中藥加味理腸飲對腹瀉型腸易激綜合征大鼠SP、VIP、CORT含量的影響

梁峻尉，白文筠*，遲莉麗，閆華,孫大娟,趙繼亭，王帥，葉倩男(.山東中醫藥大學附屬醫院，山東 濟南 500;.山東中醫藥大學,山東 濟南 500)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一種沒有器質性疾病或生化異常可以解釋的腹部不適或疼痛同時伴有排便紊亂的疾病，是消化內科門診常見的一種功能性疾病，據統計IBS病人約占消化內科門診量的31%[1]，我國以腹瀉型IBS多見[2]。IBS雖然不會危及患者的生命，但由于癥狀反復發作嚴重影響患者的生活質量，占用了大量的醫療資源[3]。

IBS的發病機制尚未完全明確，目前認為是以神經元調節胃腸道功能紊亂為特點的嚴重疾病[4]。我們在前期的臨床及實驗研究基礎上，課題組進一步選取P物質(SP)、血管活性腸肽(VIP)、皮質酮(CORT)作為主要測定指標，觀察加味理腸飲對IBS-D大鼠的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

出生后42 d SPF級SD雄性大鼠70只，體質量(200±10)g，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司,動物合格證號：SCXK(魯)20140007。

1.2 藥品

加味理腸飲(炒白術30 g,茯苓24 g,黨參12 g,炒白芍15 g,柴胡12 g,香附9 g,陳皮12 g,防風9 g,高良姜6 g,桂枝9 g,炙甘草6 g等)由山東中醫藥大學附屬醫院中藥制劑室提供，配制成含生藥濃度分別為0.5 g/mL、1 g/mL、2 g/mL的溶液。匹維溴銨片(得舒特,法國，批號：611243)；谷參腸安膠囊(復方谷氨酰胺腸溶膠囊,國藥準字：H51023598,生產廠家：成都地奧集團天府藥業公司)。

1.3 實驗主要試劑及儀器

試劑盒為 SP、VIP、CORT物質ELISA 試劑盒，購自濟南博諾生物科技有限公司。可調高速勻漿器FSH-2型，金壇市恒豐儀器廠；酶標儀:ELX808,BioTek美國伯騰儀器有限公司；高速低溫離心機MICROMAX RF，Thermo IEC(美國)。

1.4 實驗方法

1.4.1 實驗分組

將SD大鼠按隨機區組法分為7組：空白對照A組；模型對照B組；得舒特組；谷參腸安D組；加味理腸飲低劑量E組；加味理腸飲中劑量F組；加味理腸飲高劑量G組。(以下簡稱空白組、模型組、得舒特組、谷參腸安組、中藥低劑量、中藥中劑量和中藥高劑量組)，每組10只，各組大鼠體質量統計學比較無顯著性差異(P>0.05)。

1.4.2 造模方法

將SD大鼠適應性喂養7 d后,予避水應激+夾尾刺激+番瀉葉灌胃方法，以上刺激共持續10 d。為消除生物節律的影響，造模于每天9:00～11:00進行。

1.4.3 給藥方法

得舒特組給予得舒特15 mg/(kg·d)灌胃，谷參腸安組給予谷參腸安0.2 g/(kg·d)灌胃,加味理腸飲組分別給予低劑量1.5 g/(kg·d)、中劑量3 g/(kg·d)、高劑量6 g/(kg·d)中藥灌胃10 mL/(kg·d)，空白組和模型組分別給予等容積生理鹽水灌胃，1次/d。共28 d。以1 mL/100 g劑量灌胃。

1.5 AWR評分

參考文獻方法，用自制球囊擴張大鼠結直腸，并對擴張引起的腹部回縮反射(AWR)進行評分。

1.6 酶聯免疫法Elisa法檢測大鼠SP、VIP、CORT

連續用藥28 d后處死大鼠，于腹主動脈取血,每只大鼠取5 mL，置于抗凝管中，備用；截取結腸組織，取大鼠結腸段，距肛門口5 cm左右的腸組織，將清洗好的腸管立即置于4%的多聚甲醛溶液中固定，脫水處理后石蠟包埋。-80℃冰箱保存。按照試劑盒說明，檢測SP、VIP、CORT水平。

1.7 組織病理學變化

對結腸組織進行蘇木素-伊紅(haematoxylin-eosin，H-E)染色，在光學顯微鏡下觀察其病理組織學形態變化。

1.8 統計學分析

采用SPSS17.0軟件進行分析、統計，數據以平均數±方差表示。各組之間的比較采用單因素方差分析，兩兩比較時，如方差齊采用LSD檢驗，方差不齊選Dunnett T3檢驗。P<0.05被認為差異具有統計學意義，P<0.01被認為具有顯著的統計學差異。

2 實驗結果

2.1 AWR評分

AWR評分結果發現：與模型組相比，各藥物實驗組在壓力為20、40、60 mmHg時的行為學評分均降低(P<0.05)(除20 mmHg中藥低劑量組外)。各個組間在壓力為80 mmHg時評分未見差異(P>0.05)。見表1。

表1 試驗后各壓力值(mmHg)下的AWR評分

注：與模型組對比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.2 加味理腸飲對IBS-D大鼠血漿及結腸組織SP的影響

與模型組對比，各藥物組SP水平均下調(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠SP表達水平的對比

注：與模型組對比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.3 加味理腸飲對IBS-D大鼠血漿及結腸組織VIP的影響

與模型組對比，各藥物組VIP水平均下調(P<0.05)(除中藥低劑量組血漿VIP外)。見表3。

2.4 加味理腸飲對IBS-D大鼠血漿CORT的影響

與模型組對比，除中藥低劑量組外，各藥物組CORT水平均上調(P<0.05)。見表4。

2.5 加味理腸飲對IBS-D大鼠結腸組織病理學變化

HE染色結果顯示，各實驗組大鼠的結腸組織均未見明顯的形態學改變：結腸黏膜上皮完整、腺體排列整齊，各層結構清晰，未見明顯的炎癥細胞浸潤和間質水腫。實驗組間的病理結構表現未見明顯差異。說明應激未造成大鼠結腸明顯病理損害，這與臨床上IBS患者的表現相似。見圖1。

表3 各組大鼠VIP表達水平的對比

注：與模型組對比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表4 各組大鼠CORT表達水平的對比

注：與模型組對比，*P<0.05,**P<0.01；與中劑量組對比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

圖1 結腸組織病理學變化(×100)注：A空白組;B模型組;C得舒特組;D谷參腸安組;E中藥低劑量組;F中藥中劑量組;G中藥高劑量組

3 討論

IBS的腸神經系統產生異常主要表現在內臟感覺過敏和腸道動力兩方面。最近幾年有關IBS-D病理機制的研究逐漸深入，腦腸軸異常成為本病的一個重要機制及研究方向。SP是第一個被發現的腦腸肽，可使胃腸蠕動增加、消化道平滑肌收縮增強，并具有刺激小腸、結腸黏膜分泌水和電解質的作用[5]。異常升高的SP可使腸道平滑肌強烈收縮、增強結腸集團運動、刺激腸黏膜分泌水和電解質的作用，這與IBS-D腹痛和腹瀉的癥狀密切相關。VIP血管活性腸肽在胃腸神經系統中是一種抑制性神經遞質[6]，有研究表明[7]，IBS患者腹瀉時，血中VIP較正常人空腹時有明顯升高，VIP與IBS患者的腹痛、腹瀉等癥狀密切相關。近幾年關于下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA軸)[8]的研究增多，學者發現其調節網絡的失控可能為IBS發病的關鍵，應激刺激能影響HPA軸，促使下丘腦、垂體、腎上腺分泌神經遞質，如皮質酮(CORT)等，導致IBS的發生。有研究表明，婦女IBS患者血漿中皮質酮的含量比健康成人血漿中皮質酮含量高。因此本研究選取SP、VIP、CORT作為內容。

目前為止治療IBS主要以對癥、抗焦慮或者抑郁以及心理輔導等為主，沒有從病理生理學的角度來解決問題，因此療效相當有限，而有一些設計嚴格的臨床試驗[9]或系統評價[10]證明中醫藥對IBS有一定療效。前期臨床研究顯示，應用加味理腸飲治療IBS-D，臨床效果顯著[11]，全方由柴胡、桂枝、炒白芍、黨參、炒白術、茯苓、半夏、防風、陳皮、黃芩、香附、烏藥、炙甘草組成，是由“柴胡桂枝湯”“痛瀉要方”“四君子湯”三方加減變化而來，柴胡桂枝湯在《金匱要略》中主治心腹卒中痛者，隗繼武老師通過對經典的深研和反復的臨床實踐，應用本方治療IBS，臨床效果顯著[11]；痛瀉要方一直以來被廣大醫者看做是治療IBS的基礎方之一，療效確切；四君子湯歷來被認為是“健脾補氣第一方”?？v觀全方健脾為主佐以疏肝，行氣散寒又佐以解郁清熱，切合病機。清補結合，寒熱并用，營衛同調，兼顧心肝脾是本方的四大特點。

本研究發現：加味理腸飲可以明顯降低IBS-D大鼠的AWR評分和內臟痛覺閾值，說明加味理腸飲對慢性應激導致的內臟高敏感和腸道動力異常具有顯著的調節作用。同時，本實驗還發現加味理腸飲可以降低IBS-D大鼠血漿及結腸組織中SP、VIP的含量，下調血漿CORT水平，尤以中劑量組效果最明顯，說明加味理腸飲可能通過調節相關腦腸肽含量從而影響腦-腸軸以及HPA軸,因而調節了胃腸道的運動、感覺和分泌功能。以上這些結果說明了中醫學中的情志異常-肝郁-脾虛等導致機體的一系列病理生理改變，可能與IBS病因病機學中的神經-內分泌-免疫學說有著某種密切的聯系。

本研究只是選取了腦腸軸和HPA軸的相關遞質，尚缺乏以某一個通路為主的系統研究，將來的研究將以此為方向進行探討。

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