金昌市金川區(qū)2016年－2017年雞新城疫的檢測與分析

張登基 李曉霞 賈寧

摘? 要：為掌握金川區(qū)新城疫（Newcastle Disease，ND）的流行情況、實(shí)際的免疫效果以及帶毒情況，2016年-2017年筆者分4次在金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)雞場、散養(yǎng)戶雞和農(nóng)貿(mào)市場中隨機(jī)采集雞血清648份、雞棉拭子樣品379份。應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)測定雞ND免疫抗體，同時采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）方法測定雞ND病原。結(jié)果顯示，ND免疫抗體平均合格率為97.07%，其中2016年春季抗體檢測合格率為96.82%，2017年抗體檢測合格率為97.30%;ND病原學(xué)陽性率為1.85%，表明金川區(qū)ND免疫效果良好，但有雞零星帶毒的情況，應(yīng)繼續(xù)做好雞ND的免疫防控。

關(guān)鍵詞：新城疫;血凝抑制試驗(yàn);逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);抗體檢測

中圖分類號：S855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2018）12-0053-03

新城疫（Newcastle Disease，ND）又叫亞洲雞瘟，是一種熱性、急性、敗血性、高度接觸性禽類傳染病，主要由ND病毒引起，是目前家禽的主要傳染病之一[1-2]。ND具有呼吸困難、神經(jīng)紊亂、高熱、漿膜出血、下痢等特征，病死率高。世界動物衛(wèi)生組織將ND列為法定報(bào)告的動物疫病，我國農(nóng)業(yè)部將其列為一類動物疫病，并對其進(jìn)行重點(diǎn)防范[3-4]。

通過對ND抗體檢測和病原檢測，可以了解雞群的免疫狀況、驗(yàn)證現(xiàn)行的免疫程序、檢驗(yàn)疫苗的免疫效果、了解疫病的流行和發(fā)展情況。為進(jìn)一步全面掌握金川區(qū)ND免疫效果和雞帶毒情況，筆者分別于2016年和2017年春秋季，在金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)隨機(jī)采集樣品進(jìn)行了ND免疫抗體及病原學(xué)的測定，以科學(xué)研判金昌市金川區(qū)ND防控形勢，為防控決策提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1 試驗(yàn)器材

試驗(yàn)所用器材包括96孔V型血凝反應(yīng)板（100 μL，上海鼎杰生物科技有限公司）、離心機(jī)（H1650-W，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開發(fā)有限公司）、單道移液器（0.5 μL～10 μL，德國艾本德股份公司）、多道移液器（15 μL～300 μL，德國艾本德股份公司）、微量振蕩器（ZW-A，蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）儀（T960型，杭州晶格科學(xué)儀器有限公司）、水浴鍋（DK-S26，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器公司）、電泳儀（JY600，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）、凝膠成像儀（JY04S-3C，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）等。

1.2 試驗(yàn)試劑

ND陽性血清和血凝抑制抗原由中國哈爾濱動物生物制品國家工程研究中心有限公司提供;RNA提取試劑盒、一步法反轉(zhuǎn)錄試劑盒和DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)由TaKaRa公司提供;無水乙醇、三氯甲烷和異丙醇為國產(chǎn)分析純。

1.3 被檢樣品

在2016年4月和10月以及2017年4月和10月，筆者分別在金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)的3個規(guī)模養(yǎng)雞場、220個散養(yǎng)戶雞群和3個活禽交易市場進(jìn)行樣品采集。樣品包括泄殖腔和咽喉雙份棉拭子379份以及血清樣本648份。樣品采集方法如下：雞翅靜脈采血2 mL，凝固析出血清，離心分離，備用;泄殖腔和咽喉雙份棉拭子樣品保存于磷酸鹽緩沖溶液中。

1.4 檢測方法

1.4.1 抗體檢測

依據(jù)GB/T16550-2008 ND診斷技術(shù)中血凝試驗(yàn)操作程序[5]，制備1%的雞紅細(xì)胞懸液，對標(biāo)準(zhǔn)抗原進(jìn)行血凝效價(jià)測定，制備4 IU抗原，按照血凝抑制試驗(yàn)程序進(jìn)行血清抗體效價(jià)的測定。

1.4.2 病原學(xué)檢測

依據(jù)GB/T16550-2008診斷技術(shù)中逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）操作程序，設(shè)計(jì)一對引物P1和P2，按照RNA提取試劑盒方法，提取采集樣品棉拭子中的RNA，以提取的RNA為模板，以設(shè)計(jì)的引物P1和P2為模板，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒的方法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。

P1：ATGGGCACCAGATCTTCTAC

P2：CTGCCACTGCTAGTTGTGATAATCC

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

抗體檢測：存欄禽群免疫抗體合格率≥70%判定為合格，抗體效價(jià)≥5 log2判定為合格。

RT-PCR：結(jié)果為陽性，則判定為雞ND病原學(xué)陽性。

2? 結(jié)果與分析

2016年和2017年，筆者在金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)分4次共采集血液樣本648份、咽喉和泄殖腔雙份棉拭子379份。對血液樣品分離血清，進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，檢測ND抗體水平;將咽喉和泄殖腔棉拭子樣本混合后，提取RNA，進(jìn)行病原學(xué)檢測。檢測結(jié)果見表1和表2。

由表1和表2可以看出，2016年金川區(qū)兩個鎮(zhèn)共檢測血清315份，合格305份，合格率為96.82%;2017年共檢測血清333份，合格324份，合格率為97.30%。金川區(qū)ND抗體合格率普遍較高，連續(xù)兩年雞ND抗體合格率均達(dá)97%以上，高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%合格標(biāo)準(zhǔn)。病原學(xué)檢測結(jié)果表明，2016年對184份樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測，在4份樣品中檢出ND病毒，陽性率為2.17%;2017年對195份樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測，在3份樣品中檢出ND病毒，陽性率為1.54%;ND病毒陽性檢出率呈下降趨勢。

由表3可知，金川區(qū)2016年和2017年在不同監(jiān)測點(diǎn)對ND免疫抗體水平和病原學(xué)進(jìn)行了檢測。養(yǎng)雞場的抗體合格率達(dá)98.96%，散養(yǎng)戶抗體合格率達(dá)97.29%，交易市場的抗體合格率為93.06%。養(yǎng)雞場沒有檢測出ND病毒;在185份散養(yǎng)戶樣品中檢出3份陽性病毒，陽性率為1.62%;在105份交易市場樣品中檢出4份陽性病毒，陽性率為3.81%。

3? 討論

近年來，金昌市金川區(qū)進(jìn)一步落實(shí)動物防疫責(zé)任制，建立了有力的組織保障體系，建立健全了法制保障、體制保障、科技保障、經(jīng)費(fèi)保障、體系保障等各項(xiàng)保障措施，各部門按職責(zé)分工，監(jiān)督實(shí)施免疫接種、檢驗(yàn)檢疫、疫病監(jiān)測，指導(dǎo)實(shí)施隔離、撲殺、消毒、封鎖、無害化處理等，加強(qiáng)冷鏈體系建設(shè)，嚴(yán)格落實(shí)免疫責(zé)任，進(jìn)一步提升了動物疫病強(qiáng)制免疫能力。金川區(qū)依托縣鄉(xiāng)兩級動物疫病預(yù)防部門和村級防疫員，強(qiáng)化疫苗物流冷鏈和使用管理，進(jìn)一步構(gòu)建和完善基層動物疫病強(qiáng)制免疫工作網(wǎng)絡(luò)，使得全區(qū)動物疫病的免疫和監(jiān)測工作取得了實(shí)效。

2016年和2017年全區(qū)ND抗體和病原學(xué)的檢測結(jié)果表明：全區(qū)ND免疫抗體平均合格率達(dá)到97.07%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過國家標(biāo)準(zhǔn);其中2016年春季抗體檢測合格率為96.82%，2017年抗體檢測合格率為97.30%，免疫抗體的合格率呈上升趨勢;養(yǎng)雞場和散養(yǎng)戶的合格率分別達(dá)到98.96%和97.29%;農(nóng)貿(mào)市場的ND抗體合格率稍低，主要原因是由于農(nóng)貿(mào)市場雞的來源復(fù)雜。這提示我們，以后需進(jìn)一步加強(qiáng)對雞流通市場的監(jiān)管，防止疫病擴(kuò)散。ND病原學(xué)的檢測結(jié)果表明：金川區(qū)農(nóng)戶散養(yǎng)雞和農(nóng)貿(mào)市場ND帶毒陽性率為1.85%，雖然沒有臨床表現(xiàn)，但隱性帶毒仍然存在ND感染風(fēng)險(xiǎn)。這提示我們，今后需進(jìn)一步做好免疫和免疫監(jiān)測工作，對檢出的ND陽性雞（帶ND病毒雞），要及時采取消毒、隔離甚至撲殺等綜合措施，并進(jìn)行緊急預(yù)防接種。對養(yǎng)雞場應(yīng)定期進(jìn)行免疫效果監(jiān)測和分析，根據(jù)抗體的均勻度以及平均滴度確定是否需要強(qiáng)化免疫，為ND的防控提供科學(xué)依據(jù)[6-7]。

此外，從檢測結(jié)果可以看出，抗體免疫水平與養(yǎng)殖規(guī)模成正比，規(guī)模養(yǎng)殖場免疫效果普遍好于散養(yǎng)戶。這主要是因?yàn)橐?guī)模養(yǎng)殖場防疫意識更強(qiáng)，思想上更積極主動，且能夠嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序。農(nóng)村散養(yǎng)戶則對雞ND防疫意識比較淡薄，認(rèn)為養(yǎng)殖雞數(shù)量少，免疫無關(guān)緊要[8]。

總之，ND具有很高的發(fā)病率和死亡率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病，與高致病性禽流感并列為世界公認(rèn)的最重要的兩類禽類疫病。及時進(jìn)行免疫接種，并對ND進(jìn)行抗體檢測，評價(jià)其免疫水平和免疫效果，是預(yù)防ND的關(guān)鍵，也有利于指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，減少ND對養(yǎng)禽業(yè)造成的損失[9]。

參考文獻(xiàn)：

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