識別早期肺癌進展的驅動基因

蘇曉玉

（山東中醫藥大學中醫學院 山東 濟南 250013）

肺癌的癌前病變非典型腺瘤樣增生（AAH）組織具有以下發展規律，由非侵潤性原位腺癌（AIS）到微浸潤性腺癌（MIA）進而成為廣泛侵潤性癌。

Noguchi分型有A-F六種不同肺腺癌病理類型。其中A和B型均為細支氣管肺泡癌并包含AAH和AIS兩種非侵潤型組織，為早期肺癌組織。C型含活躍成纖維細胞增殖，包含AIS和MIA。而D-F型則為廣泛侵潤性肺腺癌組織[1]。由于C型中包含侵潤型和非侵潤型組織，因此本實驗提出早期肺癌惡性轉變的驅動基因存在于C型。

1.材料與方法

1.1 病理組織切片收集

本實驗從臨床中收集T1a期肺腺癌病理切片（未經治療）共246例，以Noguchi分型為標準進行A-F分類。

1.2 Noguchi C型子分類

本實驗對Noguchi C大量觀察與總結發現了其可能存在兩種不同病理細胞組織形態學差異。如圖1，其棕紅色區域可看作侵潤型區域而粉色覆蓋區域可看作非侵潤型區域。C1分類（圖1左）為不對稱性侵潤型組織增生，無原位非侵潤型半影增生且侵潤型區域核級較大。C2分類（圖1右）則呈現勻稱性侵潤型組織增生并伴有原位非侵潤型組織半影增生且兩區域核級大小均一致。

圖1 Noguchi C子分類模擬圖

1.3 基因測序

在下一代基因測序中，每個樣品采用Ionampliseq Library 96LV Kit2.0和結腸癌和肺癌研究 panelv2V2建立各自信息庫。92條擴增子覆蓋于此面板22個基因（表1）所含的504個突變熱點區域上。應用Ion Sphere QC試劑盒及添加引物和聚合酶對其DNA模板進行微乳液PCR擴增，并加載到測試芯片上最終使用生命技術人類基因組設備對樣本進行測序。

表1 測序基因

1.4 數據分析

采用Hg19人類參考基因組配比，應用離子記錄軟件分析測序數據。應用Excel軟件對整體實驗數據進行分析比較并制作圖表。

表2 下一代測序結果

2.結論

本實驗中共有25個樣本參與下一代基因測序，其中有22例為Noguchi C型其包含17例C1型與5例C2型，但C1型中有一案例未發現任何共同突變基因。如表2所示，綠色區域顯示了原位癌與侵潤型腫瘤區域存在共同的基因突變而紅色區域則表明基因突變僅存在于侵潤型腫瘤區域（單獨突變）。

C1樣本中有12例樣本出現單獨基因突變其突變位點共有27個，其中SMAD4、ERBB2、AKT、DDR2、PTEN、FGFR1基因只存在單獨突變且SMAD4、ERBB2突變率最高，各占總體25.9%。其次為TP53及AKT1基因。見表3。

C1病變最常見的共同突變基因為EGFR基因，它占總體突變頻次的36.3%。KRAS、TP53、BRAF基因也同樣顯示了較高的突變比率。通過對比C2下一代基因測序檢測結果，我們同樣也發現其KRAS及TP53基因突變頻率最高。從而通過整體分析我們可以推斷在整體C型病變中KRAS和TP53基因突變頻率最為顯著。見表4。

表3 C1樣本中僅在浸潤型腫瘤區域含有基因突變的頻次

表4 C1樣本中原位癌和侵潤性腫瘤區域共有突變基因的頻次

3.討論

通過實驗可發現C1型病變在早期肺腺癌侵潤型和非侵潤型病理組織區域存在基因突變的轉化而C2型病變則顯示出其基因突變的一致性，因此此結果印證了本實驗中對Noguchi C型病理組織的C1和C2病變分類且同樣證實了C1型病變中應該存在從肺原位腺癌到肺侵潤型腺癌轉變的驅動基因，其為ERBB2，SMAD4，AKT1和TP53基因。因此我們認為在肺腺癌C1型病變中若可以針對其不同的驅動基因提前檢測并應用靶向藥物或其他相應的輔助方法進行治療，從理論上可有效的緩解早期肺腺癌患者的肺腺癌病理組織惡性進展從而提高此類患者的生存率與治愈率。

ERBB2基因即Her-2基因，對于判斷乳腺癌預后具有重要意義。針對此靶點的曲妥珠單抗類藥物現如今已在乳腺癌早期及晚期臨床治療中被廣泛應用。隨著現今分子醫學學科的深入發展及應用，有關抗Her-2類的藥物如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗和拉帕替尼目前也被允許用于治療其他癌癥。因此我們認為若可以對早期肺腺癌患者在早期進行Her-2基因突變與否進行篩查，再針對此類患者及時應用現今已研究比較成熟的抗Her-2類相關藥物，將有益于提高患者的無進展生存率。

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