夾竹桃配合馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺作用

張曉霞 楊紹斌 朱麗

摘要 [目的]篩選夾竹桃提取液配合馬勃粗提物毒殺菜青蟲的最適濃度。[方法]以2齡菜青蟲為供試蟲體，將夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物噴灑于盛放菜青蟲的培養皿中，測定不同時段菜青蟲的死亡率。[結果]馬勃粗提物配合夾竹桃提取液對2齡菜青蟲有一定的毒殺作用，并表現出明顯的劑量效應，當夾竹桃提取液濃度20 mg/mL、馬勃粗提物濃度25 mg/mL時，菜青蟲的校正致死率為83.33%，為最優濃度。[結論]與同類化學藥劑相比，夾竹桃配合馬勃粗提物具有良好的毒殺效果且對環境無污染。

關鍵詞 夾竹桃；馬勃粗提物；菜青蟲；毒殺作用

中圖分類號 S436.3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）23-0111-03

Abstract [Objective]To select the optimum concentration of toxicity and killing effect of Nerium indicum extract solution and Scleroderma flavidum on Pieris rapae. [Method]The Nerium indicum extracts were sprayed in a petri dish with different concentrations of Scleroderma flavidum， and the death rate of Pieris rapae was determined at different periods. [Result]Flavidum crude extract with Nerium indicum had certain poisoning effect on 2yearold Pieris rapae， and showed obvious dose effect， when Nerium indicum concentration was 20 mg/mL and Scleroderma flavidum coarse extract concentration was 25 mg/mL， the correction fatality rate of Pieris rapae was 83.33% with the optimal concentration. [Conclusion]Compared with similar chemical agents， it has good poisoning effect and no pollution to the environment.

Key words Nerium indicum；Scleroderma flavidum extracts；Pieris rapae；Toxicity and killing effect

菜青蟲為鱗翅目粉蝶科菜粉蝶的幼蟲。菜粉蝶寄主植物非常多，對十字花科蔬菜危害較重[1]，給蔬菜造成很多傷口，為軟腐病菌的侵入和危害提供便利條件[2]，同時會在蔬菜上排出并殘留大量蟲糞，使得葉片和菜心受到污染，從而影響蔬菜產品的商品質量[3]。目前對菜青蟲的防治方法主要為化學防治，使用的殺蟲劑主要有氯氟氰菊酯、2%阿維菌素等，二者殺蟲效果顯著，但大量使用化學農藥不僅有農藥殘留還對生態環境造成了破壞，而且長時間使用也使蟲體產生了耐藥性[4-5]。鑒于化學殺蟲劑的抗性及生態環境和食品安全問題，研究出一種環境友好型生物農藥來防治菜青蟲十分必要。

夾竹桃 （Nerium indicum Mill.）又名柳葉桃，屬夾竹桃科夾竹桃屬。植株有毒，生命力強，對土壤的要求不嚴，資源豐富。葉的乙醇提取物對二化螟幼蟲有較強的拒食作用，能抑制其生長發育[6]，高濃度提取液對菜青蟲具有一定的觸殺作用[7]，研究表明，夾竹桃提取物對松材線蟲具有致死性，且滅螺活性明顯[8] ，這為夾竹桃開發為病蟲害綜合治理的農藥提供了理論依據。

黃硬皮馬勃（Scleroderma flavidum Ell.& EV.）孢子粉有消炎、殺菌、止血作用[9]。魏艷等[10-11]研究發現，黃硬皮馬勃提取物對3齡粘蟲具有毒殺作用。洪娜等[12]研究發現，褐皮馬勃孢子粉對嗜卷書虱有防治作用。但馬勃與植物源配合殺菜青蟲的研究國內外鮮見報道。鑒于此，筆者用馬勃真菌和夾竹桃配合殺菜青蟲，為大型真菌與植物源復合型殺蟲劑的研發和菜青蟲的防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

供試蟲體。供試害蟲為菜青蟲，從田間捕捉，由中國科學院動物研究所王劍峰博士鑒定。將其置于溫度20～25 ℃、相對濕度70%～80%的實驗室飼養，試驗選取2齡幼蟲做供試蟲。

1.1.2 供試菌種。馬勃真菌采于內蒙古赤峰市，經遼寧省農業科學院食用菌研究所劉俊杰研究員鑒定。

1.1.3 供試植物。夾竹桃購于花鳥魚市場。

1.1.4 主要儀器。FA-2004精密電子天平、PRX—205B智能人工氣候箱、SW-CJ-2F（D）型醫用凈化工作臺、LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器、BS-1EH數顯振蕩培養箱、R-215旋轉蒸發儀、DHG-9146A鼓風干燥箱。組織搗碎勻漿機。

1.2 方法

1.2.1

夾竹桃提取液的制備。將新鮮夾竹桃葉洗凈，晾干，剪成約1 cm.2 碎片。稱取80 mg，加入95%乙醇，用組織搗碎勻漿機勻漿。經2次過濾，得夾竹桃乙醇萃取液。通過減壓旋轉蒸發回收乙醇，再定容到100 mL即為母液，母液終濃度為80 mg/mL。分別將母液按比例配成5、10、20、40、80 mg/mL，5種濃度溶液。

1.2.2

馬勃活性成分提取。將馬勃真菌的子實體進行固體菌種擴繁，接種至PDA液體培養基中，于26 ℃液體發酵搖床上培養7 d，再進行超聲波細胞破碎、離心，取上清液，進行旋轉蒸發濃縮，濃縮液經40 ℃恒溫干燥，得馬勃粗提物，將馬勃粗提物溶于不同體積的乙醇溶液中，用超聲波破碎，再經3 000 r/min離心制成濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的上清液。

1.2.3

菜青蟲引誘劑的篩選。引誘試驗采用濾紙藥膜法。分別將500 g黃瓜、山竹、甘藍、番茄、胡蘿卜放入組織搗碎機中充分攪拌15 min，用紗布過濾，加水分別得到黃瓜汁、山竹汁、甘藍汁、番茄汁、胡蘿卜汁。將直徑9 cm的培養皿洗凈，烘干，然后把直徑9 cm的圓形濾紙對半剪開，其中一半分別放入5種不同的果蔬汁中浸漬5 min，另一半在水中浸漬5 min。待水分自然揮發后，使用透明膠帶將對應的兩半處理過的濾紙粘在一起，用固體膠將粘貼后的濾紙固定在培養皿底部，接入預先饑餓處理4 h的2齡試蟲20頭/皿，使其自然分散，并且濾紙兩邊分別放浸有同類提取液的白菜碎葉，正常飼養，蓋上皿蓋，設A1（黃瓜）、A2（山竹）、A3（甘藍）、A4（番茄）、A5（胡蘿卜）；對照組僅用蒸餾水處理記為A0。另取直徑9 cm的培養皿，其中放入只浸水且晾干的濾紙和浸水白菜碎葉作為空白對照組A0，接蟲后每12 h檢查一次兩半濾紙上的幼蟲分布情況。計算非選擇引誘率，并篩選出合適的引誘劑。

1.2.4

不同濃度夾竹桃醇提液對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁與20 mL濃度分別為5、10、20、40、80 mg/mL的夾竹桃醇提液混合，將浸有上述不同濃度混合液的新鮮白菜碎葉依次放入不同培養皿中，取20頭2齡菜青蟲放于各個培養皿中，試驗條件同上“1.2.3”，設B1、B2、B3、B4、B5；另取一個培養皿，其中只放入浸有山竹汁的新鮮白菜碎葉做空白對照（B0），每12 h 檢查一次結果，更換碎葉片并統計死亡試蟲數。

1.2.5 不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁與20 mL濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的馬勃粗提物混合，將浸有上述不同濃度混合液的新鮮白菜碎葉依次放入不同培養皿中，分別取20頭2齡菜青蟲放于各個培養皿中，試驗條件同上“1.2.3”，設C1、C2、C3、C4、C5；另取一個培養皿，其中只放入浸有山竹汁的新鮮白菜碎葉做空白對照（C0），每12 h 檢查一次結果，更換碎葉片并統計死亡試蟲數。

1.2.6 夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果測定。每組取20 mL山竹汁加20 mL濃度為20 mg/mL夾竹桃醇提液與20 mL濃度分別為5、10、15、20、25 mg/mL的馬勃粗提物混合，再將新鮮白菜碎葉分別浸入上述不同濃度混合液中，各取20頭2齡菜青蟲放于培養皿中，試驗條件同“1.2.3”，設D1、D2、D3、D4、D5；另取一個培養皿，其中放入浸有20 mL山竹汁和20 mL濃度為20 mg/mL夾竹桃醇提液的混合液的白菜碎葉做空白對照（D0），每12 h 檢查一次結果，更換碎葉片并統計死亡試蟲數。

1.3 數據處理

采用SPSS 16.0軟件Duncan，s Multiple Range Test方法進行顯著性分析。

引誘率=（對照邊蟲數- 處理邊蟲數）/對照邊蟲數×100%

平均引誘率=引誘材料各次檢查時的引誘率之和/檢查次數

死亡率=（死蟲數/供試蟲數）×100%

平均死亡率=同一觸殺材料各次檢查時的死亡率之和/檢查次數

校正死亡率=[（處理組死亡率- 對照組死亡率）/（1- 對照組死亡率）]×100%

2 結果與分析

2.1 不同引誘劑對菜青蟲的引誘作用

由表1可知，5種果蔬汁對菜青蟲均有一定的引誘作用。處理3 d后引誘效果均明顯下降。其中，山竹汁對菜青蟲的引誘作用最強，山竹汁處理3 d內引誘率一直保持在78%以上，4 d內也保持在66%以上。因此，最終篩選出山竹汁作為引誘劑。

2.2 不同濃度夾竹桃醇提液對菜青蟲的毒殺效果

由表2可知，加入一定量的引誘劑后，3 d內對菜青蟲的毒殺效果不明顯，3 d后隨著夾竹桃醇提液濃度的增加，對菜青蟲的毒殺效果越來越明顯，這表明雖然夾竹桃醇提液對菜青蟲具有一定的毒殺效果，但起效時間過長，當濃度達20 mg/mL時，毒殺效果最明顯。

2.3 不同濃度馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果

由表3可知，加入一定量的引誘劑后，2 d內馬勃粗提物對菜青蟲的毒殺效果明顯，但3 d后不能繼續起到毒殺作用，當濃度達20 mg/mL時校正死亡率達63.16%，且隨濃度增大呈毒殺效果不斷增強的趨勢，當濃度達25 mg/mL時校正死亡率達68.42%。

2.4 不同濃度馬勃真菌復合夾竹桃粗提物對菜青蟲的毒殺效果

由表4可知，加入一定量的引誘劑和適量夾竹桃醇提液后，隨著馬勃粗提物濃度的增加，2 d內復合物對菜青蟲的毒殺效果明顯，3 d后毒殺效果趨于穩定，當馬勃粗提物濃度達20 mg/mL時，復合物毒殺效果在2 d內已達最佳狀態，當馬勃粗提物濃度達25 mg/mL時復合物毒殺效果在1 d內已達最佳效果。

3 結論

為篩選夾竹桃提取液配合馬勃粗提物毒殺青菜蟲的最適濃度，該研究以2齡菜青蟲為供試蟲體，將夾竹桃提取液配合不同濃度馬勃粗提物噴灑于盛放菜青蟲的培養皿中，測定不同時段菜青蟲的死亡率。結果表明，山竹汁是菜青蟲的最佳引誘劑。馬勃粗提物配合夾竹桃提取液對2齡菜青蟲有一定的毒殺作用，并表現出明顯的劑量效應。

當夾竹桃提取液濃度為20 mg/mL，馬勃粗提物濃度為25 mg/mL時，菜青蟲的校正死亡率為83.33%，為最優濃度。

參考文獻

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