正交設計試驗優(yōu)選綠茶提取物脂質體的制備

張志勤 王 棟 韓國柱

（1 大連市皮膚病醫(yī)院藥劑科，遼寧 大連 116021；2 大連醫(yī)科大學藥理教研室，遼寧 大連 116044）

綠茶提取物主要成分為茶多酚，美國FDA已于2006年批準自綠茶中提取的茶多酚制成軟膏用于臨床治療人類乳頭瘤病毒所致尖銳濕疣，這是美國FDA第一個批準的現有的植物藥制劑，在世界引起很大反響，因而綠茶提取物具有十分廣泛的應用前景和研究價值[1-4]。

應用正交設計優(yōu)選綠茶提取物納米脂質體最佳處方和工藝，采用先進的儀器分析技術對其建立定性、定量方法，保證制劑質量可控，從而研發(fā)出綠茶提取物的新型給藥系統(tǒng)—納米脂質體，以期提高綠茶提取物療效，降低其不良反應。

1 儀器與試藥

綠茶提取物——大連市皮膚病醫(yī)院制劑室提供；EGCG等對照品（純度＞98%）——上海友思生物技術有限公司；Utimate 3000高效液相色譜儀——美國戴安公司；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計——北京譜析通用儀器有限公司。

2 方法和結果

2.1 綠茶提取物的制備：取綠茶500 g，用無水乙醇1000 mL浸泡2 d不時攪拌，濾過，用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)，而后將蒸發(fā)殘留液置于圓底瓶皿中，在水浴鍋上蒸發(fā)至干，放入90 ℃恒溫干燥箱中干燥12 h，置研缽中研磨至細粉狀，即得。

2.2 綠茶提取物納米脂質體的制備：卵磷脂和膽固醇各100 mg，加入氯仿30 mL，在旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)，瓶內壁形成一層均勻的膜脂，加入乙醚9 mL溶解后，加入含有綠茶提取物的磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）15 mL，然后在超聲儀上進行超聲直至形成穩(wěn)定的水/油（W/O）型乳劑[5]。

2.3 綠茶提取物納米脂質體包封率的測定：精密吸取1mL的綠茶提取物脂質體，離心30 min，取上清液，定容至50mL，離心后進液相，代入回歸方程，得未包入脂質體中藥物量（P游離）。精密吸取1mL的綠茶提取物脂質體于離心試管中，同法制得，得總藥物量（P總）。包封率（%）=（P總-P游離）/P總×100。

2.4 正交設計優(yōu)選綠茶提取物納米脂質體處方：通過L9（34）正交設計優(yōu)選綠茶提取物脂質體的最佳制備工藝，主要對四個關鍵性因素考察，實驗結果見表1、表2。

由表2實驗結果可知綠茶提取物脂質體處方優(yōu)選的最佳方案是A1B1C2D2，即膽固醇：卵磷脂比例1∶1，綠茶提取物濃度10 mg/mL，磷酸鹽緩沖液pH 7.0，超聲時間20 min。

2.5 HPLC法測定綠茶提取物脂質體中活性成分的含量方法學的建立：建立一種反相高效液相色譜法以測定綠茶提取物脂質體中有效成分的含量。采用C18反相色譜柱，以乙腈-0.1%枸櫞酸溶液（15∶85）為流動相，在紫外最大吸收波長處檢測，峰面積內標法定量，見圖1。

3 討 論

3.1 研制綠茶提取物的一種新型給藥系統(tǒng)綠茶提取物脂質體，通過正交設計優(yōu)選比較不同因素對脂質體的影響，確定最佳制備工藝，脂質體作為皮膚局部給藥的載體能夠降低藥物的不良反應，具靶向性和長效性，為臨床治療皮膚科疾病提供一種新的高效低毒的外用劑型納米脂質體乳膏劑。

表1 綠茶提取物脂質體的因素水平

表2 綠茶提取物脂質體的實驗計劃表

圖1 A：EGC；B：EGCG；C：ECG

3.2 研究綠茶提取物納米脂質體的HPLC全新含量測定方法在國內外文獻中未見相關報道。首次運用HPLC法對綠茶提取物納米脂質體中主要成分EGCG進行定性、定量。

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[5] 曠英姿,馬全紅,郝小楨,等.茶多酚脂質體的制備研究[J].中國生化藥物雜志,2006,17(1)：28-31.