紅花黃色素聯(lián)用奧美沙坦對腎性高血壓大鼠循環(huán)及心肌組織IL-6和IL-10水平的影響

汪漢東 周忠榮 張春天 徐 鋼

(黃石市愛康醫(yī)院腎病內(nèi)科，湖北 黃石 435000)

高血壓是動脈粥樣硬化、冠心病和腦血管疾病的重要致病因素之一〔1〕。研究表明高血壓為一種持續(xù)低度的炎癥反應(yīng)狀態(tài)，而促炎性細胞因子在高血壓的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用，如白細胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α等，它們不僅產(chǎn)生胰島素抵抗，而且還與高血壓性心臟病、冠心病甚至心力衰竭密切相關(guān)〔2,3〕；研究顯示抗炎性細胞因子IL-10特別是在減輕炎癥方面表現(xiàn)出了許多機體保護的作用〔4〕，因此升高IL-10的水平可能對機體有利。血管緊張素受體拮抗劑和紅花黃色素(SY)均可以降低循環(huán)中促炎性細胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6等的水平〔5,6〕，但對IL-10的影響尤其是二藥聯(lián)用的實驗觀察鮮有報道。本研究觀察SY聯(lián)用奧美沙坦(OM)治療對高血壓大鼠血液及心肌組織內(nèi)IL-6和IL-10水平的影響。

1 材料與方法

1.1材料 清潔級雄性Wistar大鼠由煙臺綠葉制藥動物實驗中心提供；SY由山西華輝凱德制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準字Z20050594；OM酯由第一三共制藥(上海)有限公司生產(chǎn)，國藥準字H20060371；IL-6 和 IL-10酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測試劑盒由武漢貝因萊生物科技有限公司提供。

1.2方法

1.2.1高血壓大鼠模型的制備 大鼠術(shù)前禁食、稱重，按0.3 ml/100 g體重給予10%水合氯醛腹腔注射麻醉，沿左肋弓下緣至髂前區(qū)域剪毛，繼以碘伏消毒后，逐層剪開腹腔，手術(shù)組大鼠于左腎后上方分離腎動脈，在左右腎動脈分支點以上的腹主動脈的下方穿入手術(shù)絲線，沿血管走行方向放置磨鈍的5號針頭與腹主動脈以絲線一并結(jié)扎，然后抽出針頭，造成腹主動脈狹窄程度50%以上，再逐層縫合腹壁；假手術(shù)組大鼠切開腹腔分離腹主動脈后即縫合腹腔，術(shù)后常規(guī)給予青霉素10萬U/kg肌注3 d。

1.2.2分組 選取體重170～250 g雄性大鼠50只，隨機分為手術(shù)組和假手術(shù)組。手術(shù)組分別為模型組、SY組、OM組及聯(lián)合用藥組，各組分別按照上述方法進行手術(shù)。各組實驗中均有動物死亡。

1.2.3給藥方法 大鼠術(shù)后3 d開始給藥，各組大鼠給藥均按1 ml/100 g的容量以灌胃方式進行，1次/d，時程7 w。給藥劑量分別為：SY組SY 100 mg/kg，OM組OM 10 mg/kg,聯(lián)合用藥組OM 10 mg/kg+SY 100 mg/kg,SO組及MC組給予等量滅菌飲用水。

1.2.4取材 給藥結(jié)束后，將大鼠麻醉后剪開腹腔，腹主動脈內(nèi)取血，然后摘取心臟，把分離的血清和組織放入-80℃冰箱保存。

1.2.5標本測定 采用ELISA測定大鼠血清及心肌組織勻漿IL-6、IL-10的水平，免疫組織化學(xué)檢測心肌組織IL-6、IL-10表達。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1各組血清及心肌組織IL-6和IL-10水平比較 與假手術(shù)組相比，模型組血清及心肌組織IL-6 和 IL-10 水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；與模型組相比,藥物治療組血清及心肌組織內(nèi) IL-6 水平均明顯降低(均P<0.001)，而血清及心肌組織內(nèi)IL-10水平無明顯變化(P>0.05)；與單藥治療相比，聯(lián)合用藥組心肌組織IL-6 水平下降更加明顯(P<0.001),但對IL-10水平及血清IL-6水平的影響變化不大(P>0.05)。見表1，表2。

表1 各組血清IL-6和IL-10水平比較

與假手術(shù)組比較:1)P<0.001；與模型組比較:2)P<0.001；與聯(lián)合用藥組比較:3)P<0.001

2.2各組心肌組織免疫組織化學(xué)結(jié)果比較 與假手術(shù)組相比，模型組心肌組織內(nèi)IL-6 和 IL-10 水平均明顯升高(P<0.001)；與模型組相比,藥物治療組心肌組織內(nèi) IL-6 水平明顯降低(P<0.001)，而心肌組織內(nèi)IL-10水平無明顯變化(P>0.05)；與單藥治療相比，CT組心肌組織內(nèi) IL-6 水平下降更加明顯(P<0.001),但對IL-10水平影響變化不大(P>0.05)。 見圖1。

表2 各組心肌組織IL-6和IL-10水平比較

圖1 各組心肌組織IL-6表達免疫組織化學(xué)結(jié)果(DAB，×200)

3 討 論

高血壓是嚴重危害人類健康的疾病之一，盡管已引起了全世界的關(guān)注，但其發(fā)病率仍呈逐年上升的趨勢。長期、持續(xù)的血壓增高，特別是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的激活，導(dǎo)致機體神經(jīng)內(nèi)分泌及免疫系統(tǒng)的功能失調(diào)，進而促使各種靶器官損害的發(fā)生和動脈粥樣硬化、心腦血管疾病等的形成〔7〕。在這一過程中，炎性機制起著極其重要的作用，炎性機制不僅參與高血壓的發(fā)生，而且與高血壓的發(fā)展密切相關(guān)〔8，9〕。促炎性細胞因子如IL-6，不僅導(dǎo)致高血壓左室肥厚，而且也可導(dǎo)致心肌纖維化、心臟舒張功能的異常，并且頸動脈內(nèi)膜厚度也與其水平的高低密切相關(guān)〔10〕，因此，降低IL-6在機體內(nèi)的水平有益于高血壓及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

抗炎性細胞因子IL-10是近年來醫(yī)學(xué)上越來越重視的一種細胞因子，研究顯示其對機體有利的特性，IL-10不僅可改善血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)的機體氧化應(yīng)激反應(yīng)和血管功能異常，在血管壁內(nèi)發(fā)揮保護作用〔11〕，而且IL-10過度表達有延緩動脈粥樣硬化發(fā)展的可能〔12〕，同時，IL-10還可以減輕血管對強烈收縮血管的物質(zhì)內(nèi)皮素-1的反應(yīng)〔13〕，故提升機體內(nèi)IL-10的水平也是高血壓抗感染治療的一個靶點。

血管緊張素Ⅱ在高血壓的發(fā)生發(fā)展機制中起著決定性的作用，其活性增加不僅使血壓升高，同時也促使炎性系統(tǒng)的激活而誘發(fā)炎性反應(yīng)，故抑制RAAS的活性也是高血壓抗感染治療的一個手段。本研究表明高血壓時存在炎性機制的激活，而血管緊張素受體I拮抗劑——OM能夠明顯降低IL-6在循環(huán)和心肌組織內(nèi)的濃度，與相關(guān)研究結(jié)果一致〔14〕，而對抗炎性細胞因子的作用觀察中，顯示OM可能具有維持IL-10在機體內(nèi)的濃度的作用，表明其對炎性機制的抑制作用不僅僅是通過降低促炎性因子活性這一途徑。

中藥為祖國醫(yī)學(xué)的特色之一，近年來，越來越多的有效成分從傳統(tǒng)中藥中提取出來并應(yīng)用于臨床，在醫(yī)療保健中也發(fā)揮了重要的作用。SY是一種中藥紅花提取物，主要活性成分為查爾酮類化合物，具有抗氧化應(yīng)激、抑制核因子-κB活性和保護血管內(nèi)皮細胞功能等多種作用〔15〕，也有抑制炎癥反應(yīng)的功能，如降低IL-1β,TNF-α等mRNA的表達〔16〕,本研究顯示SY也可明顯降低高血壓大鼠血清和心肌組織內(nèi)IL-6的濃度，并可能具有維持抗炎性細胞因子IL-10在機體內(nèi)的水平的作用。

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