PCV2 LAMP現場可視化定性和熒光定量PCR快速檢測試劑盒

2017年3月22日，上海市政府在上海展覽中心隆重舉辦了上海市科學技術獎勵大會，上海市農業科學院生物技術研究所趙凱研究員主持的《斷奶仔豬多系統衰竭綜合征防控新技術的建立及應用》項目榮獲2016年上海市科技進步三等獎。

1 項目所屬科學技術領域

屬于農業生物技術領域。

2 主要技術內容

2.1 豬斷奶后多系統衰竭綜合征

斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）是由豬圓環病毒2型（PCV2）引起的一種重要疾病，嚴重發病地區死淘率達40%以上。由于PCV2嚴重破壞豬的免疫系統，使各種疫苗免疫失敗。因此，PCV2感染的早期診斷和病豬的淘汰成為PMWS防治的重點。

2.2 PMWS防控新策略和支撐技術的建立

有鑒于此，申請人提出了PMWS防控新 策略：

（1）首先養殖戶用PCV2 LAMP試劑盒定性檢測豬群，將被PCV2感染的豬與健康豬隔離開來，防止交叉感染。

（2）用定量PCR試劑盒對被PCV2感染的豬進行定量檢測，文獻報道豬體內PCV2病毒超過4 000拷貝/mL血液就會患病，而患病豬很難康復，因此，建議將PCV2病毒超過4 000拷貝/mL血液的豬直接淘汰。

（3）母豬會將PCV2傳播給仔豬，公豬會將PCV2傳播給母豬，因此養殖戶用PCV2 LAMP試劑盒定性檢測種豬，將被PCV2感染的種豬直接淘汰。因此，通過以上兩種方法組合起來進行檢測、隔離和對病豬的適當淘汰可以防控PMWS，最大限度減少養殖戶經濟損失。

為此我們建立了PCV2 LAMP現場可視化定性和熒光定量PCR快速檢測支撐技術并成功開發出試劑盒。將兩種試劑盒組合起來防控PMWS，最大限度減少養殖戶經濟損失。

3 成果科技創新程度

（1）PCV2 LAMP現場可視化快速定性檢測試劑盒：

a 設計的PCV2 LAMP引物序列未見報道；

b 增加了一對環引物，可使LAMP反應時間減少一半，這是前人工作所沒有的；

c 在LAMP反應體系中添加了甜菜堿，加速了解鏈速度，這是前人工作所沒有的；

d 首創了不提取PCV2病毒核酸、直接以豬血清樣本為模板加入反應體系進行LAMP反應，減少了操作時間和步驟，降低成本。

（2）PCV2熒光定量PCR定量檢測試劑盒：

a 設計的熒光定量PCR引物和探針序列未見報道；

b 創造和優化了PCV2熒光定量PCR反應體系和參數，效果大大優于前人的報道；

c 該方法被美國佐治亞疾控中心所采用。

（3）首次提出了將基于LAMP現場可視化快速定性檢測方法和熒光定量PCR定量檢測方法組合起來進行豬PCV2定性、定量檢測以防控PMWS的檢測策略和技術。

（4）檢測靈敏度達到進出口畜產品檢測國際標準。無論在技術水平，還是試劑盒的靈敏度上，均高于國內外同類研究。

4 知識產權及應用推廣情況

申請專利3項，獲授權國家發明專利1項，提出PMWS防控新策略一種，開發試劑盒2種。

在江、浙、滬、皖、魯、豫養豬場將這一新策略和技術進行了示范推廣，用于PMWS防控。使PMWS發病率大大降低。由于利用此技術減少了藥物和飼料及人工成本，每頭豬節約30元。累積節約10.5億元養殖投入。采用此技術全國每年將節約180億元的養殖成本。