肺肉瘤樣癌高表達(dá)PD?L1、RAB1A及其臨床意義

張子涵 張中冕 李靜 胡超帆 陳天東

1鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科（河南 450014）；2鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科（河南 450014）

肺肉瘤樣癌（pulmonary sarcomatoid carcinoma，PSC）是一組分化極差，含有肉瘤或肉瘤樣分化的非小細(xì)胞肺癌（NSCLCs），占所有肺癌的0.1%～0.4%［1-2］。PD?L1和PD?1是一對(duì)免疫抑制性因子，PD1/PD?L1通路的激活可使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫監(jiān)視和殺傷，目前針對(duì)PD?1/PD?L1的免疫檢查點(diǎn)抑制劑在肺癌治療中顯示出了令人矚目的成就［3］。RAB1A屬于小分子三磷酸鳥苷（GTP）結(jié)合蛋白，研究發(fā)現(xiàn)RablA在舌癌、結(jié)直腸癌和肝癌組織中呈高表達(dá)，且能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為［4?6］，然而目前有關(guān)RablA 與肺癌的關(guān)系少見(jiàn)報(bào)道。由于肺肉瘤樣癌較罕見(jiàn)，國(guó)內(nèi)外研究尚不充分［7］，對(duì)放化療不敏感，預(yù)后差，故肺肉瘤樣癌的治療已成為亟待解決的問(wèn)題，結(jié)合目前以PD?1抑制劑為主［2］的免疫治療彰顯巨大的療效，欲通過(guò)免疫組化檢測(cè)PD?L1對(duì)比普通肺癌，探討肺肉瘤樣癌是否可采取免疫治療受益，同時(shí)對(duì)新興指標(biāo)RAB1A做進(jìn)一步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2012年1月1日至2016年9月1日手術(shù)切除或穿刺活檢的蠟塊標(biāo)本，經(jīng)3名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師確診。肺肉瘤樣癌40例，肺鱗癌18例，肺腺癌23例，以肺鱗癌和腺癌為對(duì)照組。所有標(biāo)本病理確診前均未接受抗腫瘤治療，且有完整的病例資料。

1.2 檢測(cè)試劑及方法鼠抗人PD?L1單克隆抗體（17A10101）購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，兔抗人RAB1A單克隆抗體（11671?1?AP）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，SP免疫組化試劑盒（鼠/兔GK500511A）購(gòu)自基因科技上海股份有限公司。實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。PD?L1的判定標(biāo)準(zhǔn)為陽(yáng)性細(xì)胞占比≥10%為陽(yáng)性，＜10%為陰性。參照文獻(xiàn)［8］根據(jù)染色強(qiáng)度評(píng)分判定RAB1A為高表達(dá)和低表達(dá)，以陽(yáng)性細(xì)胞百分比（1～100）乘以染色強(qiáng)度評(píng)分（0～3）得到最終分?jǐn)?shù)（0～300分），以170作為截點(diǎn)判定RAB1A高表達(dá)和低表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法先行不同類型患者的PD?L1、RAB1A表達(dá)情況差異性比較分析，然后對(duì)肺肉瘤樣癌的患者進(jìn)行隨訪，分析患者的預(yù)后情況及影響因素。采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用表示，計(jì)量資料采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)或率的形式表示，比較采用Pearson卡方檢驗(yàn)。患者預(yù)后影響因素分析采用Cox回歸進(jìn)行單因素和多因素分析，采用Kaplan?Meier法繪制生存曲線。顯著性水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同類型組織中PD?L1、RAB1A表達(dá)情況肺肉瘤樣癌組織和肺鱗癌、腺癌組織中的PD?L1陽(yáng)性表達(dá)均定位于胞膜（圖1），RAB1A高表達(dá)定位于胞質(zhì)（圖2）；肺肉瘤樣癌、疾病對(duì)照兩組之間PD?L1陽(yáng)性率、RAB1A高表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 肺肉瘤樣癌患者中不同臨床特征對(duì)PD?L1、RAB1A表達(dá)影響比較不同PD?L1、RAB1A表達(dá)情況的年齡和Ki?67情況及不同性別、吸煙史、腫塊部位、分期的PD?L1、RAB1A表達(dá)情況，結(jié)果顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

圖1 PD?L1陽(yáng)性表達(dá)在肺肉瘤樣癌組織及疾病對(duì)照組Fig.1 Positive expression of PD?L1 in PSC and disease control group

圖2 RAB1A高表達(dá)在肺肉瘤樣癌組織及疾病對(duì)照組Fig.2 High expression of RAB1A in PSC and disease control group

表1 不同類型組織中PD?L1、RAB1A表達(dá)情況比較Tab.1 The expression of PD?L1 and RAB1A in different types of tissues 例（%）

表2 不同臨床特征對(duì)PD?L1、RAB1A表達(dá)影響Tab.2 Effect of different clinical features on PD?L1 and RAB1A expression例（%）

2.3 肺肉瘤樣癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析不同臨床特征和PD?L1、RAB1A表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響分析如表3所示，分析結(jié)果顯示，對(duì)于預(yù)后PFS，年齡、分期、RAB1A（P＜ 0.05）為影響預(yù)后PFS的影響因素。對(duì)于預(yù)后OS，分析結(jié)果顯示年齡、分期、PD?L1和RAB1A（P＜ 0.05）為預(yù)后OS的影響因素，見(jiàn)表3。

2.4 肺肉瘤樣癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析根據(jù)單因素分析結(jié)果，將有意義的因素進(jìn)一步多因素Cox回歸，分析結(jié)果顯示，對(duì)于預(yù)后PFS，年齡、RAB1A（P＜0.05）為肺肉瘤樣癌患者預(yù)后PFS的獨(dú)立影響因素，不同RAB1A表達(dá)情況的預(yù)后PFS生存曲線如圖3所示；對(duì)于預(yù)后OS，年齡和PD?L1（P＜0.05）為肺肉瘤樣癌患者OS的獨(dú)立影響因素，不同PD?L1表達(dá)情況的預(yù)后OS生存曲線如圖4所示。

表3 肺肉瘤樣癌患者預(yù)后影響因素的單因素分析Tab.3 Univariate analysis of prognostic factors in patients with pulmonary sarcomatoid carcinoma

表4 肺肉瘤樣癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析Tab.4 Multivariate analysis of prognostic factors in patients with lung sarcomatoid carcinoma

3 討論

最近研究［11-12］表明PD?1抑制劑無(wú)論在一線、二線及以后的NSCLC治療中均顯示出了超過(guò)化療的療效。用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)［3］高表達(dá)PD?L1的NSCLC患者，PD?1/PD?L1定向治療有較好的應(yīng)答效應(yīng)［9］。本研究顯示，肺肉瘤樣癌組織中PD?L1的陽(yáng)性表達(dá)率（67.50%）顯著高于疾病對(duì)照（肺鱗癌、腺癌）組織（P＜0.05），這與之前法國(guó)的一項(xiàng)研究相符［10］。進(jìn)一步多因素分析結(jié)果示，PD?L1（P=0.006）為肺肉瘤樣癌患者OS的獨(dú)立影響因素，這表明PD?L1的表達(dá)是肺肉瘤樣癌預(yù)后不良的預(yù)測(cè)指標(biāo)。Poplar研究提示在晚期NSCLC患者中，隨著PD?L1表達(dá)水平的升高，使用Nivolumab治療的客觀緩解率、無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期也顯著提高［13］；目前關(guān)于肺肉瘤樣癌患者使用PD?1抑制劑療效的研究較少，本研究對(duì)比肺鱗癌、腺癌，提示肺肉瘤樣癌中高表達(dá)PD?L1，結(jié)合Poplar研究，提示或許肺肉瘤樣癌使用PD?1抑制劑獲益更大，這為肺肉瘤樣癌［4］的治療提供了新的思路，但缺乏具體直接實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，仍需大樣本前瞻性研究進(jìn)一步證實(shí)。

圖3 不同RAB1A表達(dá)情況的無(wú)進(jìn)展生存曲線Fig.3 Progression?free survival curves for different RAB1A expression

圖4 不同PD?L1表達(dá)情況的總生存曲線Fig.4 Overall survival curves for different PD?L1 expression

RAB1A是GTPases的Ras超家族成員之一，能調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為［4］。本研究顯示，RAB1A在肺肉瘤樣癌的高表達(dá)（70.00%）高于疾病對(duì)照組（P＜0.05）。而WANG等［8］的一項(xiàng)研究提示RAB1A的表達(dá)與肺癌組織學(xué)類型無(wú)關(guān)，與本研究結(jié)果不同，考慮WANG等的研究未納入肺肉瘤樣癌做對(duì)比，也可能受腫瘤異質(zhì)性、樣本量差異等因素影響。本研究首次在肺肉瘤樣癌中研究RAB1A的表達(dá)，進(jìn)一步多因素分析結(jié)果示，RAB1A（P=0.016）為肺肉瘤樣癌患者預(yù)后PFS的獨(dú)立影響因素，這表明RAB1A的高表達(dá)是肺肉瘤樣癌預(yù)后不良的預(yù)測(cè)指標(biāo)。既往研究提示在結(jié)腸癌［5］、肝癌、三陰性乳腺癌中高表達(dá)的RAB1A可特異性地激活mTORC1，通過(guò)活化mTOR通路促進(jìn)腫瘤的增殖、侵襲和進(jìn)展，表明Rab1A可能是個(gè)性化治療的一個(gè)有價(jià)值的治療目標(biāo)［14-15］。但RAB1A作用于肺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制目前仍不明確，仍需要更進(jìn)一步的深入研究。

綜上所述，肺肉瘤樣癌中高表達(dá)PD?L1、RAB1A作為影響肺肉瘤樣癌患者生存的獨(dú)立影響因素，均可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，二者的表達(dá)在肺肉瘤樣癌的預(yù)后預(yù)測(cè)方面具有重要意義，或許提示肺肉瘤樣癌患者是免疫治療的潛在受益人群。

［1］UNG M，ROUQUETTE I，F(xiàn)ILLERON T，et al.Characteristics and clinical outcomes of sarcomatoid carcinoma of the lung［J］.Clin Lung Cancer，2016，17（5）：391?397.

［2］ROESEL C，TERJUNG S，WEINREICH G，et al.Sarcomatoid carcinoma of the lung：a rare histological subtype of non?small cell lung cancer with a poor prognosis even at earlier tumour stages［J］.Interact Cardiovasc Thorac Surg，2017，24（3）：407?413.

［3］姜戰(zhàn)勝，潘戰(zhàn)宇，任秀寶.PD?1/PD?L1抑制劑在晚期非小細(xì)胞肺癌中的治療進(jìn)展［J］.中國(guó)肺癌雜志，2017，20（2）：138?142.

［4］XU B H，LI X X，YANG Y，et al.Aberrant amino acid signal?ing promotes growth and metastasis of hepatocellular carcinomas through Rab1A?dependent activation of mTORC1 by Rab1A［J］.Oncotarget，2015，6（25）：20813?20828.

［5］THOMAS J D，ZHANG Y J，WEI Y H，et al.Rab1A is an mTORC1 activator and a colorectal oncogene［J］.Cancer Cell，2016，30（1）：181?182.

［6］SHIMADA K，UZAWA K，KATO M，et al.，Aberrant expres?sion of RAB1A in human tongue cancer［J］.Br J Cancer，2005，92（10）：1915?1921.

［7］黎君翔，王振平，陳集敏，等.原發(fā)性肺肉瘤樣癌的CT表現(xiàn)與病理對(duì)照分析［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（19）：p3199?3200.

［8］WANG X，LIU F，QIN X，et al.Expression of Rab1A is upregu?lated in human lung cancer and associated with tumor size and T stage［J］.Aging（Albany NY），2016，8（11）：2790?2798.

［9］方捷迪，周琴，王曉星，等.免疫檢驗(yàn)點(diǎn)：腫瘤免疫治療的新視點(diǎn)［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2017，33（14）：p2401?2403.

［10］VIEIRA T，ANTOINE M，HAMARD C，et al.Sarcomatoid lung carcinomas show high levels of programmed death ligand?1（PD?L1）and strong immune?cell infiltration by TCD3 cells and macrophages［J］.Lung Cancer，2016，98：51?58.

［11］RECK，M，RODRIGUEZ?ABREU D，ROBINSON A G，et al.Pembrolizumab versus chemotherapy for PD?L1?positive non?small?cell lung cancer［J］.N Engl J Med，2016，375（19）：1823?1833.

［12］HERBST R S，BAAS P，KIM D W，et al.Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated，PD?L1?positive，advanced non?small?cell lung cancer（KEYNOTE?010）：a randomised con?trolled trial［J］.Lancet，2016，387（10027）：1540?1550.

［13］SACHER A G，GANDHI L.Biomarkers for the clinical use of PD?1/PD?L1 inhibitors in non?small?cell lung cancer：A review［J］.JAMA Oncol，2016，2（9）：1217?1222.

［14］YANG，Y，HOU N，WANG X，et al.miR?15b?5p induces en?doplasmic reticulum stress and apoptosis in human hepatocellu?lar carcinoma，both in vitro and in vivo，by suppressing Rab1A［J］.Oncotarget，2015，6（18）：16227?16238

［15］XU H，QIAN M，ZHAO B，et al.Inhibition of RAB1A sup?presses epithelial?mesenchymal transition and proliferation of triple?negative breast cancer cells［J］.Oncol Rep，2017，37（3）：1619?1626.