熒光分光光度法測定斯達舒中鋁的含量

山西中醫(yī)藥大學中藥學院，山西 晉中 030619

鋁是地殼中含量最豐富的金屬元素，約占地殼的70%，在許多藥物、食品添加劑、混凝劑等中都含有鋁。鋁是一種對人體和生態(tài)都有害的物質(zhì)，雖然快速進入人體不會導致急性中毒，但是長期過量的攝入鋁會對中樞神經(jīng)、肝、腎、骨、造血細胞都有損壞，導致癡呆，引起貧血、骨質(zhì)疏松等疾病[1]。所以，建立一種靈敏、快速的分析方法用來檢測鋁的含量具有一定的實際意義。目前，測定鋁的方法有原子吸收光度法[2]、化學法[3]、紫外分光光度法[4]等。而熒光光度法因具有操作簡單快速、樣品用量少、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點，被廣泛地應用于鋁的含量測定[5]。在前期研究中，以2-氨基苯酚和2-羥基萘甲醛為原料，合成了萘甲醛席夫堿(HPIN)，并通過熒光分光光度法測定了白術(shù)、防風、黃芪、連翹等中藥中鋁的含量[6-7]。本文探索以HPIN為絡合劑，采用熒光分光光度法測定胃藥斯達舒中鋁的含量，為復方制劑中鋁含量的測定提供了一種新的方法，為斯達舒質(zhì)量控制的檢測方法提供參考。

1 儀器與材料

1.1 材料 斯達舒片(批號：160808、161104、161110、160113，修正藥業(yè)集團股份有限公司)，HPIN由山西中醫(yī)藥大學基礎(chǔ)化學實驗室提供。甲醇、乙酸、乙酸銨、氯化銨、氨水、硝酸鋁、乙酸鈉、鹽酸等試劑都是分析純。

1.2 儀器 CP214萬分之一天平(奧豪斯儀器有限公司)，UV-6100S型紫外可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)，F(xiàn)97pro型熒光光譜儀(上海棱光技術(shù)有限公司)，pHS-3C pH計(上海精密科學儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液的制備

2.1.1 鋁標準溶液的制備 精密稱取0.0188 g Al(NO3)3·9H2O，用適量蒸餾水溶解，定容至50 mL容量瓶，配制成1 mmol/L的鋁儲備液。精密移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，配制為10 μmol/L的標準鋁溶液，備用。

2.1.2 HPIN標準溶液的制備 精密稱取HPIN固體0.0132 g，用適量甲醇溶解，定容至50 mL容量瓶中，配制成1 mmol/ L的HPIN儲備液。精密移取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配制成10 μmol/L的標準HPIN溶液，備用。

2.1.3 緩沖溶液的制備 pH為3、4、5、6的標準緩沖溶液由NaAc與HAc配制， pH為7的標準緩沖溶液由NH4Ac和HAc配制，pH為8、9、10的標準緩沖溶液由NH4Cl與NH3·H2O配制，并經(jīng)pH計校準。

2.2 紫外吸收光譜 在10 mL比色管中，依次加入1.0 mL 10 μmol/L標準鋁溶液，HAc-NH4Ac標準緩沖溶液(pH=7)3.0 mL，10 μmol/L標準HPIN溶液1.0 mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜置40 min，以試劑空白作參比，在300～600 nm范圍進行吸收光譜掃描。結(jié)果顯示，HPIN與鋁離子的絡合物在437 nm處有最大吸收。所以，選擇437 nm作為熒光測定的激發(fā)波長。

2.3 熒光發(fā)射光譜 準確移取1.0 mL的標準HPIN溶液，置于10 mL比色管中，依次加入3.0 mL 的HAc-NH4Ac標準緩沖溶液(pH=7)、1.0 mL 的10 μmol/L的標準鋁溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置40 min，以437 nm為激發(fā)波長，在470～680 nm范圍進行熒光光譜掃描。結(jié)果顯示，在525 nm處有最大的熒光強度。所以選擇525 nm作為熒光測定的發(fā)射波長。

2.4 標準曲線的繪制 取7個10 mL比色管，分別加入1.0 mL的標準HPIN溶液和3.0 mL pH=7的HAc-NH4Ac標準緩沖溶液，依次加入0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL的標準鋁溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，靜置40 min，固定437 nm為激發(fā)波長， 525 nm為發(fā)射波長，測定熒光強度F。以F與標準鋁溶液的濃度作回歸分析，可得回歸方程：F=23.39C+11.444，r=0.9985，說明鋁離子在0～6μmol/L濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 緩沖溶液的選擇 按“2.4”項方法操作，分別測定pH為3、4、5、6、7、8、9、10的標準緩沖溶液中的熒光值，結(jié)果顯示pH為7的HAc-NH4Ac標準緩沖溶液中熒光強度最大。同時分別測定標準緩沖溶液為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL中的熒光值，發(fā)現(xiàn)用量為3.0 mL時，熒光最強。因此實驗采用3.0 mL pH為7的HAc-NH4Ac標準緩沖溶液進行測定。

2.6 絡合時間的選擇和穩(wěn)定性實驗 在10 mL的比色管中，依次加入1.0 mL的標準HPIN溶液、3.0 mL的HAc-NH4Ac標準緩沖溶液、1.0 mL的標準鋁溶液，按“2.4”項方法操作，每隔5 min測定熒光強度，結(jié)果表明在40 min內(nèi)絡合反應基本完成，熒光強度達到最大值，并在1 h內(nèi)基本穩(wěn)定。因此絡合時間選取40 min。

2.7 精密度實驗 精密移取標準鋁溶液1.0 mL，按“2.4”項方法操作，連續(xù)重復測定6次，計算出RSD為0.98%，表明該儀器精密度良好。

2.8 重復性實驗 選擇斯達舒片(批號1601104)粉末6份，每份1.0 g，制備貯備液，分別精密移取10 μL，按“2.4”項方法測定熒光值，計算出RSD 為0.76 %，表明該方法重復性良好。

2.9 加樣回收率 選擇已知含量的斯達舒片(批號1601104)粉末9份，每份0.5 g，精密稱定，制備貯備液，分別精密移取10 μL，每三份分別按照樣品中鋁含量的50%，100%和150%加入標準鋁溶液，按2.4項方法測定熒光值，計算出平均加樣回收率為99.02%～102.03%，RSD為1.08%～1.89 %。

2.10 共存離子的影響 1 μmol/L鋁離子溶液作為測試對象，在測量的過程中加入共存的離子，測定值的相對誤差小于或等于±5%，進行離子干擾試驗，結(jié)果見表1。大量NO3-、Na+、K+、SO42-離子(共存倍數(shù)超過10000倍)存在下不影響鋁離子含量的測定，F(xiàn)e3+在鄰菲羅啉作為掩蔽劑的情況下最大共存量為600 μmol/L，其他離子(共存倍數(shù)超過200倍)也不影響鋁離子含量的測定。

表1 共存離子的影響

2.11 樣品含量測定 取斯達舒片，研磨，準確稱取0.0150 g置于燒杯中，加入2 mol/L鹽酸，溶解，過濾，洗滌，合并濾液置于100 mL容量瓶中，蒸餾水定容至刻度，即得樣品貯備液。取10 μL樣品貯備液置于10 mL比色管中，按“2.4”項方法連續(xù)測定其熒光值3次，然后根據(jù)標準曲線計算樣品中鋁離子含量，結(jié)果見表2。

表2 不同批號樣品中鋁離子的含量 (n=3)

3 討論

鋁是一種慢性神經(jīng)性毒性物質(zhì)，長期攝入過量會使神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生緩慢改變，從而誘發(fā)老年癡呆等疾病。斯達舒的主要成分為氫氧化鋁、維生素U、顛茄提取物，同時含有淀粉、硬脂酸鎂等輔料。用于緩解胃酸過多引起的胃痛、胃灼熱感(燒心)、反酸，也可用于慢性胃炎。其中，氫氧化鋁對胃部已經(jīng)存在的胃酸起中和或緩沖作用，既是藥物的有效成分，又不能過量攝取，測定斯達舒中鋁離子的含量具有一定的實際意義。2015版《中國藥典》[8]中氫氧化鋁的含量測定方法是采用過量的EDTA與鋁離子發(fā)生反應，再用鋅滴定液滴定剩余的EDTA，根據(jù)鋅滴定液的消耗量，確定氫氧化鋁的含量，操作過程相對繁瑣。研究采用的萘甲醛席夫堿熒光分光度法，取樣量少，選擇性好，靈敏度高，其它離子的干擾少，可以直接測定，操作簡單。斯達舒每片含氫氧化鋁140 mg，即標準含鋁量應為48 mg。實驗以萘甲醛席夫堿為絡合劑，采用熒光分光光度法測定斯達舒中鋁含量的平均值在48 mg以上，達到標準，說明該方法可靠、準確。同時對四批樣品中鋁含量的平均值進行了統(tǒng)計分析，得出斯達舒中含鋁量的范圍為(49.51±0.93)mg/片，即48.58～50.44 mg/片。綜上，本文所建立的熒光分光光度法可以用于檢測斯達舒中鋁的含量，可為含鋁藥物的質(zhì)量控制檢測方法和質(zhì)量標準的制定提供參考。

參考文獻

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[7] Ailing Guo, Ruitao Zhu, Yuehong Ren, et al．A “turn-on” fluorescent chemosensor for aluminum ion and cell imaging application[J]．Spectrochimica Acta Part A：Molecular and Biomolecular Spectroscopy，2016，153：530-534．

[8] 國家藥典委員會，中華人民共和國藥典(二部)[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015，768-769.