血清MCP-1和CRP水平與老年冠心病的相關性研究

劉 丹，徐 敏，李 杰，顏 彥

(貴州省遵義市第一人民醫院心血管內科 563000)

冠心病(coronary heart disease，CHD)是最常見的心臟病之一，患病率為0.15%，易感人群為45歲以上的男性和55歲以上或者絕經期的婦女，近年來，中老年人罹患CHD的概率越來越高[1-2]。CHD是由外界環境和炎癥因子等遺傳因素相互作用而引起的慢性炎癥疾病[3]。各種炎癥反應在多種急慢性炎癥疾病的發生發展中起著重要作用，單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)和C反應蛋白(CRP)是非常關鍵的兩個炎癥因子，MCP-1促進慢性炎癥反應，CRP促進急性炎癥反應，在CHD的發生發展過程中至關重要[4-7]。MCP-1是一種單核細胞趨化蛋白，屬于β亞家族趨化因子，在內皮細胞、平滑肌細胞和心肌細胞上高表達，在急性炎癥條件下能夠促使血液中的單核-巨噬細胞聚集到損傷的內皮下間隙并活化成巨噬細胞，刺激巨噬細胞不斷吞噬類脂質并分化為形成富含膽固醇酯的泡沫細胞，MCP-1可促進多種炎癥因子的產生并形成級聯炎癥反應，使內皮從抗凝-抗黏附狀態轉化為促凝-易黏附狀態，促進動脈粥樣硬化的發生發展，使CHD惡化[5]；CRP是一種由肝臟合成的非特異性急性期炎癥反應標志物，可激活經典的補體途徑，增強白細胞的吞噬作用，調節淋巴細胞或單核-巨噬系統功能，促進巨噬細胞組織因子的生成[8]。目前，血清MCP-1和CRP濃度與CHD臨床癥狀的相關性還有待進一步研究,本研究的目的在于探討血清MCP-1和CRP于CHD臨床癥狀的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年1月至2016年1月，收集本院共200例老年CHD患者作為觀察組，其中，男120例，女80例，平均(65.10±8.75)歲；納入標準：年齡大于60歲；有典型的心絞痛癥狀且經冠狀動脈造影確診為CHD；既往無經皮冠狀動脈介入治療(PCI)和冠狀動脈搭橋手術史；心功能為KILLIP分級1～2級；愿意參加本研究，簽署知情同意書。排除標準：合并其他心臟病患者，如先天性心臟病、嚴重瓣膜病、擴張型心肌病、肥厚性心臟病、風濕性心臟病等； 合并嚴重的器官衰竭性疾病，比如腎衰竭(血肌酐大于或等于25 mg/L)、嚴重心功能不全(左心室射血分數小于30%)、器官功能下降性疾病、嚴重鈣化疾病等；合并腦血管疾病或其他神經系統疾病者； 合并甲狀腺功能亢進及嚴重結締組織病者； 合并感染、腫瘤、血液系統或免疫系統疾病者； 存在影響hs-CRP水平的其他疾病或因素的患者；近期手術、創傷者。對照組為200例冠狀動脈造影正常的健康老人，男110例，女90例，平均(66.52±7.55)歲。觀察組和對照組老人的基本臨床特征比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究通過本院倫理委員會審批，所有患者或其家屬均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1采集血清樣本 冠狀動脈造影術后，空腹時，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集所有老年CHD患者和健康老人的肘靜脈血，共收集8 mL，4 ℃保存待測。

1.2.2血清MCP-1和CRP水平的測定 取已收集的4 mL外周血，2 000 r/min離心20 min分離血清，-80 ℃冰箱保存待測。采用MCP-1雙抗體夾心法ELISA試劑盒(美國R&D公司)檢測，采用CRP雙抗體夾心法ELISA試劑盒(美國R&D公司)檢測，操作方法嚴格按照試劑盒說明書進行，光密度值由DG5033A酶聯免疫檢測儀測定，根據標準曲線計算血清中MCP-1和CRP的水平。

1.2.3分離外周血單核細胞 取4 mL外周血，密度梯度離心分離單核細胞，細胞計數統計細胞數量。

1.2.4RT-PCR檢測 以人MCP-1、CRP序列為模板，使用Primer Premier 5.0設計引物，并由上海生物工程技術服務有限公司合成。使用Trizol提取單核細胞總RNA，RT-PCR檢測MCP-1和CRP的mRNA表達濃度。MCP上下游引物序列如下，PF:CCT TCT GTG CCT GCT GCT CA,PR:TCT TCG GAG TTT GGG TTT GC；CRP上下游引物序列如下，PF：ATT ACG CTA TCT AGC ATC TA，PR：CAT GAT GCA TGA CTA CTA CA。

2 結 果

2.1兩組對象CHD危險因素比較 對照組和觀察組年齡、性別和舒張壓(DBP)比較差異無統計學意義(P>0.05)；但是兩組在體質量指數(BMI)、收縮壓(SBP)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、血漿纖維蛋白原(FBG)和吸煙史上差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2兩組對象血清MCP-1、CRP檢測結果比較 觀察組患者血清MCP-1和CRP的水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3兩組對象外周血單核細胞中MCP-1和CRP mRNA水平比較 觀察組患者單核細胞內MCP-1和CRP mRNA水平高于對照組，差異有統計學差異意義(P<0.05)，見表3。

表1 兩組對象CHD危險因素比較

2.4CHD患者單核細胞內MCP-1和CRP mRNA 與血清MCP-1和CRP水平的相關性 CHD患者單核細胞內MCP-1 mRNA水平與血清中MCP-1水平呈正相關(r=0.810,P<0.05)?；颊邌魏思毎麅菴RP mRNA水平與血清中CRP水平呈正相關(r=0.791,P<0.05)。

表2 兩組對象血清MCP-1、CRP水平比較

表3 兩組對象單核細胞內MCP-1和CRP mRNA水平比較

2.5CHD危險因素與血清MCP-1和CRP水平的相關性分析 CHD患者的TG(r=0.760,P<0.05)和TC(r=0.793,P<0.05)與血清中MCP-1水平呈正相關。CHD患者的TG(r=0.781,P<0.05)和TC(r=0.839,P<0.05)與血清中CRP水平呈正相關。

3 討 論

CHD是冠狀動脈血管發生動脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導致的心臟病，致死率很高且大多數是40歲以上的中老年人，已引起全世界的關注[8-9]。動脈粥樣硬化是CHD最主要致病因素，“內皮損傷反應學說”是公認的CHD發病機制。由于機體脂質(TG和TC等)代謝異常，血液中的脂質黏附在動脈內膜上，形成動脈粥樣硬化斑塊，隨著炎癥反應加劇，這些斑塊逐漸增多，動脈管腔越來越狹窄，血流受阻，導致心臟缺血，從而產生CHD[10-11]。目前認為，動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，由于炎癥反應伴隨動脈粥樣硬化乃至CHD的整個發生發展過程，炎癥等級越高，動脈粥樣硬化程度越重，心血管病病死率越高，因此，血液中炎癥因子的濃度是診斷CHD及預測預后的臨床分子標志物。

MCP-1和CRP是體內重要的促炎因子，研究顯示，MCP-1和CRP等炎癥因子的增加，以及持續的炎癥反應可誘發動脈粥樣硬化、血管狹窄和血流減少，這些癥狀會進一步加重炎癥反應，從而形成惡性循環，最終導致CHD[12]。本研究結果顯示，老年CHD患者血清MCP-1和CRP的水平均明顯高于對照組，表明促炎癥因子MCP-1和CRP水平與CHD的發生發展密切相關。單核細胞是血清MCP-1和CRP的主要來源之一，進一步分析也顯示，CHD患者單核細胞內MCP-1和CRP mRNA水平均明顯高于對照組，而且，CHD患者單核細胞內MCP-1 mRNA水平與血清中MCP-1水平呈正相關，而且單核細胞內CRP mRNA水平與血清中CRP水平呈正相關，也證實了這一點。

進一步，本研究分析了CHD的危險因素。相關性分析結果顯示CHD患者的TG和TC均與血清中MCP-1和CRP水平均呈正相關。既往研究顯示，MCP-1通過與CCR2(MCP-1受體)/PKC信號通路，一方面促進內皮細胞增殖并修復損傷的血管內膜[13]，另一方面，過度的增殖引起動脈硬化和血管重塑，同時不斷攝取脂質形成脂質池，促進脂質代謝異常，加重動脈粥樣硬化和纖維化。另外，MCP-1還可刺激單核巨噬細胞合成IL-6和基質金屬蛋白酶等細胞因子，使斑塊不穩定甚至破裂[14]。而CRP可促進巨噬細胞攝取低密度脂蛋白并轉化為泡沫細胞，從而形成動脈粥樣硬化斑塊，在斑塊中也可檢測到CRP[15]。本研究和既往研究結果說明炎癥反應能夠促進脂質代謝異常，而脂質代謝異常又可進一步加重炎癥反應，二者間相互作用，相互調節共同促進進而促進動脈粥樣硬化的發生發展。

綜上所述，血清MCP-1和CRP與老年CHD緊密相關，這兩種炎癥因子引起的炎癥反應是觸發動脈粥樣硬化的根本原因，可以作為檢測CHD心肌缺血損傷程度的炎癥標志物。

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