HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宮頸上皮病變中的表達及預后相關(guān)性研究

丁 偉，曾 杰

（濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261000）

宮頸癌是當前女性第二大生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，也是唯一知道確切病因的腫瘤。宮頸上皮病變主要是指宮頸上皮內(nèi)瘤變，是婦科常見病，也是宮頸癌的的病因，手術(shù)率是治療高級別宮頸上皮病變的主要方法[1]。宮頸上皮病變的預后影響因素較多，不同患者的預后存在較大的差異，對于CIN患者而言，定期復查，及早診斷治療，是阻斷其向?qū)m頸癌進展的關(guān)鍵。HPV16-E6、E7蛋白是兩種與HPV-16相關(guān)的蛋白，HPV-16是宮頸癌高危因素之一，缺氧誘導因子-1α（HIF-α）是目前發(fā)現(xiàn)的缺氧條件下細胞應答最基本的調(diào)控因子，是聯(lián)系惡性腫瘤缺氧和血管形成的一個主要調(diào)控因子，在許多惡性腫瘤中被檢測到過表達。本次研究嘗試分析HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宮頸上皮病變中的表達及預后相關(guān)性，為宮頸癌的預防提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月，本院開展TCT聯(lián)合陰道鏡活檢診斷CINⅠ級、CINⅡ-CINⅢ宮頸上皮內(nèi)瘤病變的及選擇宮頸錐切患者入組。納入標準：①臨床資料完整；②獲得了活檢資料；③進行了隨訪，時間在1年及以上；④診斷為HR-HPV感染，明確了感染類型為HPV16型；⑤手術(shù)治療的對象都獲得了成功，切緣切緣無病灶累及，病灶已完全切除無殘留病灶。排除標準：①復發(fā)對象；②有其他類型的宮頸病變，如尖銳濕疣；③近3個月有使用新性激素或陰道鏡檢查史，采樣質(zhì)量欠佳；④合并癥妊娠。其中TCT聯(lián)合陰道鏡活檢診斷采用超聲等非切除術(shù)治療的CINⅠ對象94例，年齡33～52歲，平均（42.5±6.2）歲。選擇宮頸錐切治療獲得活檢組織的對象105例，年齡32～57歲，平均（42.4±6.2）歲。其中CINⅡ級45例、Ⅲ級60例。

1.2 方法

1.2.1 不同CIN分級宮頸上皮內(nèi)瘤變表達

TCT采樣的對象，需要采集宮頸分泌物，陰道窺鏡配合刷取脫落的宮頸上皮細胞，將刷頭放置在洗脫管中，送檢，進行HPV的分型檢測，以及HPV-16、17蛋白以及HIF-a檢測，蛋白檢測采用Western Blot法檢測。將CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ組對象進行分組，對比三級對象的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達。

1.2.2 預后相關(guān)性分析

所有對象都根據(jù)病理診斷結(jié)果、患者的耐受等條件，選擇合適的治療方法，CINⅠ級別的對象選擇聚焦超聲為主的治療方法。CINⅡ-Ⅲ級的對象選擇宮頸錐切術(shù)治療，術(shù)后聯(lián)合免疫抑制劑等抗病毒治療。所有對象禁性生活60日，3個月后檢測HPV。若為陽性，則進行宮頸細胞學檢查，同時為陽性，則每3個月進行HPV檢測，若為陽性則進行活檢，若為陰性，則每隔3個月隨訪HPV檢測，持續(xù)陽性，則進行細胞學檢查，提示異常，進行宮頸活檢。若第3個月檢測HPV為陰性，則每隔6個月進行宮頸細胞學檢查，連續(xù)2年，出現(xiàn)雙陽性后再進行宮頸活檢。根據(jù)患者的預后進行分組，若患者HPV、TCT檢查均為陰性則為有效，否則若出現(xiàn)任何一次檢查為陽性，HPV陽性和/或TCT、活檢陽性則視為無效。

1.3 觀察指標

CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級對象的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達陽性率。CINⅠ非宮頸錐切手術(shù)的對象有效組、對照組的影響因素，包括HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達陽性率。CINⅡ、Ⅲ級手術(shù)對象有效組、對照組的影響因素，包括HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達水平。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 表達對比

CINⅠ的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達陽性率低于CINⅡ、CINⅢ級，CINⅡ級HIF-α陽性率低于CINⅢ級，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 因素分析

2.2.1 CINⅠ級對象預后因素

94例CINⅠ對象其中有效80例、無效14例，無效者主要為治療后HPV復發(fā)對象。有效組年齡、HPV16-E6、HPV16-E7、HIF-a蛋白表達低于無效組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。有效組吸煙2.5%（2/80）、無效組0.0%（0/14），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2.2 CINⅡ-Ⅲ級對象的預后

105例對象，其中有效82例、無效23例。有效組HPV16-E6、HPV16-E7、HIF-a蛋白表達低于無效組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。有效組吸煙6.1%（5/82）、無效組8.7%（2/23），差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ級的HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達陽性率對比 [n（%）]

表2 CIN級對象的預后影響因素分析[（x ±s），M（P25-P75）]

表3 CINⅡ-Ⅲ級對象預后影響因素分析[（x ±s），M（P25-P75）]

3 討 論

研究顯示得出了以下的結(jié)論：①HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宮頸上皮病變中的表達陽性隨著分級的上升而上升，HPV16-E6、E7蛋白在發(fā)生高級別病變后上升顯著，HIF-a表達與分級關(guān)系更為密切，呈持續(xù)上升趨勢。②表達還與患者的預后有關(guān)，高表達對象無效的風險更高。與絕大多數(shù)的研究結(jié)果基本相同，但不同文獻報道的陽性表達率存在一定的差異，反映了CIN流行病學的差異，HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a表達還受到其他因素的影響，如治療的及時性、患者自身的免疫能力、分級的準確度等[2]。有報道顯示HPV16-E6、E7變異與宮頸癌的發(fā)生關(guān)系密切，高蛋白表達提示HPV病毒復制更為活躍，發(fā)揮協(xié)調(diào)作用[3]。HIF-1α是腫瘤發(fā)生中的重要影響因子，一般而言其在正常的宮頸組織中無表達，但隨著上皮內(nèi)瘤病變的發(fā)生進展，其表達水平快速上升，有報道顯示其在宮頸癌中的表達率可以達到100.0%，隨著級別的上升HIF-1表達逐漸上升，也反映了CIN與宮頸癌確實存在密切的關(guān)系，在上皮內(nèi)瘤發(fā)生時期，便已經(jīng)出現(xiàn)了局部缺氧狀態(tài)，出現(xiàn)細胞缺氧免疫應答[4]。

因此需要特別關(guān)注高表達對象，選擇更為積極的治療干預對策：①對于CINⅠ級的對象，若HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a高表達，則需要適當?shù)牟扇》e極的治療干預對策；②若為CINⅡ級，若HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a低表達，也可以先嘗試保守治療，避免盲目的錐切，減少創(chuàng)傷；③對于CINⅡ-Ⅲ級的對象，HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a高表達，需要更為有效的抗病毒治療、隨訪干預，如術(shù)后聯(lián)合

干擾素治療，重視提高活檢的質(zhì)量，及早診斷復發(fā)。

小結(jié)：HPV16-E6、E7蛋白和HIF-a在宮頸上皮病變中的表達及預后有關(guān)，可作為CIN治療的依據(jù)。

[1] 高 婷,李 超,梁 鋅,等.中國癌癥流行的國際比較[J].中國腫瘤,2016,25(6):409-411

[2] 羅麗麗,程 欣,蔡紅兵.TGF-β_1的表達、HPV16 E7基因多態(tài)性與宮頸癌的相關(guān)性[J].武漢大學學報(醫(yī)學版),2014,35(04):507-510

[3] 程瑩星,黃 勇.HPV16-E6-DNA對宮頸癌預后價值分析[J].河北醫(yī)學,2017,23(12):1944-1948

[4] 鄧遠征.宮頸上皮內(nèi)瘤變術(shù)后復發(fā)的高危因素Meta分析[J].中國實用醫(yī)藥,2014,9(36):105-106