高效液相法測定麝香腦脈康膠囊含量的方法研究

王悅

摘 要：麝香腦脈康膠囊為我公司獨家生產(chǎn)品種，是根據(jù)中醫(yī)臨床治療中風的經(jīng)驗而篩選的中藥復方。根據(jù)當前社會發(fā)展形勢的需求與新型生物藥物的推廣，傳統(tǒng)的麝香腦脈康膠囊已經(jīng)難以滿足當前經(jīng)濟化與規(guī)格化的標準。本文將采取相應準確的方法測定藥物中三種皂苷的含量，通過相關數(shù)據(jù)理性分析及成分含量的優(yōu)化和確切數(shù)據(jù)，期望為藥品市場的發(fā)展做一份貢獻。關鍵詞：高效液相法測定；麝香腦脈康膠囊；皂苷；含量方法研究高效液相法是依據(jù)高效液色譜儀進行制備溶液的波長與峰值分析，利用較小溶液的數(shù)據(jù)對比得出相應溶液內(nèi)藥品含量的數(shù)據(jù)提取，而后通過相應的差異得出相應的含量與藥用價值結(jié)論，是確保實驗過程中相對合理科學化的主要保障設備與測量設備。1 麝香腦脈康膠囊含量測定的必要性麝香腦脈康膠囊是我國中醫(yī)藥臨床具備治療中風、平肝熄風、化瘀通絡、豁痰開竅作用的中藥復方，其藥性在主治腦梗塞恢復期有非常明顯的益處，但相比較現(xiàn)代藥物的綜合藥性相比，卻在相關的藥用和成本上偏高，其原因便出在麝香腦脈康膠囊含量——三種皂苷（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1）的傳統(tǒng)含量使用上。故而，采取先進的辦法測定三種皂苷成份含量，通過有效的臨床試驗進一步將藥效核實，在相對應區(qū)間內(nèi)進行含量調(diào)控，一方面促進了我國相關藥品的有效利用，另一方面也減輕了患者購買壓力，對企業(yè)的綜合發(fā)展有實際的意義。本方法為《中國藥典》2015版收錄的方法，其含量測定方法是將供試品經(jīng)過處理后，用紫外檢測器分析，在檢測波長為203nm處有吸收峰，根據(jù)樣品的色譜峰面積，利用外標法，可計算出總含量。本確認方案用以證明該方法在公司實驗室條件下的適用性，以保證本公司采用該方法始終能得到穩(wěn)定可靠的分析結(jié)果，從而降低對制品質(zhì)量影響的風險。2 儀器與材料2.1 實驗所需儀器沃特世高效液相色譜儀e2695、梅特勒電子天平、水浴鍋2.2 實驗材料三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品、麝香腦脈康膠囊、色譜甲醇、色譜乙腈。3 方法與結(jié)果3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性實驗針對藥品含量測驗進行相關溶液波長的測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，將乙腈和蒸餾水分別作為流動相進行梯度洗脫，測驗波長為203nm，從板數(shù)選擇應按照三七皂苷R1的特性計算，峰值不低于4000。3.2 對照品溶液的制備對照品溶液制備的目的是為了通過相應色譜進行含量分析，從而縮小相應波長的差值，將藥品溶液的含量確切進行記錄。故而，應精密稱定三七皂苷R1對照品、人參皂苷Rg1對照品和人參皂苷Rb1對照品，加甲醇溶液制成每1毫升含三七皂苷R10.1mg、人參皂苷Rg10.4mg、人參皂苷Rb10.4mg的混合溶液，即得。3.3 試品溶液的制備精密稱定麝香腦脈康膠囊5g，精密加入甲醇50毫升，稱定重量放置過夜，在80℃水浴環(huán)境中保持輕微沸騰2小時，放冷后再次稱定重量，用甲醇補足減失的重量，再進行搖勻濾過，取續(xù)濾液。3.4 輔料干擾性試驗依照藥品處方進行除三種皂苷以外的輔料樣品（水牛角濃縮粉，醋山甲粉，山羊角粉，大黃粉，硬脂酸鎂）配制，按照試品溶液的配制方法，作為陰性溶液供后續(xù)使用。同時，依據(jù)審查對比性，將精密測量的對照品溶液、試品溶液、流動相和陰性對照溶液各10μl分別注入高效液相色譜儀內(nèi)，記載相關規(guī)律和色譜圖。實驗結(jié)果表明：根據(jù)高效液色譜儀的分析，對照品溶液理論板數(shù)按三七皂苷R1峰計算大于4000。供試品溶液色譜圖中各色譜峰的保留時間應與對照品溶液色譜圖主峰的保留時間一致。陰性對照溶液與三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1對照品不存在峰值干擾的現(xiàn)象，故而也不會影響本藥品的含量測定數(shù)據(jù)。3.5 線性關系與范圍

取對照品溶液（分別取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Rb1對照品各約40mg，三七皂苷R1對照品約10mg，精密稱定，至50ml量瓶中加甲醇至刻度，溶解并混勻），分別精密量取3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml，分別加甲醇稀釋至10ml量瓶中，分別精密吸取上述溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以各主成份峰峰面積為縱坐標，以進樣量為橫坐標，進行回歸。結(jié)果表明：2.2μg～6.4μg范圍內(nèi)，人參皂苷Rg1進樣量與峰面積呈良好的線性關系y=3703942.3223×-16776.3818相關系數(shù)（R2）=0.9994>0.999；在2.2μg～6.4μg范圍內(nèi)，人參皂苷Rb1進樣量與峰面積呈良好的線性關系y=2617373.0367×-15918.7434相關系數(shù)（R2）=0.9994>0.999；在0.6μg～1.6μg范圍內(nèi)，三七皂苷R1進樣量與峰面積呈良好的線性關系y=2696900.6631×-2225.841相關系數(shù)（R2）=0.9994>0.999。3.6 重復性實驗重復性實驗的目的是為了確定樣品含量方法中無意外，并確保數(shù)值準確的方法。故而，應采取試品溶液多份進行多次高效液相色譜儀的測量，對重復性獲取的數(shù)據(jù)進行理性分析。結(jié)果表明：6份供試品各組分含量測定結(jié)果的相對標準偏差小于2.0%。3.7 精密度試驗采取多樣精密數(shù)據(jù)統(tǒng)一的試品溶液注入高效液相色譜儀進行逐步分析，并記錄相關色譜圖，確保相對應藥品含量的波長與峰值不會出現(xiàn)較大的出入，以滿足實驗自身的合理性與精密性符合要求。結(jié)果表明：重復性試驗和中間精密度試驗含量測定結(jié)果的相對標準偏差小于2.0%。3.8 穩(wěn)定性試驗針對試品溶液自身穩(wěn)定性是否存在干擾，應進行多組試品溶液的分格放置，以2h、4.5h、7h、12h與24h作為參評標準，而后逐個進行分析并通過相色譜儀進行含量的測定記載，具數(shù)據(jù)表明試品溶液穩(wěn)定性較好，滿足實驗基本需求。3.9 樣品的含量驗證取三個批次麝香腦脈康膠囊樣品測定含量，結(jié)果表明：三批樣品的含量檢測每粒含人參皂苷Rg1（G42H72O14）、人參皂苷Rb1（C54H92O23）和三七皂苷R1（C47H80O18）三者的總量均不少于4.0mg。4 結(jié)束語根據(jù)以上檢測結(jié)果可以得知高效液相法測定方法可以有效的測定麝香腦脈康膠囊三種皂苷的含量，同時麝香腦脈康膠囊內(nèi)的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1滿足當前藥品的含量使用要求，為藥品后續(xù)在未來的發(fā)展時，提供相對穩(wěn)定的環(huán)境與市場需求埋下發(fā)展基礎前提。參考文獻[1]中華人民共和國藥典；2015年.一部/國家藥典委員會編-北京；中國醫(yī)藥科技出版社，2015.6[2]殷玥.HPLC-ELSD法同時測定消栓通膠囊中三七皂苷R_1、人參皂苷Rg_1的含量研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2016，12（2）：23-26.[3]顧崇梅.高效液相色譜法同時測定傷科膠囊中3種皂苷的含量[J].西部中醫(yī)藥，2016，29（11）：27-29.[4]張凱，尹子郡，張躍進，等.HPLC法測定復方烏骨藤膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的含量[J].西北林學院學報，2016，31（1）：250-253.