老年2型糖尿病和冠心病患者高密度脂蛋白與高密度脂蛋白中血清淀粉樣蛋白A含量改變的相關性

瑪依拉·卡哈爾 哈麗達·木沙 李雅麗

(新疆醫科大學第一附屬醫院，新疆 烏魯木齊 830011)

無論是體內研究或是體外實驗均明確高密度脂蛋白(HDL)能夠對血管內皮細胞表達黏附分子形成抑制反應，因此臨床學者也將HDL稱之為“血管脂質清道夫”，具備抗動脈粥樣硬化生理特性〔1,2〕。但目前臨床醫療對HDL發生病理性因素造成HDL結構異常轉變后，其是否尚存細胞表達黏附分子的抑制效果鮮有研究。血清淀粉樣蛋白(SA)A是炎癥反應蛋白特異性指標，研究表明SAA不僅參與冠狀動脈粥樣硬化病變過程，同時也能夠對HDL形成介導干擾膽固醇的逆轉〔3,4〕。為進一步明確病理狀態下HDL與HDL中SAA相關影響，本文抽選2型糖尿病(T2DM)、冠心病(CHD)老年患者54例，行前瞻對照研究。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取新疆醫科大學第一附屬醫院2016年5月至2017年5月收治的T2DM老年患者54例，年齡61～83〔平均(71.25±2.64)〕歲。根據患者疾病分組觀察，T2DM組18例，CHD組19例，T2DM+CHD組17例，另抽選15名>60歲健康人員作為健康參考組。

1.2納入、排除標準 納入標準：①T2DM組符合《中國2型糖尿病防治指南》診斷標準〔5〕；②CHD組確診符合《冠心病的診斷與治療》〔6〕診斷標準；③動脈造影檢測>50%血管狹窄；④患者知情同意。排除標準：①合并急性冠狀動脈綜合征；②確診1型糖尿病者；③肝腎功能異常者；④研究前2 w內使用他汀藥物。

1.3基本資料調查 性別、年齡、疾病史、血糖、血脂等指標。

1.4HDL中SAA、 細胞黏粘附分子(ICAM)-1、血管細胞黏附分子(VCAM)-1 、人急性單核細胞白血病細胞株(THP)-1 細胞黏附檢測 ①脂蛋白分離提取：靜脈血離心(2 000 r/min)20 min，取血漿，再行超速離心法分離脂蛋白(提取-分離-透析-過濾)，二喹啉甲酸(BCA)法檢測脂蛋白含量。②HDL中SAA檢測：選用人SAA-ELISA試劑盒檢測SAA含量。③人腦靜脈內皮細胞(HUVEC)獲取：正常分娩產婦臍帶取材，膠原酶Ⅰ溶液(0.1%)下消化處理，收集HUVEC，行ECM傳代培養。④HDL中ICAM-1、VCAM-1表達、THP-1 細胞黏附檢測：HUVEC與各組HDL做共孵4 h，增用腫瘤壞死因子(TNF)-α進行持續4 h刺激，利用CD106-FITC 單克隆抗體與抗人CD54-PE標記，流式細胞術檢測ICAM-1、VCAM-1表達；加入Calcein-AM熒光染色劑標記THP-1細胞，檢測HDL抑制HUVEC下THP-1 細胞黏附量。

1.5統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件進行t及χ2檢驗，Logistic線性回歸分析HDL中SAA與HDL生理作用的相關性。

2 結 果

2.1基本病例資料比較 各組年齡、體重指數(BMI)、性別、總膽固醇(TC)差異無統計學意義(P>0.05)；各組高血壓、吸煙、三酰甘油(TG)、HDL、空腹血糖(FPG)、低密度脂蛋白(LDL)差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2各組HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 細胞黏附量對比 各組HDL中SAA、ICAM-1比較差異有統計學意義(P<0.05)；VCAM-1表達檢測T2DM+CHD組最高，與其他組差異有統計學意義(P<0.05)，T2DM組與CHD組VCAM-1 表達略有上升，與健康參考組對比差異無統計學意義(P>0.05)；THP-1表達檢測中T2DM+CHD組最高，T2DM組與CHD組次之，各組差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組基本病例資料比較

與T2DM組比較：1)P<0.05；與CHD組比較：2)P<0.05；與T2DM+CHD組比較：3)P<0.05，下表同

表2 各組HDL中SAA、 ICAM-1、VCAM-1 、THP-1 細胞黏附量比較

2.3HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細胞黏附相關性 多因素線性回歸方程，校正年齡、性別、糖尿病、冠心病、吸煙、血漿TC、TG 水平的影響，分析HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細胞黏附相關性分析證實，HDL中SAA與 ICAM-1表達呈正相關；與THP-1細胞黏附呈負相關；與VCAM-1表達無明顯相關性。見表3。

表3 HDL中SAA水平與 ICAM-1、VCAM-1、THP-1 細胞黏附相關性

3 討 論

研究表明，T2DM患者在動脈粥樣硬化的發生風險及硬化程度方面均較正常人員更高〔7，8〕。Kawano等〔9〕研究通過調查明確，T2DM患者α-1HDL、α-2 HDL及pre-α-1 HDL指標可發生異常減少現象，同時患者α-3 HDL指標將異常增多，且這類指標均與機體炎癥因子的活化形成明顯關聯性。研究認為，HDL因糖尿病病理性改變，造成該物質結構異常造成體內HDL正常的抗炎機制反應遭受抑制〔10〕，由此推論病理HDL變化將影響HDL的抗炎生理作用。本研究顯示T2DM患者HDL內所含 ICAM-1、THP-1等異常改變，將造成HDL抗炎效應衰減，并與CHD患者做同比分析也有著明顯差異，表明糖代謝病理改變將造成HDL抗炎效果異常弱化，甚至較CHD更為顯著，提示T2DM患者后期并發動脈粥樣硬化風險較高。

CHD可造成HDL所含的纖維蛋白原、補體C3及其他炎性蛋白異常增多，且這類HDL特有的生物結構物質將造成HDL所形成的炎性抵抗反應削弱〔11～13〕。李勉賢等〔14〕研究明確心肌梗死患者與正常人在HDL-C指標并無明顯差異，不過深入觀察HDL-P亞型，結果發現亞型太異常將造成HDL對動脈粥樣硬化的抵抗效果弱化，產生HDL逆轉反應，即反之誘導動脈粥樣硬化的進展〔15〕。Ji等〔16〕研究明確，CHD患者HDL內血紅蛋白指標可出現異常增多跡象，其中HDL與血紅蛋白所形成的緊密連接將造成HDL促炎反應。當機體處于炎癥反應機制激活狀態，其HDL內所含蓋的SAA水平也將明顯提高，結構改變的同時抗炎能力下降〔17〕。范曉方等〔18〕通過對CHD及糖尿病患者HDL多種復雜蛋白物質調查明確，僅伴有SAA指標的HDL才能形成強烈的炎癥性因子刺激效應，可隨SAA指標的增長，其HDL抗炎作用將隨之削弱，SAA與HDL抗炎呈負相關〔19〕。R?cken等〔20〕研究明確，SAA對HDL干擾機制主因為 SAA激活核因子(NF)-κB途徑，造成炎性細胞因子的快速活化，形成高表達狀態。本研究說明HDL可受病理性影響造成自身生物抗炎作用削弱。

本研究表明，無論是T2DM或是CHD，體內HDL受病理因素轉變可造成HDL原有生物反應機制受限，這一變化不僅僅受患者HDL濃度的影響，同時亦受HDL結構改變更為顯著；其中當屬T2DM患者HDL病理改變較明顯，其SAA含量提高比CHD患者更高，造成HDL抗炎效果較CHD者更差。

4 參考文獻

1李華明,歐志君,李 艷,等.高密度脂蛋白功能改變可能是動脈粥樣硬化形成的危險因素〔J〕.中國動脈硬化雜志,2015;23(12):1189-91.

2Zaid M,Fujiyoshi A,Miura K,etal.High-density lipoprotein particle concentration and subclinical atherosclerosis of the carotid arteries in Japanese men〔J〕.Atherosclerosis,2015;239(2):444-50.

3黃 冰,雷長城.血清淀粉樣蛋白A對高密度脂蛋白功能影響的研究現狀〔J〕.現代醫藥衛生,2017;33(4):538-41.

4仝其廣,張坡,胡大一.高密度脂蛋白功能與動脈粥樣硬化〔J〕.中國心血管病研究,2011;9(7):524-6.

5中華醫學會糖尿病學分會.中國2型糖尿病防治指南(2013年版)〔J〕.中華內分泌代謝雜志,2014;30(10):447-98.

6胡大一.冠心病的診斷與治療〔M〕.北京：人民軍醫出版社,2001:27-8.

7王 艷,王 晶,劉曉民.visfatin與2型糖尿病動脈粥樣硬化關系研究進展〔J〕.中華實用診斷與治療雜志,2016;30(8):732-4.

8Kataoka Y,Shao M,Wolski K,etal.Multiple risk factor intervention and progression of coronary atherosclerosis in patients with type 2 diabetes mellitus〔J〕.Eur J Prevent Cardiol,2013;20(2):209-17.

9Kawano N,Mori K,Emoto M,etal.Association of serum TRAIL levels with atherosclerosis in patients with type 2 diabetes mellitus〔J〕.Diabetes Res Clin Pract,2011;91(3):316-20.

10周恩臣,黃子成,潘 兵,等.2型糖尿病高密度脂蛋白影響血管內皮細胞代謝網絡的分子機制研究〔J〕.中國病理生理雜志,2015;31(10):1828.

11劉捷穎,嚴曉偉.糖尿病和冠心病患者高密度脂蛋白結構與其抗炎作用的相關性研究〔J〕.中國心血管雜志,2015;20(4):278-83.

12鄭樂民,潘 兵,劉東輝,等.糖尿病高密度脂蛋白的結構改變及其與動脈粥樣硬化的關系〔J〕.中國病理生理雜志,2012;28(11):2011.

13劉寶林,徐曉萍,孟 超,等.老年2型糖尿病患者高密度脂蛋白亞類與氧化應激和頸動脈粥樣硬化的相關性〔J〕.中華老年醫學雜志,2010;29(8):625-8.

14李勉賢,陳 彈,李紅霞.急性心肌梗死患者血清TC/HDL-C水平與冠脈病變程度關系研究〔J〕.中國血液流變學雜志,2013;23(2):265-7.

15傅明德.人血漿高密度脂蛋白亞類分布與動脈粥樣硬化〔J〕.中國動脈硬化雜志,2012;20(10):865-70.

16Ji X,Feng Y,Tian H,etal.The mechanism of Pproinflammatory HDL generation in sickle cell disease is linked to cell-free hemoglobin via haptoglobin〔J〕.PLoS One,2016;11(10):e0164264.

17曾海蓮,劉發河,鄭小江，等.淺析冠心病患者血漿和HDL標本中apoA-I及SAA的組分變化〔J〕.醫學檢驗與臨床,2016;27(5):73-4.

18范曉方,李雪松,張 鈺,等.新診斷2型糖尿病合并血脂異常患者血清淀粉樣蛋白A和C反應蛋白的變化〔J〕.臨床內科雜志,2010;27(5):320-2.

19郭世喜.血清淀粉樣蛋白A與2型糖尿病腎病患者頸動脈內膜中層厚度的相關性研究〔J〕.國際泌尿系統雜志,2014;34(5):680-3.

20R?cken C,Kisilevsky R.Binding and endocytosis of murine high density lipoprotein from healthy(HDL) and inflamed donors(HDLSAA) by murine macrophages in vitro.A light and electronmicroscopic investigation〔J〕.Amyloid-J Protein Folding Disord,2009;4(4):259-73.