化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的價值分析

辛曉陽　徐立群　潘峰

[摘要] 目的 比較化學發光免疫分析技術（CLIA）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）在乙肝病毒血清學檢驗中的應用價值。 方法 選取2014年1月～2017年6月間我院收治的80例疑似乙型肝炎患者，采用CLIA法、ELISA法對乙肝病毒血清學指標進行檢測，以實時熒光定量PCR檢驗結果作為參照，分析CLIA法、ELISA法對乙肝的診斷結果。 結果 ELISA法對乙肝的診斷靈敏度、特異度、準確性分別為91.84%、93.55%、92.50%，CLIA法分別為93.88%、96.77%、95.00%，二者比較均無統計學差異（P均>0.05）。CLIA法、ELISA法對乙肝的診斷結果與實時熒光定量PCR之間具有良好一致性，Kappa均>0.7。CLIA法對HBsAg、HBeAg、HBeAb的陽性檢出率高于ELISA法（P<0.05），而在HBsAb、HBcAb陽性檢出率比較無統計學差異（P>0.05）。 結論 CLIA法、ELISA法對乙型肝炎的診斷效果均較好，而在乙肝病毒血清學標志物檢驗中，CLIA法的檢驗準確性高于ELISA法。

[關鍵詞] 乙型肝炎；乙肝病毒；血清學檢驗；化學發光免疫分析法；酶聯免疫吸附試驗

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）10-0127-04

Analysis on the value of chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunosorbent assay in serological detection of hepatitis B virus

XIN Xiaoyang PAN Feng XU Liqun CHEN Zhaojun

Clinical Laboratory， The Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University， Hangzhou 310015， China

[Abstract] Objective To compare the application value of chemiluminescence immunoassay（CLIA） and enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） in serological testing of hepatitis B virus. Methods From January 2014 to June 2017， 80 patients with suspected hepatitis B who were admitted to our hospital were selected. CLIA method and ELISA method were used to determine the serological indices of hepatitis B virus. Real-time fluorescence quantitative PCR test results were used as the reference. The diagnosis results of hepatitis B by CLIA method and ELISA method were analyzed. Results The diagnostic sensitivity， specificity and accuracy of ELISA for hepatitis B were 91.84%， 93.55% and 92.50% respectively， and those of CLIA were 93.88%， 96.77%， 95.00% respectively. There was no statistically significant difference between the two methods（P>0.05 for all）. CLIA method and ELISA method for the diagnostic results of hepatitis B were well consistent with real-time fluorescence quantitative PCR（Kappa>0.7 for all）. The positive detection rate of HBsAg， HBeAg and HBeAb by CLIA was higher than that of ELISA（P<0.05）， and the difference of positive detection rate of HBsAb and HBcAb was not statistically significant（P>0.05）. Conclusion CLIA method and ELISA method are favorable for the diagnosis of hepatitis B. In the hepatitis B virus serological marker test， the test accuracy of CLIA is higher than that of ELISA.

[Key words] Hepatitis B；Hepatitis B virus；Serological testing；Chemiluminescence immunoassay（CLIA）；Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）乙型肝炎是一種臨床上常見的病毒性肝炎，主要由乙肝病毒感染所致，其傳染性較強。乙肝病毒是導致乙型肝炎的主要病毒，據統計，國內攜帶乙肝病毒的人數達到9300萬人，乙肝病毒在人體中長期潛伏，部分乙肝病毒攜帶者因體內乙肝病毒被激活而患上乙型肝炎，可能會發展為肝硬化、肝衰竭、肝癌等，對患者的生命安全構成威脅[1-3]。臨床上主張對乙型肝炎進行積極預防和治療，有研究報道指出，人體免疫系統會對乙肝病毒產生特異性免疫反應，對乙肝病毒DNA、乙肝病毒血清學指標進行檢測是乙型肝炎診斷和預后評估的重要依據[4，5]。化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗是兩種常見的乙肝病毒檢驗方法，但關于這兩種檢驗方法對乙型肝炎病毒血清學標志物的檢驗價值一直存在爭議，未能達成共識。本研究為比較化學發光免疫分析技術和酶聯免疫吸附試驗在乙肝病毒血清學檢驗中的應用價值，特針對2014年1月～2017年6月間我院收治的80例疑似乙型肝炎患者進行前瞻性研究，分別對其血清樣本進行化學發光免疫分析檢驗、酶聯免疫吸附試驗。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2014年1月～2017年6月我院收治的80例疑似乙型肝炎患者進行前瞻性研究，所有患者均因全身乏力、下肢水腫、食欲不振、皮膚黃染、肝區疼痛等癥狀就診，且均具有與乙型肝炎患者接觸史，其中，男52例，女28例，年齡23～67歲，平均（43.84±14.23）歲。研究前所有患者均對研究方法和目的知情了解，自愿配合檢查。

1.2 方法

所有患者均接受采血，采用化學發光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）、酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）這兩種檢驗方法對乙肝病毒血清學指標進行檢測。于患者清晨空腹狀態下，采集其肘部靜脈血液5 mL作為檢驗樣本，在4℃環境下對其進行離心處理，每分鐘轉速為3000 r，持續離心10 min后，取上層清液待檢。

先進行ELISA檢驗，將ELISA試劑與微孔反應條在室溫下放置30 min，將待測血清樣本加入至微孔反應條中，采用封片對其進行封鎖處理，放置于37℃水浴箱中持續60 min后取出，將微孔反應條中液體去除，反復洗滌5次，再在反應條中加入試劑，封鎖，放置于37℃水浴箱中持續30 min后取出，加入終止液。如所測得的血清值≥臨界值（2×標準差+陰性樣品平均A值），即可判定檢測結果為陽性。

再進行CLIA檢驗，將待測血清樣本加入至已包被HBV核心抗原的聚苯乙烯試管中，采用100 μL辣根過氧化酶進行標記，在37℃環境下持續放置2 h，再采用PBS緩沖液反復沖洗3次，每次持續沖洗3 min，再加入100 μL氫氧化鈉（0.1 mol/L）、100 μL魯米諾（30 mol/L），在室溫下靜置10 min，再加入100 μL濃度為3%的過氧化氫，采用發光儀對其發光強度進行測定。如HBsAg、HBeAg COI≥1.0，即可判斷為陽性。

再取血清樣本進行實時熒光定量PCR檢驗，采用Roche LC480實時熒光分析儀進行測定，試劑為配套試劑，按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 觀察指標

以實時熒光定量PCR檢驗結果作為參照，比較這兩種檢驗方法對乙型肝炎的診斷靈敏度[真陽性/（真陽性+假陰性）×100%]、特異度[真陰性/（真陰性+假陽性）×100%]、準確性[（真陽性+真陰性）/總例數×100%]。比較兩種檢驗方法對各項乙肝病毒血清學標志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）的陽性檢出率，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的正常參考值上限分別為0.2 ng/mL、10.0 mU/mL、0.05 NCU/mL、2.0 NCU/mL、1.5 NCU/mL，測出結果超出相應指標參考值上限即為陽性，反之則為陰性。

1.4 統計學方法

應用SPSS19.0軟件處理本研究數據，計數資料比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義；采用McNemar檢驗（配對卡方檢驗）分析診斷結果，一致性系數計算采取Kappa檢驗，Kappa<0.4即一致性較差，Kappa在0.4～0.7之間即一致性中等，Kappa>0.7即一致性良好。

2 結果

2.1 兩種檢驗方法對乙型肝炎的診斷結果分析

經實時熒光定量PCR檢驗后，80例疑似乙型肝炎患者中共有49例診斷為乙型肝炎，31例患者為HBV感染但HBV-DNA顯示為陰性者。酶聯免疫吸附試驗對乙型肝炎的診斷靈敏度、特異度、準確性分別為91.84%、93.55%、92.50%，化學發光免疫分析法的診斷靈敏度、特異度、準確性分別為93.88%、96.77%、95.00%，二者比較均無統計學差異（P均>0.05），見表1、表2。

2.2兩種檢驗方法與實時熒光定量PCR診斷結果間的一致性分析

化學發光免疫分析法、酶聯免疫吸附試驗對乙型肝炎的診斷結果與實時熒光定量PCR檢驗結果之間均具有良好的一致性（Kappa分別為0.735、0.718）。

2.3 兩種檢驗方法對乙肝病毒血清學指標的陽性檢出率比較

化學發光免疫分析法對乙肝病毒血清學指標中HBsAg、HBeAg、HBeAb的陽性檢出率高于酶聯免疫吸附試驗（P<0.05），而其對HBsAb、HBcAb的陽性檢出率與酶聯免疫吸附試驗比較無統計學差異（P>0.05），見表3。

3討論

乙型肝炎是一種較為常見的病毒性肝炎，發病率較高，病情遷延不愈，具有反復發作的特點[6，7]。臨床上關于乙型肝炎的防治工作原則為“防治結合，以防為主”，乙型肝炎主要由乙肝病毒感染所致，而乙肝病毒在人體內長期潛伏，病毒被激活后才發展為乙型肝炎，在乙型肝炎的起病階段，往往不具有明顯的癥狀，容易導致誤診和漏診的發生，但由于乙型肝炎存在發展為肝硬化、肝癌的風險，對患者的生命安全構成一定的威脅[8-10]，因此，還應對乙型肝炎進行早期診斷，以便于給予其及時治療。

乙肝病毒血清學檢驗是診斷乙型肝炎的主要手段之一，隨著生物學技術的不斷發展，臨床上逐漸采用ELISA、CLIA這兩種檢驗方法對乙肝病毒血清學標志進行檢驗，但關于二者價值高低尚存在爭議[11，12]。ELISA主要是針對包被于固相板孔中的待測抗原和抗體進行檢測，即采用酶標記抗體，將已知抗體吸附于固相載體表面，根據酶在底物的顯色情況來判斷抗體情況，其操作簡便，但由于該檢驗方法是采用間接法測定，其檢驗結果有可能存在誤差[13-15]。而化學發光免疫分析法是具有高靈敏度的化學發光測定技術、具有高特異性的免疫反應技術相結合發展而來的一種新型免疫檢測技術，其檢驗時的抗體通常不會受到突變抗體的影響，標記物具有豐富的來源，可對各種逃逸的變異株進行有效識別，減輕人為因素對檢驗結果的干擾，具有良好的檢驗準確性[16-19]。