霉菌毒素分析的重要性

唐彩琰

由于飼用作物或飼料原料會受氣候、農業生產方法和當地政府對霉菌毒素立法的影響，因此對即將收割的飼用作物進行霉菌毒素污染水平的分析至關重要。在一份關于塞爾維亞（Serbia）、波斯尼亞（Bosnia）和黑塞哥維那（Herzegovina）的2017年度玉米收割情況的調查中，黃曲霉毒素B1、伏馬菌素B1和伏馬菌素B2的含量都很高。

中圖分類號：S852.4+4 文獻標志碼：C 文章編號：1001-0769（2018）05-0004-03

飼用作物或飼料原料在全球動物飼料生產中的使用正在提高食品生產用動物的化學污染和微生物污染的風險。飼料會受到微生物、霉菌毒素、動物副產品、有機污染物和有毒金屬的污染。動物飼料一旦被污染，就會給人類和動物的健康都帶來不利的影響。在這些污染因素中，霉菌毒素正在成為飼料和食品的主要污染物。

霉菌毒素是由多種真菌產生的次生代謝物。能產生霉菌毒素的真菌主要來自曲霉屬、鐮刀菌屬和青霉屬的真菌。黃曲霉毒素（Aflatoxin，AF）、赫曲霉毒素A（Ochratoxin，Ochra A）、伏馬菌素（Fumonisin，FB）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）、T-2毒素和玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA）是食品和飼料樣本中最常見的霉菌毒素。許多食物和飼用作物樣本在收割前、運輸中和儲存期間可能已被霉菌毒素污染。用于動物飼料的商品和產品包括玉米、小麥、大麥、大米、燕麥、堅果、牛奶、奶酪、豌豆和棉籽等，它們經常被霉菌毒素污染。霉菌毒素會在動物體內產生多種多樣的副作用和毒性反應，影響它們的整體健康和生產力。霉菌毒素可導致動物發生霉菌毒素中毒癥，由于該病能降低動物的生產力，提高它們的發病率，進而降低它們的生產性能，從而會給畜牧生產帶來嚴重的經濟損失。根據各種霉菌毒素的毒性強度和中毒癥發生率，目前最受關注的霉菌毒素是黃曲霉毒素1（AFB1）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、赫曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏馬菌素1（FB1）和伏馬菌素（FB2）以及T-2毒素。目前至少有100個國家對食物和飼料商品中的主要霉菌毒素實行管控。這些管控措施大部分與黃曲霉毒素相關，而且不同國家對霉菌毒素的接受水平差異很大。霉菌毒素最大可接受水平上的差異以及其他國家對其余霉菌毒素不進行管控給動物飼料行業提出了巨大的挑戰，這些差異正在提高在動物飼料進入食品/飼料鏈之前對霉菌毒素污染水平進行分析的重要性。

1 霉菌毒素污染水平分析

為了確定飼料原料和其他商品是否受到霉菌毒素的污染，我們必須對這些物質中的霉菌毒素污染狀況進行檢測。由于霉菌毒素在谷物和其他商品中的分布并不均勻，因此正確的采樣方法是獲得可靠分析結果的首要條件。目前霉菌毒素的檢測方法有很多種，常用的檢測方法包括酶聯免疫吸附測定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）法、薄層色譜（Thin-layer Chromatography，TLC）法、高效液相色譜（High-performance Liquid Chromatography，HPLC）法和氣相色譜（Gas Chromatography，GC）法。這些方法大多采用固相柱凈化提取物，并用免疫親和技術去除雜質，以提高霉菌毒素的測定能力。ELISA法是一種在需要進行快速分析時可選擇的方法，但需要用液相色譜-質譜串聯（LC-MS/MS）法進行確證分析。LC-MS/MS法的檢測靈敏性最高，也是分析食品和飼料樣本霉菌毒素污染情況的首選方法。

2 多重霉菌毒素檢測法

由于有必要對動物飼料的霉菌毒素污染情況進行檢測，Patent Co公司正在采用一種基于超高液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）法的快速簡便的多重霉菌毒素檢測方法，通過將液相色譜分析技術與串聯質譜分析技術結合起來，對飼料中受控的所有霉菌毒素（黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1、伏馬菌素B2、T-2毒素、HT-2毒素、赫曲霉毒素A）進行測定和準確定量。

該方法采用“稀釋和注射（dilute and shoot）”原理，包括提取物的提取和離心沉淀兩個步驟。為了抵消電噴霧電離中的基質效應，提取物在注射到LC-MS/MS前首先與每一類霉菌毒素的[13C]標記內標物混合（13C AB1、13C DON、13C ZON、13C OTA、13C FB1和13C T-2）。該方法已經在玉米、配合飼料、小麥、大麥、大豆粉、麥麩、葵子餅粉和全價混合日糧中得到驗證。該方法的性能參數通過內部驗證獲得。在空白樣本的12個重復中，以2種水平（log和10×log）將11種霉菌毒素標準品混合物添加到其中。該方法的實驗室內相對標準偏差（RSDr）為2.5%～13.4%，所有分析物的表觀回收率為62%～115%。因此，我們可以認為“稀釋和注射”法結合[13C]標記內標物可以確定動物飼料和配合飼料中所有歐盟管控的霉菌毒素。