大腹園蛛對(duì)小鼠的急毒和亞急毒作用

韓 旭，費(fèi)虹天，姜明明，董笑贏，鄭 菲，陶 冶，費(fèi) 瑞

(吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

大腹園蛛(Araneusventricosus)屬蜘蛛目(Araneae)、園蛛科(Araneidae)，廣泛分布于全球各地，是人們生活中最常見(jiàn)的蜘蛛之一.目前，全世界共有蜘蛛4萬(wàn)多種，而我國(guó)有4 300多種，其中一些帶有劇毒[1].

園蛛的記載始于《詩(shī)經(jīng)》，而以園蛛作為藥物，則主要是記載在公元741年的《本草拾遺》中.園蛛的藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在：治療陰狐疝氣、小兒腹股斜疝、背瘡、痔瘡、瘰疬、疳積、咽喉炎和咽喉息肉、鼻炎和鼻息肉、脫肛、中風(fēng)偏癱、腎陽(yáng)虧虛等，但對(duì)其毒性作用研究尚未見(jiàn)報(bào)道[2-4].因此，本文對(duì)大腹園蛛進(jìn)行了急性和亞急性毒性研究，以為大腹園蛛活性的開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).

1 材料

1.1 藥品

大腹園蛛采自吉林省吉林市馮家屯，使用時(shí)用烘箱焙干并制成粉末.

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為體重18～22 g的昆明種純系小鼠，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK-(吉)2013-0001.實(shí)驗(yàn)前在室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)2 d.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大腹園蛛對(duì)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

選取健康昆明小鼠20只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只.根據(jù)急性毒性劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)3 d并禁食 12 h后，按15 g/kg劑量，經(jīng)口1次性灌胃給予大腹園蛛粉(Araneusventricosuspowder，AP)溶液0.8 mL；空白組給予同劑量的蒸餾水.各組小鼠經(jīng)灌胃后，在相同條件下分籠飼養(yǎng)，室溫20℃～25℃，普通顆粒飼料飼養(yǎng)，自由飲水.實(shí)驗(yàn)觀察兩周，定時(shí)記錄小鼠反應(yīng)情況及死亡數(shù)量[5-8].

2.2 大腹園蛛對(duì)小鼠最大耐受劑量實(shí)驗(yàn)

選取健康昆明小鼠20只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組和實(shí)驗(yàn)組，每組10只.根據(jù)我國(guó)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》標(biāo)準(zhǔn)，小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)3 d并禁食 12 h后，按最大給藥劑量(20 g/kg)和容積(40 mL/kg)，分兩次經(jīng)口灌胃給予大腹園蛛粉，間隔4 h；空白組給予等量的蒸餾水.小鼠經(jīng)灌胃后，在相同條件下分籠飼養(yǎng)，室溫20℃～25℃，普通顆粒飼料飼養(yǎng)，自由飲水.觀察14 d，并記錄動(dòng)物反應(yīng)情況[5-8].

2.3 大腹園蛛對(duì)小鼠亞急毒實(shí)驗(yàn)

選取健康昆明小鼠80只，適應(yīng)飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)分4組，每組20只，雌雄各半.設(shè)對(duì)照組和給藥組.給藥組按1.25 g/kg( AP低劑量組)，2.5 g/kg( AP中劑量組)，5 g/kg(AP高劑量組)分別灌胃給予大腹園蛛粉溶液，每天一次，連續(xù)4周.末次給藥后24 h測(cè)定小鼠臟器系數(shù)、血常規(guī)及血液生化指標(biāo)[5-8].

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 小鼠的急性毒性

大腹園蛛粉經(jīng)灌胃給予小鼠后，第1天小鼠的自由活動(dòng)減少，食量下降；第2—3天，小鼠的食量、活動(dòng)恢復(fù)正常；第14天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，20只給藥小鼠均無(wú)死亡，小鼠的活動(dòng)、毛色、食量等與空白對(duì)照組相比，無(wú)明顯差異.經(jīng)解剖小鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器，與空白組相比，也無(wú)明顯病變和差異.根據(jù)國(guó)家急性毒性(LD50)劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，大腹園蛛的LD50值>15 g/kg(見(jiàn)表1).

表1 大腹園蛛對(duì)小鼠急性毒性(LD50)實(shí)驗(yàn)

3.2 小鼠的最大耐受劑量

以最大的允許濃度和動(dòng)物耐受的最大容積，在一天連續(xù)兩次給藥后，持續(xù)觀察14 d，小鼠無(wú)一只死亡，小鼠的活躍程度、外觀特征、生活習(xí)性等均未有異常改變.經(jīng)解剖小鼠觀察其心、肝、脾、肺、腎、脾、胃等臟器，與對(duì)照組相比，未發(fā)現(xiàn)有明顯的病變和差異.表明昆明小鼠對(duì)大腹園蛛的最大耐受劑量為20 g/kg.

3.3 小鼠的亞急性毒性

3.3.1 一般癥狀

給藥期間，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)小鼠中毒和其他異?，F(xiàn)象.小鼠進(jìn)食量和飲水量正常、大小便無(wú)異物、生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)良好.給藥組與對(duì)照組相比，小鼠體重增長(zhǎng)無(wú)明顯變化，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果差異不顯著(P>0.05)，表明大腹園蛛粉對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育無(wú)影響(見(jiàn)表2).

表2 大腹園蛛對(duì)小鼠體重的影響 g

3.3.2 臟器系數(shù)

內(nèi)臟是生物體發(fā)揮生理功能的主要場(chǎng)所，其結(jié)構(gòu)和形態(tài)改變可直觀反映機(jī)體的健康情況，而臟器系數(shù)是毒理實(shí)驗(yàn)中的常用指標(biāo)，可反映毒物對(duì)機(jī)體的損傷程度[10].據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了大腹園蛛粉對(duì)小鼠臟器的影響，結(jié)果(見(jiàn)表3)表明，給藥組與對(duì)照組相比，心、肝、脾、肺、腎的重量及臟器系數(shù)無(wú)明顯變化，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示各組差異不顯著(P>0.05)，表明小鼠經(jīng)給藥后，臟器未受影響.

表3 大腹園蛛對(duì)小鼠相對(duì)臟器系數(shù)的影響

3.3.3 血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)

血液對(duì)機(jī)體的新陳代謝、內(nèi)環(huán)境以及功能調(diào)節(jié)都有重要的作用，而血常規(guī)檢測(cè)是對(duì)血液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板等系統(tǒng)進(jìn)行的測(cè)定與分析，因此，在毒理方面，可通過(guò)血常規(guī)檢測(cè)檢驗(yàn)外來(lái)物質(zhì)是否對(duì)血液成分造成影響，從而發(fā)現(xiàn)組織或器官的病變.本實(shí)驗(yàn)經(jīng)連續(xù)給藥4周后，給藥組與實(shí)驗(yàn)組相比，白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板的數(shù)量無(wú)明顯差異(見(jiàn)表4).統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，各組間差異不顯著(P>0.05)，表明大腹園蛛粉對(duì)小鼠血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)量無(wú)影響.

3.3.4 血液生化指標(biāo)檢測(cè)

血液生理生化指標(biāo)也是毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的測(cè)評(píng)指標(biāo)，因?yàn)檠荷碇笜?biāo)能反映機(jī)體的健康狀況，因此對(duì)該指標(biāo)的檢測(cè)可為疾病診斷和監(jiān)測(cè)提供依據(jù)[11].本實(shí)驗(yàn)經(jīng)連續(xù)給藥4周后，給藥組與實(shí)驗(yàn)組相比，各劑量組中除谷草轉(zhuǎn)氨酶和尿酸有所改變之外，其他各項(xiàng)生化指標(biāo)均無(wú)明顯差異(P>0.05)，表明大腹園蛛粉對(duì)小鼠機(jī)體無(wú)明顯有害影響(見(jiàn)表5).

表5 大腹園蛛對(duì)小鼠生化指標(biāo)的影響

4 討論

大腹園蛛是我國(guó)最常見(jiàn)的蜘蛛種類(lèi)之一.據(jù)報(bào)道，大腹園蛛具有很好的治療疾病作用.為探究大腹園蛛的安全性并為臨床安全用藥提供可靠依據(jù)，我們對(duì)成體大腹園蛛進(jìn)行了系列的毒性實(shí)驗(yàn)研究[1，8].

急性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)外源化合物安全的重要指標(biāo).其中LD50是指在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體中能引起半數(shù)動(dòng)物死亡的劑量，是衡量藥物急性毒性高低的常用指標(biāo)[9-10].我們的急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組小鼠無(wú)一死亡.根據(jù)國(guó)家急性毒性劑量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，判定成體大腹園蛛的LD50值>15 g/kg，屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí).

亞急性毒性實(shí)驗(yàn)是指人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物染毒期或接觸毒物時(shí)間不長(zhǎng)(一般為10 d乃至數(shù)月)情況下對(duì)機(jī)體可能造成的功能或機(jī)體損害，它可以進(jìn)一步了解受試物的長(zhǎng)期毒性.因?yàn)榧词故且罁?jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)劃分為相對(duì)無(wú)毒的物質(zhì)，但由于持續(xù)存在于環(huán)境中或長(zhǎng)期食用，在機(jī)體內(nèi)具有一定的生物蓄積能力，也有可能產(chǎn)生不良的致病效應(yīng)[11].本文通過(guò)對(duì)小鼠體重、臟器系數(shù)、血液細(xì)胞指數(shù)和生化指標(biāo)上的變化情況進(jìn)行分析，研究了大腹園蛛的亞急性毒性作用，以進(jìn)一步判定大腹園蛛的安全性.經(jīng)過(guò)檢測(cè)小鼠的體重變化和心、肝、脾、肺、腎的形態(tài)學(xué)及血液生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，大腹園蛛低、中、高三個(gè)劑量組與空白對(duì)照組相比，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯差異，表明大腹園蛛粉不能影響小鼠體重、臟器和血液指標(biāo)改變，無(wú)一定蓄積性.

肝臟和腎臟是人體內(nèi)物質(zhì)代謝最為活躍的重要器官，它能清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物和毒物.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)肝臟和腎臟生化指標(biāo)的檢測(cè)，探究了大腹園蛛的影響.結(jié)果證實(shí)，各組中谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、白蛋白、總蛋白、尿素氮和對(duì)照組相比，均無(wú)明顯差異；而谷丙轉(zhuǎn)氨酶和尿酸與對(duì)照組相比雖有一定變化，但仍在正常范圍內(nèi)，且與對(duì)照組及組間無(wú)明顯差異.結(jié)合其他相關(guān)臟器指標(biāo)，我們認(rèn)為大腹園蛛粉對(duì)小鼠肝臟和腎臟無(wú)明顯不良反應(yīng).至于更深入的和長(zhǎng)期慢性毒性作用的研究尚待進(jìn)一步進(jìn)行.

本研究通過(guò)急性毒性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)均未發(fā)現(xiàn)大腹園蛛粉有明顯的毒性作用，表明大腹園蛛具有較好的安全性.這不僅為今后進(jìn)一步的藥物開(kāi)發(fā)提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，而且也為其生物活性研究奠定了基礎(chǔ).

[參 考 文 獻(xiàn)]

[1] 韓旭，高久春，張歡，等.大腹園蛛的細(xì)胞及遺傳生殖毒性研究[J].東北師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2016，48(2)：118-121.

[2] 胡獻(xiàn)國(guó).蜘蛛的藥用[J].家庭中醫(yī)藥，2013(7)：48-49.

[3] 浦飛飛.蜘蛛毒素的生物學(xué)活性研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2014，12：1651-1654.

[4] 唐泉富.蜘蛛研究與利用概述[J].森林病蟲(chóng)通訊，1994(1)：44-46.

[5] 佟巨慧，遲立超，張穎麗，等.羧甲基殼聚糖銀的急性和亞急性毒性研究[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2010，36(4)：673-677.

[6] 遲立超.草蓯蓉多糖的抗炎作用及毒性實(shí)驗(yàn)研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2008.

[7] 費(fèi)瑞，遲立超，杜建石，等.草蓯蓉多糖的毒性實(shí)驗(yàn)研[J].東北師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，40(2)：98-100.

[8] 韓旭.大腹園蛛粉的毒性及抗炎作用研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2016.

[9] 張萍，王加才.硫代甜菜堿對(duì)小鼠的急性和亞急性毒性實(shí)驗(yàn)[J].飲料工業(yè)，2007(9)：13-15.

[10] 陳進(jìn)汝，劉熙李，冬梅云.南松松塔提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2017，28(8)：1837-1840.

[11] 張斌.蘇丹紅對(duì)昆明小鼠的亞急性毒性的病理學(xué)研究[D].石家莊：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.