紫外分光光度法測(cè)定化妝品中煙酰胺的含量

(廣東省科技職業(yè)技術(shù)學(xué)校 化工教研室，廣州 510650)

煙酰胺(nicotinamide)，化學(xué)名為3-吡啶甲酰胺，又稱(chēng)維生素B3，是一種水溶性維生素，其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

圖1 煙酰胺結(jié)構(gòu)式

煙酰胺的作用近年來(lái)逐漸被學(xué)界所知，在化妝品行業(yè)中應(yīng)用廣泛，是一種多功能活性成分，其功效已在許多專(zhuān)業(yè)期刊中得到證實(shí)。研究表明[1]，煙酰胺可以有效地減少可消除皮膚因老化或外界侵害造成的皺紋、起皮、毛孔變大等，使得皮膚外觀(guān)更加光滑和均勻，具有美白、抗衰老、改善皮膚屏障功能、保濕和治療痤瘡六大護(hù)膚功效。市場(chǎng)上有多個(gè)品牌的化妝品都標(biāo)注含有煙酰胺，然而這些產(chǎn)品中是否真的添加了煙酰胺以及添加量都不得而知。因此針對(duì)煙酰胺的檢測(cè)研究有利于保護(hù)廣大消費(fèi)者的權(quán)益。同時(shí)，可以規(guī)范企業(yè)的化妝品成分標(biāo)注行為。

目前，煙酰胺的檢測(cè)主要以高效液相色譜法和毛細(xì)管電泳法為主，而紫外分光光度法尚沒(méi)有相關(guān)報(bào)道[2]。本實(shí)驗(yàn)建立了一種測(cè)定化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法。該方法前處理簡(jiǎn)單、快速、定量準(zhǔn)確。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

(1)UV-1800PC型紫外分光光度計(jì)，上海美普達(dá)儀器有限公司；SC-10型高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速10000r/min以上，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；NH-1001型超聲水浴，廣州華南超聲設(shè)備有限公司；BSA124型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；JJ600型電子天平，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠(chǎng)；100μL～1000μL可調(diào)式移液器，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器(北京)有限公司。

(2)所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為分析實(shí)驗(yàn)室用二級(jí)水。

(3)煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)物0.3000g至50mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度成標(biāo)準(zhǔn)貯備液(3000μg/mL)。再吸取10.00mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液至100mL容量瓶中，用水定容至刻度作為標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(300.0μg/mL)。

1.2 樣品的提取溶劑的選擇

據(jù)報(bào)道煙酰胺溶于水和醇，不溶于二氯甲烷。而二氯甲烷可以除去化妝品中脂溶性成分以及表面活性劑成分[3]。因此選擇了較為簡(jiǎn)便的水/二氯甲烷體系，比例為1∶1。

1.3 樣品的前處理方法

稱(chēng)取樣品約0.10g于10mL具塞離心管中，加入5mL水和5mL二氯甲烷[4]，強(qiáng)烈震蕩后，超聲提取15min，強(qiáng)烈震蕩后于8000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，取上清液檢測(cè)。

1.4 煙酰胺檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

吸取8.00mL的煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。用紫外分光光度計(jì)的光譜掃描獲得的煙酰胺在200nm至350nm間的特征吸收曲線(xiàn)，見(jiàn)圖2。從吸收曲線(xiàn)圖可看出煙酰胺在214nm和262nm處有最大吸收峰，262nm的紫外吸收有相對(duì)的特異性。考慮到在該波長(zhǎng)下檢測(cè)，可以避免二氯甲烷的紫外吸收干擾以及部分樣品雜質(zhì)對(duì)紫外吸收的干擾，有利于目標(biāo)成分的準(zhǔn)確定量，因此確定檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm。

圖2 煙酰胺的吸收曲線(xiàn)圖

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線(xiàn)性與檢出限

分別吸取0、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL的煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。該系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度分別為0、3.000、6.000、12.000、18.000和30.000μg/mL。按紫外分光光度法測(cè)定其吸光度，數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)數(shù)據(jù)點(diǎn)

以吸光度A對(duì)質(zhì)量濃度c(μg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，見(jiàn)圖3。煙酰胺濃度在0.000至30.000μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸方程為A=0.024723*c-0.00107，相關(guān)系數(shù)R=0.99998。

圖3 煙酰胺的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

在相同的測(cè)試條件下，以3、10倍空白樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差0.001342(n=6)除以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率0.02473，計(jì)算出煙酰胺的檢出濃度為0.16μg/mL，最低定量濃度為0.54μg/mL。

2.2 方法的精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

取不同煙酰胺含量的膏霜樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長(zhǎng)262nm下測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定6次，計(jì)算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在1.41%～5.89%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測(cè)定6次，計(jì)算得RSD在3.56%～4.62%。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 膏霜樣品中煙酰胺測(cè)定的精密度和重復(fù)性(n=6)

取不同煙酰胺含量的水劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長(zhǎng)262nm下測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定6次，計(jì)算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在1.91%～3.35%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測(cè)定6次，計(jì)算得RSD在1.45%～3.87%。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 水劑樣品中煙酰胺測(cè)定的精密度和重復(fù)性(n=6)

取不同煙酰胺含量的乳劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長(zhǎng)262nm下測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定6次，計(jì)算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在2.56%～4.29%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測(cè)定6次，計(jì)算得RSD在2.99%～4.71%。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 乳劑樣品中煙酰胺測(cè)定的精密度和重復(fù)性(n=6)

2.3 方法的加標(biāo)回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確移取0.00、1.00、4.00、8.00mL煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(300.0μg/mL)置于100mL容量瓶中，再分別移取1.00mL各類(lèi)樣品加入中，用水稀釋至刻度。得高、中、低水平下的樣品加標(biāo)回收率，如表5所示，回收率在100.20%～108.78%之間。

表5 煙酰胺加標(biāo)回收率

2.4 方法的試樣穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取同一樣品提取液，于室溫放置0、30、60、90、120min測(cè)定吸光度，其吸光度的RSD為1.09%～2.07%，表明樣品在2h內(nèi)穩(wěn)定，數(shù)據(jù)見(jiàn)表6。

表6 煙酰胺2h內(nèi)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

2.5 與高效液相色譜法比較(GB/T 29664-2013)

根據(jù)GB/T 29664-2013化妝品中維生素B3(煙酸、煙酰胺)的測(cè)定中的液相色譜分析條件進(jìn)行HPLC分析。樣品中煙酰胺的含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)外標(biāo)法來(lái)確定，然后計(jì)算煙酰胺含量與紫外分光光度法進(jìn)行比較。HPLC測(cè)定結(jié)果與紫外分光光度法比較見(jiàn)表7。

表7 HPLC法與紫外分光光度法測(cè)定結(jié)果比較

由表7可知，紫外分光光度法測(cè)定樣品中煙酰胺含量比HPLC法略偏低，其相對(duì)于HPLC法的偏差沒(méi)有超過(guò)5%，基本上可以滿(mǎn)足樣品中煙酰胺含量測(cè)定的需要。

2.6 實(shí)際樣品分析

對(duì)市售主要含有煙酰胺的6種不同類(lèi)型的化妝品進(jìn)行了測(cè)定，它們的煙酰胺質(zhì)量比含量在4.70mg～51.27mg/g之間。

3 結(jié)論

利用煙酰胺在紫外光區(qū)262nm處有明顯的吸收，建立了化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法，在0至30.000μg/mL范圍內(nèi)，煙酰胺質(zhì)量濃度與紫外吸光度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸方程為A=0.02473*C-0.00107，相關(guān)系數(shù)R=0.99998，采用此法對(duì)化妝品中煙酰胺的含量是可行的。該方法簡(jiǎn)單易行，靈敏度較高，結(jié)果準(zhǔn)確，可快速測(cè)定化妝品中煙酰胺的含量，結(jié)果令人滿(mǎn)意。

[1] 彭曉鳳，孫宏麗，吳一微.美白化妝品中煙酰胺的分離分析方法研究進(jìn)展[J].湖北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)：2017，37(1)：51-55.

[2] 王宏斌，蘇曉春.煙酰胺在化妝品中的應(yīng)用[J].中國(guó)化妝品：行業(yè)版，2003，(9)：65-68.

[3] 毛希琴.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的煙酸和煙酰胺[J].日用化學(xué)工業(yè)，2012，42(6)：470-472.

[4] 林毅侃，顧宇翔，王承平等.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中煙酰胺的含量[J].香精香料化妝品，2015(3)：29-32.