X線/CT檢查確診為肺部實性占位性病變患者133例為研究對象，經手術病理證實為良性病變53例(良性病變組)，惡性病變80例(惡性病變組)。良性病變組男35例，女18例；年齡28～79歲，平均(54.43±5.89)歲；炎癥25例，結核瘤16例，炎性肌纖維母細胞瘤6例，曲霉菌感染6例。惡性病變組中男56例、女24例；年齡29～80歲，平均(55.12±6.03)歲；鱗癌37例，腺癌25例，小細胞肺癌12例，霍奇金淋巴瘤3例，轉移瘤3例。

1.2 方法

(1)使用一次性EDTA抗凝真空采血管收集兩組患者未經腫瘤相關治療前的晨間空腹狀態(tài)外周靜脈血3mL，上下顛倒7～8次后，使用ABI StepOne PCR儀(美國Applied Biosystems公司)和CTC檢測試劑(格諾思博生物科技有限公司)， 基于LT-PCR技術對細胞表面FR陽性CTC進行計數；(2)使用惰性分離膠促凝管收集兩組患者未經腫瘤相關治療前的晨間空腹狀態(tài)外周靜脈血5mL，室溫下靜置30min后，離心分離血清，使用Elecsys2010型電化學發(fā)光全自動免疫分析儀(德國羅氏診斷有限公司)測定血清中腫瘤標志物[癌胚抗原(CEA)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]水平。CEA、CYFRA21-1試劑由德國羅氏診斷有限公司提供，SCC試劑由深圳市新產業(yè)生物醫(yī)學工程有限公司提供，嚴格按照儀器和試劑說明書操作。

1.3 統計學分析

應用SPSS19.0軟件處理實驗數據，CTC和腫瘤標志物水平呈非正態(tài)分布，采用中位數表示，行Mann-Whitney U 秩和檢驗；采用ROC曲線評價CTC和腫瘤標志物對肺部良惡性病變的診斷價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者CTC和腫瘤標志物表達水平比較

兩組患者CYFRA21-1水平比較無顯著差異(P>0.05)；惡性病變組CTC和CEA水平顯著高于良性病變組，差異具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組患者CTC和腫瘤標志物表達水平比較

組別例數CTC(units/3mL)CEA(ng/mL)CYFRA21?1(ng/mL)良性病變組536．67(4．49～7．85)1．41(1．01～1．70)0．90(0．69～1．40)惡性病變組8011．06(8．77～14．42)1．61(1．10～2．50)0．90(0．61～1．42)Z-6．215-1．990-0．370P0．0010．0470．712

2.2 CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線分析

ROC曲線分析結果顯示，CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線下面積分別為0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，說明較之傳統腫瘤標志物CEA，CTC對肺部良惡性病變的診斷價值更高，見圖1。

圖1 CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線

3 討論

自從1869年，Ashworth首次提出CTC概念后，對CTC的研究逐漸成為了腫瘤領域的研究熱點[3]。大量臨床研究顯示，外周血循環(huán)CTC的檢測可以通過捕捉外周血中痕量存在的CTC，監(jiān)測CTC類型和數量變化趨勢，以便實時監(jiān)測腫瘤動態(tài)，達到評估預后療效的作用[4]；CTC數量升高提示療效不好而數量降低提示療效較好，CTC能及時反映治療過程中患者的狀況變化[5]；CTC檢測比傳統的影像學更早、更準確、更靈敏地判斷預后，治療4周后監(jiān)測CTC對于預后判斷的結果與傳統影像學在治療12周后的判斷結果極其吻合[6]。這種實時、靈敏、可靠的檢測方法可以幫助醫(yī)生正確判斷治療效果，并制定高效的個體化治療方案。

臨床研究發(fā)現，肺癌患者體內葉酸受體(FRs)表達水平較高，LT-PCR技術主要是通過FRs識別肺癌CTC。其中FR-α除在少量正常組織中(腎、胎盤等)有表達外，在正常組織和健康人血液細胞中表達水平極低，具有較強的組織和腫瘤特異性，是一種理想的肺癌CTC檢測靶點[7～8]。既往臨床研究使用LT-PCR技術對自爆表面FR陽性CTC進行計數，結果顯示肺癌良性良性病變患者體內CTC顯著高于原位肺癌患者，說明CTC檢測可用于肺癌的早期診斷與轉移檢測[9]。本研究共選取了133例肺部實性占位性病變患者為研究對象，其中良性病變53例，惡性病變80例，惡性病變組CTC和CEA水平顯著高于良性病變組，差異具有統計學意義(P<0.05)。ROC曲線分析結果顯示，CTC和CEA診斷肺部良惡性病變的ROC曲線下面積分別為0.817(95%CI：0.743～0.891)和0.613(95%CI：0.508～0.718)，證明CTC在肺部良惡性病變診斷中具有較好的臨床應用前景，可以為制定其臨床治療方案提供重要依據。

綜上所述，CTC在肺部良惡性病變診斷中具有重要臨床應用價值，可將其作為肺部良惡性病變的輔助診斷方法。

1 喬理華,王琳,婁加陶,等.循環(huán)腫瘤細胞在良惡性肺部孤立性結節(jié)鑒別診斷中的應用價值.中華檢驗醫(yī)學雜志,2016,39(12):941～945.

2 陳陽陽,張潔,徐國賓,等.肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞的檢測方法及臨床應用.臨床檢驗雜志,2015,33(8):615～617.

3 郭巧梅,喬理華,王琳,等.循環(huán)腫瘤細胞檢測對非小細胞肺癌的診斷價值.中華檢驗醫(yī)學雜志,2016,39(8):589～594.

4 徐春祥,何四軍.肺惡性疾病和良性疾病患者外周血循環(huán)腫瘤細胞的差異表達情況分析及臨床意義.海南醫(yī)學院學報,2016,22(15):1722～1725.

5 尹寒露,陰建,陳立文,等.分類檢測非小細胞肺癌患者外周血中循環(huán)腫瘤細胞的臨床價值.中華腫瘤雜志,2016,38(9):677～681.

6 溫堅,何志江,劉云軍,等.小細胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞檢測的臨床意義.黑龍江醫(yī)學,2016,40(2):151～153.

7 Wan J W,Gao M Z,Hu R J,et al.A Preliminary Study on the Relationship Between Circulating Tumor Cells Count and Clinical Features in Patients with Non-small Cell Lung Cancer.Journal of Thoracic Disease,2016,8(6):1029～1031.

8 Kim H,Chang M P,Kim S H,et al.Persistent Pulmonary Subsolid Nodules: Model-based Iterative Reconstruction for Nodule Classification and Measurement Variability on Low-dose CT.European Radiology, 2014,24(11):2700～2708.

9 Lou J T,Wang X Q,Liang X H,et al.Quantitation of Rare Circulating Tumor Cells in Non-small Cell Lung Cancer by Ligand-targeted PCR.Plos One,2013,8(12):e80458.