CXCR1、CXCR2及IL-8在老年社區獲得性肺炎患者病情及預后評估中的作用

陳曉斐 徐志豪 董大鵬

(浙江大學醫學院附屬第二醫院呼吸內科，浙江 杭州 310009)

社區獲得性肺炎(CAP)患者的預后與多種因素相關，目前多采用肺炎嚴重指數(PSI)評分評估患者的病情及預后，但老年患者的臨床表現常不典型〔1〕。既往研究發現，老年CAP患者病變程度與炎癥反應相關，C反應蛋白(CRP)對患者的預后具有提示作用，但CRP為非特異性炎癥指標，在外傷、心血管病等多種情況下均可上升〔2〕。白細胞介素(IL)-8通過與其趨化因子受體(CXCR)1及CXCR2結合啟動中性粒細胞趨化反應，募集白細胞，引起及加重炎癥反應〔3〕。本研究旨在分析IL-8及其受體CXCR1、CXCR2在老年CAP患者病情及預后評估中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年6月至2016年6月浙江大學醫學院附屬第二醫院收治的78例老年CAP患者，其中男52例，女26例，年齡61～82〔平均(71.1±9.0)〕歲。納入標準：(1)符合2006年中華醫學會《社區獲得性肺炎診斷和治療指南》標準〔4〕；(2)患者發病時均出現咳嗽、咳痰、發熱等呼吸道感染癥狀；(3)CT顯示患者肺部有炎癥陰影；(4)患者均自愿參與。排除標準：(1)嚴重心、肝、腎功能性損傷、中樞神經系統疾病、患有肺部腫瘤，除外慢性肺部疾病如慢性支氣管炎及慢性阻塞性肺疾病(COPD)病史、間質性肺炎、哮喘者；(2)合并自身免疫疾病及結締組織病合并肺部感染者；(3) 合并有精神神經系統疾病，不能配合者。選取50名健康志愿者為對照組，其中男33名，女17名，年齡61～80〔平均(70.9±8.5)〕歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2PSI評分 使用PSI評分對患癥狀進行評價〔5〕，I級患者不需要進行評分，Ⅱ～Ⅴ級患者根據PSI進行評分，項目包括年齡、合并疾病(腫瘤、肝病、充血性心力衰竭、腦血管病及腎病)、體格檢查(神志狀態、呼吸次數、血壓、體溫及脈搏)及化驗結果(血氣分析結果、血尿素氮、血鈉、血糖、HCT及胸腔積液)。Ⅱ～Ⅲ級為低風險組(PSI評分≤90)21例，男14例，女7例，平均年齡(67.3±5.2)歲；Ⅳ級為中風險組(PSI評分91～130)34例，男23例，女11例，平均年齡(69.2±4.9)歲；Ⅴ級為高風險組(PSI評分>130)23例，男15例，女8例，平均年齡(76.4±4.3)歲。3組性別差異無統計學意義(P>0.05)，年齡差異有統計學意義(P<0.05)。

1.3檢測CXCR1、CXCR2級IL-8水平 CAP組及對照組于清晨經肘靜脈抽取空腹血10 ml，分別置2支含肝素(200 IU/ml的無菌eppendorf管和1支潔凈的eppendorf管),Perocll非連續密度梯度離心法分離中性粒細胞，普通管常規分離血清備檢。血清IL-8水平采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測，試劑盒由聯科生物技術股份有限公司提供(中國)。制備中性粒細胞單個細胞懸液(1×106/ml)，取100 μl細胞懸液加入抗人CXCR1抗體、抗人CXCR2抗體，抗體由上海瑤韻生物科技有限公司提供，4℃避光孵育30 min，用染色緩沖液洗滌細胞2次，200 μl染色緩沖液重懸后上流式細胞儀FACSCalibur檢測，每個樣品至少收集1×104以上的細胞，數據采用儀器自帶的軟件分析處理。

1.4CXCR1、CXCR2及IL-8的mRNA水平檢測 使用RPMI1640完全培養液重懸中性粒細胞，以牛鮑氏計數板調濃度至1×106個/ml。移液器取細胞懸液300 μl，提取細胞總RNA。RT-PCR引物及試劑盒由賽默飛世爾(中國)有限公司提供。PCR體系25 μl包括2.5 μl 10×PCR緩沖液(Mg2+)，2 μl dNTP混合物(各10 mmol/L)，0.25 μl TaqDNA聚合酶(5 U/μl)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，2 μl cDNA，16.25 μl ddH2O。反應條件 94℃變性5 min，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30個循環，最后一次延伸持續5 min。取擴增產物5 μl，進行1.5%瓊脂糖凝膠(含0.5 g/ml EB)電泳，電壓5～6 V/cm 15 min，紫外透射分析儀進行觀察，凝膠分析系統掃描攝像定量分析，記錄實驗結果。

1.5統計學方法 應用SPSS21.0統計軟件進行t檢驗或單因素方差分析、χ2檢驗及Pearson相關性分析。

2 結 果

2.1CAP患者PSI評分比較 低、中、高風險組PSI評分〔(65.2±17.9)、(114.2±24.5)、(153.2±21.6)分〕差異有統計學意義(F=7.885，P<0.05)。

2.2各組血CXCR1、CXCR2及IL-8水平比較 各組IL-8、CXCR1及CXCR2水平差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血IL-8、CXCR1及CXCR2水平比較

與對照組比較：1)P<0.05；下表同

2.3各組CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA水平比較 各組IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA水平比較

2.4PSI與CXCR1、CXCR2及IL-8的相關性 校正性別及年齡后，PSI與血CXCR1、CXCR2及IL-8水平呈正相關(r=0.413，0.395，0.304；均P<0.05)；與CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA呈正相關(r=0.581，0.559，0.604；均P<0.05)。

3 討 論

隨著年齡的增長及免疫力的下降，老年CAP患者的癥狀、體征及影像學檢查結果常不典型。PSI是目前臨床上常用的評價CAP患者預后的方式，Ⅰ級患者年齡較輕，且未合并并發癥，不需要進一步進行評分；Ⅱ～Ⅲ級患者死亡風險低于3%，僅需要門診進行觀察；Ⅳ級患者死亡風險可達9%，需要住院；Ⅴ級患者需要長期院內管理〔6〕。本研究結果提示，高齡(≥75歲)是CAP患者預后不良的獨立危險因素，患者一般狀態較差且合并疾病較多。

CXCR1及CXCR2屬于G蛋白耦聯受體，在氨基酸序列高度相似。CXCR主要表達于中性粒細胞表面，在健康人體內表達水平較低〔7〕。IL-8為CXCR1及CXCR2的共同配體，結合受體后激活下游通路誘導中性粒細胞、單核細胞及淋巴細胞等炎性細胞游走至病變部位，介導炎癥反應。活化的炎性細胞分泌溶菌酶、超氧化物等，包裹及殺滅病原體，發揮抗感染作用。但在存在嚴重感染時，大量的中性粒細胞產生的細胞因子可能造成組織損傷；同時，中性粒細胞活化增加局部組織耗氧量，加重氧化應激反應，產生大量氧自由基，加重機體損傷〔8〕。既往研究中，CXCR1及CXCR2的拮抗劑能夠有效抑制LPS誘導小鼠肺炎模型的炎性反應，降低死亡率〔9〕。

PSI主要臨床表現對CAP患者的病情及預后進行評估，容易受到與評估者及受試者相關的多種因素的影響。IL-8及其配體能夠更為準確客觀，且與PSI相關性良好，適合作為評估CAP患者預后及病情評估的輔助檢查指標。

4 參考文獻

1周 忠,陳 佳,謝小馨,等.白細胞不升高社區獲得性肺炎的臨床特征與危險因素〔J〕.中國老年學雜志,2016;36(20):5079-82.

2凡 敏,梁宗安,胡麗佳,等.降鈣素、D-二聚體、C 反應蛋白與重癥社區獲得性肺炎病情、預后判斷的相關性研究〔J〕.中國實驗診斷學,2015;19(4):563-6.

3魏 晶,李 偉,邵萬平,等.CXCR1/CXCR2拮抗劑G31P抗中性粒細胞介導的炎癥作用研究〔J〕.中華微生物學和免疫學雜志,2010;30(5):483-6.

4鄧偉吾.社區獲得性肺炎診斷和治療指南〔C〕.上海：中華醫學會第七次全國感染病學術會議論文匯編,2001：276-9.

5丁艷艷,張永祥.病情程度評估在社區獲得性肺炎患者中的應用價值〔J〕.國際呼吸雜志,2015;35(24):1854-6.

6但 勇,覃雙全.PSI評分和CURB-65評分對社區獲得性肺炎患者病情及預后的對比研究〔J〕.中國當代醫藥,2012;19(21):29-30.

7陳張博.CXCR1/CXCR2受體拮抗劑iP10C57BL/6小鼠克雷伯桿菌肺炎的抑制作用〔D〕.大連：大連醫科大學,2011.

8徐紹娟,胡愛民.細菌性肺炎患者IL-6及IL-8及C反應蛋白的測定及其意義〔J〕.中國微生態學雜志,2015;27(6):702-3.

9邵萬平.CXCR1/CXCR2受體拮抗劑-G31P對豚鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎的抑制作用〔D〕.大連：大連醫科大學,2010.