一種稻瘟病菌培養產孢培養基的配制與效比分析

吳斯駿 孫強 陳洪凡 楊增青 徐沛東 楊迎青 蘭波

摘要 [目的]篩選產孢效果好、成本低、操作簡便的培養基。[方法]采用稻秸浸出液與PDA培養基為主要成分配制6組不同培養基，比較其稻瘟病菌的培養產孢情況。[結果]配組稻秸浸出液 ∶PDA培養基=1 ∶1具有最快的培養速率和最大的產孢量，并且與燕麥片培養基和大麥粒培養基相比在產孢效率和經濟成本上也更具有優勢。[結論]該新型培養基在水稻稻瘟病菌致病性與水稻品種抗瘟性鑒定研究中具有較高的應用價值。

關鍵詞 稻瘟病菌；產孢；培養基；配制

中圖分類號 S435.111.4+1 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）18-0118-03

Preparation and Effect Ratio Analysis of a Medium for Pyricularia oryzae Culture and Sporulation

WU Sijun1， SUN Qiang2， CHEN Hongfan1 et al

（1. Plant Protection Research Institute， Jiangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanchang， Jiangxi 330200；2. Huangdao EntryExit Inspection and Quarantine Bureau， Qingdao， Shandong 266555）

Abstract [Objective] The aim was to screen out a medium with good spores effect， low cost and simple operation. [Method] The culture effect of Pyricularia oryzae sporulation of six groups of culture medium which used rice straw leaching liquid and PDA culture medium as main components was compared. [Result] The formula rice straw extract ∶PDA medium = 1 ∶1 had the fastest culture rate and the largest amount of sporulation. Compared with oatmeal culture medium and barley culture medium， the culture medium also had advantages in the efficiency and economic cost of sporulation. [Conclusion] The new culture medium has good application value in the identification of pathogenicity and blast resistance of rice varieties.

Key words Pyricularia oryzae；Sporulation；Culture medium；Preparation

稻瘟病是水稻的首要病害[1-2]。在稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）生理分化以及水稻種質資源的抗瘟性接種測定等研究中都需要人工培養菌株，以獲得大量分生孢子。國內外曾先后做過誘發稻瘟比較產孢方法及篩選適宜產孢培養基[3-5]，最常見的是采用高粱、稻節、大麥或小麥粒等組織培養基培養稻瘟病病菌分生孢子。但這些產孢方法操作過程繁瑣、培養時間長，產孢效果不甚理想，且在培養過程中容易受到雜菌污染[6]。關于常用的燕麥片培養基、米糠培養基、粗面粉培養基、玉米粉培養基和酵母淀粉培養基等的產孢試驗也有報道[6-9]，但有的產孢效果不理想，有的培養材料不易獲得。為獲得產孢效果好、成本低、操作簡便的培養基，筆者采用當地水稻副產物水稻秸稈為主要原料，通過不同配方的配組確定了一種新型的稻瘟病菌培養產孢培養基。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株。

1-10（ZB13），由江西省農業科學院有害生物控制重點實驗室保存。

1.1.2 供試培養基。

稻秸浸出液：30 g稻秸剪碎，用1 000 mL清水浸泡16～24 h；馬鈴薯浸出液：200 g馬鈴薯去皮，切碎，用1 000 mL清水浸泡2 h；

稻秸玉米粉培養基：稻秸30 g，玉米粉20 g，瓊脂18 g，清水1 000 mL；

PDA培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂18 g，清水1 000 mL；

燕麥片培養基：燕麥片50 g，蔗糖 20 g，瓊脂 16 g，水 1 000 mL；

配組①：稻秸浸出液+馬鈴薯浸出液（1 ∶1）；

配組②：稻秸浸出液+PDA培養基（1 ∶1）；配組③：稻秸培養基+馬鈴薯浸出液（1 ∶1）；

配組④：稻秸培養基+PDA培養基（1 ∶1）；

配組⑤：稻秸培養基；

配組⑥：PDA培養基。

1.2 方法

1.2.1 產孢方法。

從已純培養的供試菌株中挑取大小相同的菌塊接種到6種供試配方培養基的培養皿（9 cm）上，置于在28 ℃恒溫箱中培養。待平板上菌絲長滿后（約 7 d），置于室內組織培養架上黑光燈光照培養3 d，室溫25～28 ℃。待充分產孢后，每皿用15 mL 蒸餾水洗下孢子，100倍顯微鏡下計數孢子數量。

1.2.2 同一菌株在不同配方培養基上產孢量的比較。

供試菌株1-10在 PDA 培養基上活化后，用打孔器獲得直徑5 mm、成熟度一致的菌碟，接種于不同配方培養基中央，28 ℃培養 7 d，再置于黑光燈下照射3 d，用15 mL 滅菌水洗下表面菌絲，尼絨紗布過濾，即獲得稻瘟菌分生孢子懸浮液，用100倍顯微鏡觀察，計數一個視野下孢子的數量，重復 3 次，取平均值進行比較。

1.2.3 同一菌株在不同產孢培養基上生長速度的比較。

供試菌株 1-10 在不同配方培養基上28 ℃培養7 d 后，測量菌落直徑，計算稻瘟菌生長速度，重復 3 次，取平均值進行比較。

2 結果與分析

2.1 同一菌株在不同配方培養基上生長速率比較

由表1和圖1可知，6種不同配組的培養基對稻瘟病菌的培養速度有顯著差異。供試菌株1-10在培養基配組①、配組②、配組③、配組④、配組⑤、配組⑥上28 ℃培養 7 d的平均菌落直徑分別為7.66、7.62、7.38、7.51、6.45、7.39 cm，配組①、配組②與配組④菌株生長最好，三者之間無顯著差異，配組③與配組⑥培養菌株速度次之，配組⑤最差。

2.2 同一菌株在不同配方培養基上產孢量比較

由表2可知，供試菌株1-10在6種不同配組培養基上的產孢量相差較大，差異顯著。利用培養基配組①、配組②、配組③、配組④、配組⑤、配組⑥產孢在一個顯微視野下的平均孢子數分別為35.3、50.3、43.3、35.6、44.6、19.3個。配組②產孢最好，其次為配組③和配組⑤，再其次為配組①和配組④，配組⑥產孢最差。

2.3 配組②與燕麥片培養基、大麥粒培養基培養、產孢的優勢比較

利用配組②、燕麥片培養基、大麥粒培養基各培養供試菌株1-10并產孢，比較整個產孢周期長度、產孢量和經濟成本。其中，產孢量的比較利用燕麥片培養基各1 L制成50個培養平板培養稻瘟病菌并產孢，并用1 000 mL無菌水洗下所有平板上的菌絲、孢子，用雙層紗布過濾獲得孢子懸液，100倍顯微鏡下鏡檢孢子數，記錄一個視野下的孢子數量，3次重復，取平均值。用容器量取1 L大麥粒做成大麥粒培養基，接種供試稻瘟病菌產孢，產孢后用1 000 mL洗下大麥粒上的稻瘟病菌孢子，雙層紗布過濾，100倍顯微鏡下鏡檢孢子數，記錄一個視野下的孢子數量，3次重復，取平均值。

由表3可知，3種培養基配組②、燕麥片培養基、大麥粒培養基整個產孢周期所需要的天數分別為10、12、15 d，每個

顯微視野下平均產孢量分別為42、32、35個?？梢?，配組②在產孢量與產孢周期上均優于燕麥片培養基和大麥粒培養基，綜合培養基原料的經濟成本與獲得難易程度，認為配組②在稻瘟病菌培養產孢方面是一種非常理想的新型培養基組方，適宜廣泛推廣應用。

3 結論與討論

從總體趨勢看，該研究配制的6種稻瘟病菌產孢培養基菌株生長速率從快到慢依次為配組②、配組①、配組④、配組③、配組⑥、配組⑤；產孢量在6種不同配制培養基上從多到少依次為配組①、配組⑤、配組③、配組④、配組①、配組⑥。由此可見，配組②是最佳的稻瘟病菌培養、產孢培養基，其主要成分為1份稻秸浸出液與1份PDA培養基等比例混合而成。供試菌株在該培養基上生長最快，菌絲生長最旺，產孢量最多，并且菌絲生長狀態與產孢量之間呈正相關。

該研究配制的配組②培養基（稻秸浸出液 ∶PDA培養基=1 ∶1，V/V）接種稻瘟病菌生長速度最快，產孢量最多，這對于一般的稻瘟病菌生理小種鑒定、致病性分化研究和水稻品種抗性鑒定研究完全能夠達到要求。該研究進行了配組②、燕麥片培養基、大麥粒培養基稻瘟病菌產孢培養各項指標比較，發現供試菌株在配組②培養基上從接菌到產孢所需時間為10 d，燕麥片培養基為12 d，大麥粒培養基為15 d；產孢量從多到少分別是配組②（42個/顯微視野）、大麥粒培養基（35個/顯微視野）、燕麥片培養基（32個/顯微視野）。可見，配組②培養基在稻瘟病菌產孢等各項指標上不比燕麥片培養基和大麥粒培養基差，反而略有優勢，綜合考慮培養基原料的經濟成本及來源難易程度，認為在配組②是在稻瘟病菌培養、產孢研究中更具有優勢的培養基，至少是目前主要稻瘟病菌產孢培養基的有益補充，具有很高的應用價值。

參考文獻

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