HPLC法測定香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量

姚其勝　孫永喜　陳仁燕

[摘要]目的 建立HPLC法測定香麻寒喘貼所含鹽酸麻黃堿的含量。方法 采用Thermo C18色譜柱，以0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調節pH值至2.5）-甲醇（96︰4）為流動相，檢測波長為210 nm，柱溫為25℃，進樣量為5 μl。結果 鹽酸麻黃堿在15.20～91.17 μg/ml范圍內呈良好的線性關系（r=0.9997），鹽酸麻黃堿平均回收率為98.78%，RSD為0.59%。測定3批香麻寒喘貼，平均含量為3.20 mg/100 cm2，RSD為0.31%。結論 本方法簡單方便、準確率高、專屬性強，可以作為檢測鹽酸麻黃堿含量的有效方法。

[關鍵詞]香麻寒喘貼；HPLC；鹽酸麻黃堿

[中圖分類號] R927.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）2（c）-0017-04

[Abstract]Objective To establish a HPLC method in the determination of ephedrine hydrochloride in Xiangma Hanchuantie.Methods 0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate （adjusted to pH 2.5 with phosphoric acid）-methanol （96︰4） was used as the mobile phase with a Thermo C18 column and the detection wavelength was 210 nm.The column temperature was 25℃ and the sampling amount was 5 μl.Results A good linear relationship of ephedrine hydrochloride was shown in the range of 15.20-91.17 μg/ml （r=0.9997）.The average recovery of ephedrine hydrochloride was 98.78% and the RSD was 0.59%.Determination of 3 batches samples，the total content of ephedrine hydrochloride was 3.20 mg/100 cm2 and the RSD was 0.31%.Conclusion The results show that this method is simple，convenient and accurate.It can be employed as an effective method for the determination of ephedrine hydrochloride content.

[Key words]Xiangma Hanchuantie；HPLC；Ephedrine hydrochloride

香麻寒喘貼是由麻黃、芥子、丁香、細辛、矮地茶、生姜六味中藥材制成的貼膏劑，具有宣肺平喘、化痰止咳的作用，用于兒童輕、中度哮喘急性發作期寒飲停肺證的輔助治療[1-2]。近年來，貼劑以其獨特的優勢逐漸得到人們的重視，其不僅具有良好的靶向和性價高的生物利用度，而且還可隨時給藥，簡單方便[3-4]，人們不斷地對貼劑進行改進，在研究如何促進其滲透吸收、制備工藝等方面也做了很多相關工作[5-7]。貼劑的臨床應用[8-9]非常廣泛，現已普遍用于肩周炎[10]、頸椎病[11-12]、哮喘[13-14]、鎮痛[15-16]等。為了保證貼劑的療效與質量，本文對香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿含量[17-20]進行測定，并對該含量測定方法進行方法學驗證。實驗顯示，該方法簡單，可以有效地檢測香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量，準確地控制貼劑有效成分，保證產品質量，現報道如下。

1儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（紫外檢測器，型號：G1314F，美國安捷倫公司），MS105DU型電子天平。鹽酸麻黃堿（批號：171241-201508）對照品來源于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，來源于美國天地有限公司；水為純化水，其他試劑均為分析純。香麻寒喘貼樣品來源于翔宇藥業股份有限公司，批號160601、160602、160603。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱為Thermo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調節pH值至2.5）-甲醇（96︰4），檢測波長210 nm，流速1.0 mol/min，柱溫為25℃，進樣量為5 μl。理論板數按鹽酸麻黃堿峰計算應不低于1000。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液的制備 取160601批樣品6片，精密測量，除去蓋襯，置于帶塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，浸泡過夜。超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾即得。

2.2.2對照品溶液的制備 取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，制成500 μg/ml的鹽酸麻黃堿作為對照品儲備液。用甲醇稀釋，制成50 μg/ml的鹽酸麻黃堿作為對照品溶液。

2.2.3陰性供試品溶液制備 取不含麻黃藥材的陰性樣品6片，精密測量，同供試品溶液制備處理方法，制成陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗

分別精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各5 μl，用高效液相色譜儀測定（圖1）。在該色譜條件下陰性樣品對樣品峰無干擾；主峰保留時間在22 min左右，理論板數按鹽酸麻黃堿峰計算>1000，提示該方法專屬性良好。

2.4鹽酸麻黃堿溶液線性關系試驗

精密吸取對照品儲備液適量分別置于10 ml量瓶中，加甲醇溶液稀釋制成濃度分別為15.20、30.39、50.65、60.78、75.98、91.17 μg/ml的線性溶液，依法測定。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。由試驗結果可知，鹽酸麻黃堿含量為15.20～91.17 μg/ml，線性方程為A=11.576C+2.3606，r=0.9997（n=6）（表1），峰面積和濃度均呈現良好線性關系（圖2）。

2.5鹽酸麻黃堿溶液精密度試驗

取對照品溶液，重復測5次，并記錄色譜圖。結果顯示，峰面積的RSD值為1.13%（表2），提示該方法的系統精密度良好。

2.6鹽酸麻黃堿重復性試驗

精密稱取樣品（批號：160601）6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，依法測定，計算含量為3.13 mg/100 cm2，含量RSD為1.10%（表3），提示該方法的重復性較好。

2.7鹽酸麻黃堿溶液穩定性試驗

將供試品溶液于室溫條件下放置12 h，每隔1 h測定1次。結果顯示，在室溫條件下放置12 h內，測得供試品峰面積的相對標準偏差為0.70%（表4），提示供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.8鹽酸麻黃堿溶液回收率試驗

取160601批樣品（含量為3.13 mg/100 cm2）27片，平均分成9份，每份3片，精密測量，除去蓋襯，置9個帶塞錐形瓶中分為3組，分別加入適量對照品溶液與供試品中待測成分含量之比為0.5︰1、1︰1、1.5︰1，依法測定（表5）。由試驗結果可知，含量測定各濃度下平均回收率為98.0%～101.0%，回收率RSD為0.59%，提示該方法準確度良好。

2.9鹽酸麻黃堿耐用性試驗

2.9.1柱溫 在20、25、30℃柱溫條件下，分別測定含量。結果顯示，柱溫在20～30℃變化時，鹽酸麻黃堿含量為3.13 mg/100 cm2，RSD為0.69%，柱溫變化對測定結果無明顯的影響。

2.9.2流速 在流速為0.8、1.0、1.2 ml/min條件下，分別測定含量。結果提示，流速在0.8～1.2 ml/min變化時，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為1.06%，流速對測定結果無明顯的影響。

2.9.3流動相比例 在流動相磷酸二氫鉀與乙腈的比例為94︰6、96︰4、98︰2條件下，分別測定含量。結果提示，流動相比例在94︰6～98︰2變化時，鹽酸麻黃堿含量為3.16 mg/100 cm2，RSD為0.71%，流動相比例變化對測定結果的影響較小。

2.9.4流動相pH值 在流動相pH值為2.3、2.5、2.7條件下，分別測定含量。結果提示，pH值在2.3～2.7變化時，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為0.89%，流動相pH值對測定結果的影響較小。

2.9.5檢測波長 在檢測波長為208、210、212 nm條件下，分別測定含量。結果提示，檢測波長在208～212 nm變化時，鹽酸麻黃堿含量為3.17 mg/100 cm2，RSD為0.91%，檢測波長耐用性較好。

2.9.6色譜柱 采用Inertsil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），分別測定含量。結果提示，使用不同型號的色譜柱，鹽酸麻黃堿含量為3.25 mg/100 cm2，RSD為2.82%，色譜柱的耐用性較好。

2.10香麻寒喘貼樣品鹽酸麻黃堿含量測定結果

取3批香麻寒喘貼，依法測定鹽酸麻黃堿含量，結果如下（表7）。

3討論

近年來，經皮給藥制劑飛速發展，貼劑以其操作簡單、安全方便的特點越來越受到醫藥行業的重視。香麻寒喘貼是純中藥制劑，安全有效、副作用小，普遍用于宣肺平喘、化痰止咳。經查閱文獻，香麻寒喘貼含量測定的方法鮮有報道，為進一步控制藥品質量，本文對香痳寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量測定方法進行研究。

采用甲醇為溶劑，對樣品進行超聲溶解，操作過程簡單、毒性低，用高效液相色譜法對香麻寒喘貼中鹽酸麻黃堿的含量進行測定，常見含量測定方法有薄層色譜法、紫外色譜法及高效液相色譜法等，其中高效液相色譜法準確性高，并對該方法進行了專屬性、線性、精密度、重復性、穩定性、回收率及耐用性驗證。實驗結果顯示，該方法專屬性強、準確度高，能精確控制藥品質量，保證藥物的準確有效。

[參考文獻]

[1]YBZ00052009.國家食品藥品監督管理局標準·香麻寒喘貼[S].

[2]喻長遠，張芳.香麻寒喘貼止咳平喘作用的實驗研究[J].中國中醫基礎醫學雜志，2006，12（8）：592-593.

[3]王婧斯，王文倩，王成港，等.中藥透皮貼劑的研究進展[J].中草藥，2012，43（5）：1028-1031.

[4]楊柳，王愛武，劉帥.貼劑研究概況及展望[J].遼寧中醫藥大學學報，2014，16（3）：234-236.

[5]吳其國.基于文獻數據簡析我國貼劑的研究進展[J].江西中醫藥大學學報，2017，29（4）：114-116.

[6]汪平，熊維政，武惠斌，等.芬太尼透皮貼劑的研究進展[J].中國藥房，2015，26（32）：4596-4597.

[7]李龍偉，孫英華，王金蘭，等.酮洛芬貼劑的體外經皮滲透性考察[J].中國藥劑學雜志，2016，14（1）：11-17.

[8]胡永慧，佘一鳴，韓立云，等.中藥透皮貼劑的臨床應用進展[J].中草藥，2017，48（13）：2792-2797.

[9] 薛倩倩，馬黃璜，劉智勇，等.貼劑的臨床應用[J].海峽藥學，2016，28（8）：101-104.

[10]王珊蘋.傷科透皮吸收貼劑配合傷科護理治療肩周炎60例體會[J].中醫藥導報，2007，13（5）：80-81.

[11]郭星，莊洪，徐無忌，等.溫感型復方水楊酸乙二醇透皮吸收貼劑佐治頸型頸椎病的療效觀察[J].新醫學，2006， 37（11）：474-748.

[12]林秋芳，陳碩，呂麗芳，等.中藥透皮吸收貼劑穴位貼敷治療頸型頸椎病的臨床研究[J].福建中醫藥，2013，44（4）：1-2.

[13]尹書俠.妥洛特羅貼劑佐治小兒哮喘急性發作的療效及安全性評價[J].臨床醫學，2016，36（4）：116-117.

[14]黃艷春，彭曙輝.妥洛特羅貼劑對小兒喘息性疾病的療效和免疫水平的影響[J].醫學臨床研究，2015，32（2）：389-391.

[15]過麗，張敏英，龐媛媛，等.芬太尼透皮貼劑用于晚期癌痛患者鎮痛68例及護理體會[J].中國藥業，2015，24（5）：87-88.

[16]柯金珍，顏志文，陳豐慶，等.丁丙諾啡透皮貼劑治療中重度慢性疼痛的療效及安全性[J].中國臨床藥學雜志，2017，26（4）：250-253.

[17]高潔，曲素欣，隋娟.高效液相色譜法測定咳得寧糖漿中鹽酸麻黃堿含量[J].中國藥業，2015，24（14）：82-83.

[18]呂劍豪，張海平，高小川，等.HPLC法測定麻杏止咳片中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中藥材，2015，38（12）：2626-2627.

[19]楊家彬，張先平，吳世平，等.HPLC 法測定羅浮山風濕膏藥中鹽酸麻黃堿的含量[J].中國藥房，2015，26（21）：2994-2996.

[20]倪曉霞，王慶芬，劉曉玲.鹽酸麻黃堿滴鼻液3種含量測定方法的比較[J].西北藥學雜志，2017，32（5）：600-603.

（收稿日期：2017-12-18 本文編輯：祁海文）