外周血hs-CPR、CD11b陽性細胞和CD64陽性細胞對早產兒早期感染的診斷價值

李 晨，姬靜璐，王 玉，魏繼紅，李朝英，李少華，安 娜

近年來，早產兒發生率逐年上升，發達國家發生率可達5%～7%，我國早產兒發生率也日漸接近歐美國家水平[1]。早產兒由于出生體重低、免疫功能發育不完全，較正常嬰兒更容易發生感染。低出生體重兒就有可能出現住院時間的延長，慢性肺部疾病的發生和神經系統發育的異常狀況[2]。然而，新生兒的感染發病情況難以察覺，且發展迅速，患兒可迅速出現膿毒性休克和彌散性血管內凝血等。早產兒感染防治是早產兒管理的重要環節。目前，血液細菌培養為早產兒感染的金標準，但其有顯著的缺陷，如陽性率低、費時、結果滯后等[3]，因此篩查出一種靈敏、快速的感染指標具有重要意義。本研究中采用流式細胞儀檢測早產兒感染取得一定成果。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇我院兒科的早產兒共72例，性別分布為：男早產兒47例，女早產兒25例，胎齡平均為(31.06±0.73)周，平均出生體重為(1683±366)g。根據診斷標準將所有新生兒分為感染組和非感染組，其中感染組早產兒34例，非感染組為38例。在感染組的34例早產兒中，包括了15例敗血癥，14例細菌性肺炎和5例壞死性小腸結腸炎。新生兒的敗血癥診斷是參照《新生兒敗血癥診療方案》2003年版，壞死性小腸結腸炎與感染性肺炎的診斷是參照《實用新生兒學》第 3 版[4]。

1.2 主要儀器和試劑 SYSMEX XT-2000i 全自動五分類血細胞分析儀(日本希森美康公司)；全自動生化分析儀日立7600-20；FACS Calibur流式細胞儀；-80 ℃低溫冰箱；全自動酶標儀(KHB ST-360)(上海科華生物有限公司) ；hs-CRP測定試劑盒(邁克生物公司)；CD11b、 CD64抗體(美國BD公司)。

表1 兩組早產兒一般資料比較 (n；%)

1.3 方法 早產兒有疑似感染時，24 h內取外周全血3 ml，0.5 ml用于血常規檢查，1 ml分離血清用于血清C-反應蛋白的檢測，0.5 ml抗凝血用于流式檢測，采用FACS Calibur流式細胞儀檢測CD11b和CD64，免疫比濁分析法測定hs-CPR，光化學染色檢測血小板，全自動五分類血細胞分析儀檢測白細胞。

2 結 果

2.1 兩組檢測指標比較 兩組在WBC和PLT無統計學差異(P>0.05);感染組CD11b、Hs-CRP和CD64顯著高于非感染組(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01，表2)。

表2 兩組早產兒檢測指標比較

注：與非感染組比較，①P<0.01

2.2 兩組CD11b、Hs-CRP、CD64三項指示物的最佳截斷值、AUC、敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值和95%置信區間 AUC曲線下面積CD11b>CD64>Hs-CRP；敏感性CD11b>CD64>Hs-CRP；特異性CD11b>CD64>Hs-CRP；陽性預測值CD11b>Hs-CRP>CD64；陰性預測值CD11b>Hs-CRP>CD64。見表3和圖1。

表3 兩組患者CD11b、Hs-CRP、CD64三項指示物的最佳截斷值、AUC、敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值和95%置信區間

圖1 CD11b、Hs-CRP和CD64的ROC曲線

3 討 論

由于孕周32后，胎兒才逐步接受母親的免疫球蛋白，因此，早產兒一般表現為免疫力低下，血清缺乏調理素，細胞吞噬功能差，表皮屏障功能比較差，患兒非常容易受到各種病原體的侵襲，導致許多不良結果的發生，比如壞死性腸炎、感染性肺炎或者敗血癥[5]。早產兒細菌早期感染無明顯特征，診斷較困難。但是感染一旦發生，病情進展相當快速，有可能在幾小時內出現休克和彌散性血管內凝血等惡性反應[6]。因此，對早產兒感染快速而準確的檢測具有非常重要的臨床意義。

本研究分別檢測了患兒的WBC、PLT、CD11b、Hs-CRP和CD64，發現WBC和PLT在感染組和對照組無差異(P>0.05)。WBC是最常用的實驗室感染指標，但據國外研究顯示對嚴重細菌感染患兒進行WBC計數，感染組和非感染組無統計學差異[7]，本研究取得一致結果，這可能是由于許多非感染性疾病都可導致白細胞的計數增高。血小板(PLT)在傷口愈合、炎性反應、血栓形成等生理過程種都扮演著重要角色，25%的新生敗血癥PLT會減少，且隨病情加深而增加減少率[8]，但本研究感染組和非感染組PLT無統計學差異，可能是由于多種疾病，如呼吸窘迫綜合征、窒息、NEC、DIC 等情況中PLT均會減少，導致PLT檢測的特異性較差。

本研究感染組CD11b、Hs-CRP和CD64顯著高于非感染組(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01)。近年來CRP得到越來越廣泛的應用。CRP是一種急性時相蛋白，識別和激活某些影響炎癥和防御機制的物質，在炎癥狀態下，CRP會發生數十倍的急劇增加，常作為細菌感染的早期指標。由于受到檢測下限的影響,常規檢測難以發現低水平的CRP變化，通過hs-CRP技術可提高CRP檢測能力提高到0.15 mg/L，因而增強了其臨床使用價值[9]，本研究發現感染組hs-CRP顯著高于對照組。目前，不同研究中對于hs-CRP檢測靈敏度各不相同，如以3 mg/L為診斷閾值時，診斷敏感性在49.3%～96%，其檢測敏感性達64.0%。新生兒感染具有顯著的低治療風險和高風險漏診特點，檢測的敏感性尤為重要，而hs-CRP對新生兒的檢測敏感性不足，因此不可將hs-CRP作為新生兒檢測的唯一指標。

在正常人群中，CD64主要在單核、巨噬細胞和樹突狀細胞表面表達，在中性粒細胞的表達很低。但是，當細胞受到感染時，CD64在中性粒細胞的表面就會產生高表達的現象。臨床上把CD64的高表達作為早產兒出現感染的指標。在一項白血病研究中，研究者認為，CD64具有良好的敏感性和特異性。本研究CD64的敏感性和特異性分別為0.84和0.90。CD11b是中性粒細胞表面含量最多的一種細胞表面抗原，接觸到細菌后即可迅速增加，被認為是細菌感染的早期檢測指標。圍生期高危感染患兒可見中性粒細胞CD11b表達增高，在對四種白細胞表面標記物CD25、CD45RO、CD11b和CD64的研究結果中顯示，對于極低出生體重兒而言，CD11b在晚發性敗血癥時同時擁有較高的敏感性和特異性[10]，在最佳臨床診斷界值時中性粒細胞CD11b敏感性和特異性分別為91%和87%。本研究發現，CD11b敏感性和特異性分別為0.90和0.98，均高于CD64，這對于早產兒感染具有最高的敏感性和特異性。

綜上所述，外周血CD11b陽性細胞對早產兒早期感染的診斷價值高于hs-CPR和CD64陽性細胞，檢測僅需要少量檢測樣品，檢測時間短。但在進一步的研究中應建立統一的臨床檢測標準，為今后推廣使用提供理論基礎。

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