人參皂苷Rg3對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖和侵襲的影響

郭 琪，袁明慧，郭宇飛*

（1．河南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2．河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450002）

乳腺癌目前在臨床上的發(fā)病呈逐漸上升并且傾向于年輕化的趨勢(shì)，由于死亡率高、患者的遠(yuǎn)期預(yù)后差等，可嚴(yán)重影響女性生活質(zhì)量和身心健康[1]。最長(zhǎng)用的治療方法為新輔助化療法，但各種化療藥物均具有較強(qiáng)的毒副作用，給病人帶來(lái)巨大的痛苦[2]。因此，尋求新的綠色天然抗癌藥物就顯得尤為重要，相關(guān)研究表明[3]，提取自人參的皂苷Rg3，具有增效解毒、提高免疫力的作用，并且對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等有一定的抑制作用。因此據(jù)此本文通過(guò)具體實(shí)驗(yàn)方法觀察人參皂苷Rg3對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞增殖和侵襲的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞由北京中醫(yī)藥大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室提供，培養(yǎng)于RPMI-1640完全培養(yǎng)液（10%胎牛血清，青霉素-鏈霉素雙抗溶液）中，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。人參皂苷Rg3（98.5%）由吉林亞泰制藥有限公司提供，用完全培養(yǎng)基配制成600 μg·mL-1的儲(chǔ)存液，保存于-20℃冰箱中備用。

1.2 MTT 法分析細(xì)胞增殖

首先使用胰蛋白酶消化對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的貼壁細(xì)胞，用含10%胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）的RPMI-1640（HyClone）培養(yǎng)液配制成細(xì)胞懸液（濃度為1×105個(gè)·mL-1），接種于96孔板中，每孔100 μL；實(shí)驗(yàn)組各加入不同濃度的人參皂苷Rg3（50、100、200、400、600 μg·mL-1），對(duì)照組為DMSO溶劑；24 h和48 h后每孔分別加入5 mg·mL-1MTT溶液（Sigma）20 μL，最終通過(guò)酶標(biāo)儀于570 nm處測(cè)定每孔吸光度（OD）值，細(xì)胞增殖抑制率（%）計(jì)算公式為：（對(duì)照組OD值-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。

1.3 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞的侵襲能力

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，使用不同濃度的人參皂苷Rg3（50、100、200μg·ml-1）作用48 h后，將細(xì)胞進(jìn)行消化、分離、離心沉淀、酒精固定，經(jīng)過(guò)Annexin-V和碘化丙啶（PI）雙染色法進(jìn)行染色后在Elite ESP型流式細(xì)胞儀（美國(guó)Coulter公司）分析細(xì)胞周期分布情況和細(xì)胞凋亡率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，組間比較使用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

細(xì)胞增殖影響分析中研究數(shù)據(jù)顯示隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)以及藥物濃度的增加，人參皂苷Rg3對(duì)人乳腺癌MDAMB-231細(xì)胞的增殖相關(guān)抑制作用亦逐漸增強(qiáng)，兩者間呈正相關(guān)關(guān)系（表1）；MTT法分析中亦顯示50、100、200 μg·mL-1濃度的人參皂苷Rg3能顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲指數(shù)（P＜0.01）。

表1 人參皂苷Rg3對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制作（±s）

表1 人參皂苷Rg3對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制作（±s）

組別/μg·mL-1 24 h 48 h OD值（n=3） 抑制率/% OD值（n=3） 抑制率/%0 0.941±0.019 - 1.035±0.387 -50 0.845±0.008 10.2 0.847±0.330 18.2 100 0.737±0.406 21.7 0.753±0.313 27.2 200 0.664±0.329 29.4 0.680±0.187 34.3 400 0.560±0.246 40.5 0.475±0.188 54.1 600 0.417±0.223 55.7 0.369±0.350 64.3

3 討 論

本研究旨在探究人參皂苷Rg3對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響，結(jié)果初步顯示該試劑對(duì)癌細(xì)胞的生物活性具有較強(qiáng)的抑制作用。人參皂苷Rg3的抗腫瘤作用已經(jīng)引起廣泛重視，有研究證實(shí)[4]人參皂苷Rg3能夠通過(guò)促進(jìn)MGBA的表達(dá)從而抑制腫瘤細(xì)胞的增值；相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[5]MGBA在乳腺癌組織中過(guò)表達(dá)，在非乳腺癌組織中極少表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，人參皂苷Rg3能有效抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增值和侵襲，其可能的作用機(jī)制為人參皂苷Rg3通過(guò)干擾乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231MGBA基因的表達(dá)，影響H2S/CSE系統(tǒng)的活性來(lái)最終得以實(shí)現(xiàn)，有必要行進(jìn)一步研究證實(shí)具體的相關(guān)信號(hào)通路，以為臨床的診療研究提供更為確切的證據(jù)。

[1] 黃立芳,蘆文娟.乳腺癌合并抑郁癥研究進(jìn)展[J/OL].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2017,(12):1-4.

[2] 江 昌,繆雨青,周文麗,王杰軍.人參皂苷Rg3的抗腫瘤作用及研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2017,22(07):664-667.

[3] 于 歡.人參皂苷Rg3脂質(zhì)體的研究[D].吉林大學(xué),2013.[2].

[4] 孫大鵬,顧立學(xué),李晨光,張鳳香.人參皂苷Rg3通過(guò)人乳腺珠蛋白A促進(jìn)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞凋亡及其可能的機(jī)制[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2017,24(06):615-619.

[5] 王會(huì)東.血清乳腺珠蛋白與乳腺癌相關(guān)性的初步研究[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,38(02):138-140.