2018年吉林省珍稀食用菌栽培技術(shù)培訓(xùn)班 大球蓋菇專題培訓(xùn)教程（五）大球蓋菇液體菌種初步探究

于延申 任梓銘 王 月 王隆洋

（吉林省蔬菜花卉科學(xué)研究院 130033）

大球蓋菇（Strophariarugosoannulata）別稱酒紅球蓋菇、皺環(huán)球蓋菇、赤松茸，屬擔(dān)子菌門（Basidomycota）層菌綱（Hymenomycetes）傘菌目（Agaricales）球蓋菇科（Strophariaceae）球蓋菇屬（Stropharia），是國際菇類交易市場上十大菇類之一，也是聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）向發(fā)展中國家推薦栽培的特色食用菌之一[1]。大球蓋菇鮮菇色澤艷麗，肉質(zhì)脆嫩滑爽，干品氣味清香，營養(yǎng)豐富，具有很高的食用價值和藥用價值，頗受國內(nèi)外消費者歡迎，具有非常廣闊的發(fā)展前景。大球蓋菇的栽培管理較為粗放，對其冬閑田露地栽培［2］、大棚反季節(jié)栽培、畦式栽培、層架式栽培、地坑式栽培等多種栽培模式進行深入研究，對利用稻草、玉米秸稈、菌渣等不同栽培料栽培大球蓋菇也進行多樣化比較，取得了豐富的研究成果，但關(guān)于大球蓋菇液體培養(yǎng)基配方的篩選以及如何對菌種進行準(zhǔn)確鑒定還未見報道。

1 食用菌固體菌種的研究

固體菌種為使用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種。就我國目前的食用菌生產(chǎn)使用情況來看，大部分商品菌種都是固體菌種，例如以試管為培養(yǎng)容器的一級種和以聚丙烯塑料袋、聚乙烯塑料袋或菌種瓶培養(yǎng)的原種或栽培種，都是固體菌種。因各基質(zhì)主料的不同，固體菌種又可分木屑種，谷粒種，枝條種，糞草種，草料種，木塞種等。固體菌種有以下特點：生產(chǎn)固體菌種的成本較低，培養(yǎng)技術(shù)也較簡單，抗雜能力也強，固體菌種對生產(chǎn)的設(shè)備精密程度要求也較低，但發(fā)菌的菌齡較長，大多數(shù)品種菌齡要在30天以上，菌齡的一致性也相對較差；固體菌種在國內(nèi)外的食用菌生產(chǎn)中一直占據(jù)著主流位置，一些歐美國家至今仍選用固體菌種栽培雙孢蘑菇，距今已有上百年的工業(yè)化使用歷史[2]。

2 食用菌液體菌種的研究

液體菌種是由液體發(fā)酵技術(shù)演變而來的技術(shù)。20世紀(jì)40年代食用菌的發(fā)酵技術(shù)隨著抗生素產(chǎn)業(yè)的興起而產(chǎn)生的。美國在1947年第一次利用液體發(fā)酵技術(shù)將蘑菇菌絲體培養(yǎng)成功，并篩選出適宜在液體環(huán)境下培養(yǎng)的菌株。我國對液體發(fā)酵技術(shù)的研究也較早，自1958年我國就開始了對液體發(fā)酵技術(shù)的研究，到60世紀(jì)末期，我國已經(jīng)掌握了利用液體發(fā)酵技術(shù)大批量生產(chǎn)食用菌[3]。

利用食用菌的液體發(fā)酵技術(shù)可得到兩種產(chǎn)物，一種是液體菌種，作為大型真菌栽培菌種投入生產(chǎn)；另一種是菌絲體及其自身代謝產(chǎn)物，起到代替子實體的作用，從而獲得高于子實體自身的生理活性產(chǎn)物或子實體無法產(chǎn)生的活性產(chǎn)物，或者是至今人們?nèi)詿o法進行人工栽培的大型真菌，但通過菌絲體也可獲得目標(biāo)活性產(chǎn)物；由于在食用菌工廠化生產(chǎn)中液體菌種具有單位接種量成本低，生長周期短，菌齡整齊[2]一致，出菇整齊，便于管理等較多優(yōu)勢，越來越多的專家學(xué)者參與液體菌種培養(yǎng)等相關(guān)研究。目前國內(nèi)只有少數(shù)實力較強的企業(yè)能實現(xiàn)利用液體菌種進行工廠化生產(chǎn)，主要原因是對生產(chǎn)的環(huán)境潔凈程度及其生產(chǎn)設(shè)備的精密程度要求較高，且需要成套的專業(yè)化設(shè)備儀器和高素質(zhì)的人員操作，投入的固定成本也高，因液體菌種難保藏，不宜運輸?shù)奶攸c，完成培養(yǎng)后的菌種應(yīng)立即使用，以免影響到菌種價值，分散的農(nóng)業(yè)式生產(chǎn)，既無法保障儀器設(shè)備的精密性，也無法達到環(huán)境的潔凈程度，此等諸多因素限制了液體菌種的應(yīng)用。因此液體菌種多用于工業(yè)化的生產(chǎn)中。

傳統(tǒng)的固體菌種培養(yǎng)周期長，生長緩慢，菌絲容易老化，從而大球蓋菇的大規(guī)模生產(chǎn)受到一定的限制。液體菌種具有生產(chǎn)周期短、接種方便、菌絲分散性好、萌發(fā)點多、生長快、菌種純度高等優(yōu)點[4]，是各類食用菌規(guī)模化和機械化生產(chǎn)的發(fā)展趨勢。筆者針對大球蓋菇液體菌種的培養(yǎng)條件進行了初步研究，旨在為大球蓋菇液體菌種的推廣和應(yīng)用提供理論依據(jù)。

3 材料與方法

3.1 材料

3.1.1 供試菌株

大球蓋菇菌株AH01，供試菌株由吉林省蔬菜花卉科學(xué)研究院提供。

3.1.2 PDA培養(yǎng)基

其配方為：馬鈴薯（去皮）200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，蒸餾水1000mL，pH自然。3.1.3 液體培養(yǎng)基

其配方為：馬鈴薯（去皮）300g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，KH2PO42g，MgSO41g，VB12.5mg，水 1000mL，pH 自然。

3.2 方法

3.2.1 液體菌種制作

將保存的大球蓋菇菌種進行活化，接種于PDA試管培養(yǎng)基中，放于25℃恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。待菌絲長滿斜面后，取3塊0.2cm2基內(nèi)菌絲接種于裝有100mL的液體培養(yǎng)基的250mL三角瓶種，在25℃的恒溫培養(yǎng)中靜止24小時后，置于25℃搖床中進行培養(yǎng)。

3.2.2 液體菌種培養(yǎng)條件試驗

設(shè)置不同的轉(zhuǎn)速，測定不同培養(yǎng)條件對菌球大小，菌球數(shù)量的影響。

3.2.3 菌絲生物量的測定。

培養(yǎng)結(jié)束后，將菌液過濾，菌絲體用蒸餾水充分洗滌，置于80℃干燥箱中烘干至恒重，用電子天平稱重。3.2.4 菌球數(shù)量的測定。

取1mL培養(yǎng)液置于培養(yǎng)皿中加適量的水稀釋后，在培養(yǎng)皿下面放一張黑白相間（1cm2）的格子紙，然后進行計數(shù)，重復(fù)3次。

3.2.5 菌球直徑的測定。

隨機取培養(yǎng)液中20個菌絲球，在培養(yǎng)皿中排成一列，使用游標(biāo)卡尺測其總長度，求平均值，每次處理重復(fù)3次。

4 結(jié)果與分析

4.1 不同轉(zhuǎn)速對菌絲生長的影響

將搖瓶轉(zhuǎn)速分別設(shè)置為120r/min、150r/min和180r/min，培養(yǎng)后，測定其對菌絲生長的影響。由表1可知，隨著轉(zhuǎn)速的增大，通氣量增大，菌絲體生物量也隨之增加，轉(zhuǎn)速達180r/min時菌絲體生物量最高，但轉(zhuǎn)速進一步加大時，生物量反而下降，菌球直徑變小。

表1 搖床轉(zhuǎn)速對菌絲生長的影響

在轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)和150轉(zhuǎn)時，菌球體積比較大（如圖1和圖2所示），無法統(tǒng)計單位面積菌球個數(shù)。從轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)開始統(tǒng)計。

圖1

圖2

4.2 不同培養(yǎng)時間對菌絲生長的影響

按上述的最佳條件進行發(fā)酵培養(yǎng)，大球蓋菇培養(yǎng)48h后菌絲開始迅速生長，到第8d達到最高峰，隨后即開始下降，三角瓶壁開始出現(xiàn)老菌皮。

5 結(jié)論

對于大球蓋菇液體菌種來講，菌絲生物量越大，則菌種的品質(zhì)越好；菌球數(shù)量越多，則菌種的流動性越強，接種后越容易分散，發(fā)菌點也就越多。該試驗對比了不同轉(zhuǎn)速和不同培養(yǎng)時間中大球蓋菇液體菌種的各項指標(biāo)，結(jié)果表明，在180r/min，培養(yǎng)8天的條件下大球蓋菇液體菌種質(zhì)量最好。筆者還發(fā)現(xiàn)，大球蓋菇液體菌種有一種天然的果香氣味，有待后續(xù)繼續(xù)研究。

6 展望

食用菌產(chǎn)業(yè)作為當(dāng)今各國的朝陽產(chǎn)業(yè)，正在蓬勃發(fā)展。食用菌被聯(lián)合國糧農(nóng)組織列為繼“動物”、“植物”之后人類的“第三大食物來源”，該產(chǎn)業(yè)在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)結(jié)構(gòu)中處于舉足輕重的地位。隨著我國經(jīng)濟的不斷發(fā)展，食品安全問題也日益突出，對兼具營養(yǎng)性和功能性價值的食用菌來說，其需求量必將與日俱增，為食用菌產(chǎn)業(yè)提供了巨大的發(fā)展空間。要解決食用菌的產(chǎn)量和質(zhì)量問題，就必須對食用菌的栽培技術(shù)進行改進和創(chuàng)新，走以規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化為原則的新路子。在推進食用菌產(chǎn)業(yè)工廠化的進程當(dāng)中，液體菌種代替固體菌種并廣泛應(yīng)用已經(jīng)成為必然趨勢，也只有通過大范圍的使用液體菌種，才能實現(xiàn)我國食用菌產(chǎn)業(yè)從散戶生產(chǎn)到規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)質(zhì)的飛躍。液體菌種是食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的必然，擁有廣闊的生產(chǎn)應(yīng)用前景。

[1] 黃年來.大球蓋菇的分類地位和特征特性.食用菌,1995（06）：11.

[2] 李黎.玉木耳繩索菌種培養(yǎng)條件與生產(chǎn)工藝優(yōu)化研究.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017：53.

[3] 李賀，王相剛，李艷芳，劉志剛.食用菌液體菌種生產(chǎn)研究進展.園藝與種苗，2012（06）:123-125.

[4] 任海霞，楊鵬，曲玲，任鵬飛，李瑾，宮志遠(yuǎn).草菇液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化研究.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（01）：58-60.