外周注射Ghrelin對非洲雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶含量的影響

王 亮，楊 杰，王家鄉

（長江大學動物科學學院，湖北 荊州 432500）

Ghrelin是由日本科學家 Kojima等［1］于 1999年從大鼠胃組織中提取得到的一種含28個氨基酸殘基的多肽，能夠促進生長激素（Growth hormone，GH）的釋放。Ghrelin主要來源于胃組織，下丘腦、垂體、腸、卵巢、睪丸、胎盤等多種組織也能產生，在體內分布廣泛［2］。Ghrelin具有調節胃腸功能、心血管功能、記憶、睡眠、內分泌、生殖等多種生物學作用［2］。Ghrelin自被發現就引起了廣泛的關注，成為人們不斷研究的熱點。本課題組前期研究表明，Ghrelin在非洲鴕鳥的胃、腸、胰腺、肝臟、胸腺、肺、睪丸、脾臟、小腦及腎上腺等組織中均有分布［3－9］，且 Ghrelin在消化道的分布與表達隨著動物年齡的變化而變化，提示Ghrelin與鴕鳥胃腸道的發育有一定的作用和關系［3］。因此本研究采用放射免疫法檢測Ghrelin對非洲雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶含量的影響，旨在為非洲雛鴕鳥的生長發育提供新的理論依據。

1 材料與方法

1．1 試驗材料

1．1．1 試驗動物 選取健康的45 d非洲雛鴕鳥為試驗材料，平均體重（5．5±0．8） kg，隨機分為 4 組，每組4羽，雌雄不限，均來自于長江大學鴕鳥研究所。

1．1．2 試驗基礎日糧 試驗過程使用自配育雛料，主要是由青菜配合肉用仔雞前期配合飼料，飼料使用荊州海大飼料有限公司的產品。

1．1．3 試驗試劑 非洲鴕鳥 Ghrelin，GSS（Octanoyl）FLSPEYKKIQKQKDPKKPTTKLHC由上海強耀生物科技有限公司合成．

1．2 試驗方法

1．2．1 試驗設計 通過頸部皮下注射不同濃度外源性Ghrelin，其濃度分別為 0（對照組）、10、50、100 μg／kg，用生理鹽水稀釋，注射劑量為1 μL／羽，注射時間為每天上午 8：00，連續注射 6 d，于第 7天上午 8：00取材。

1．2．2 飼養管理 整個飼養階段在長江大學鴕鳥研究所進行，為避免影響試驗效果，雛鴕鳥采用分欄飼養。 每天定時給料，具體時間為 8：00、11：00、14：00、17：00四個時間段各飼喂一次，記錄每天總采食量。在試驗開始前，對鴕鳥舍全場進行全面徹底噴霧式消毒，在飼喂試驗期間，嚴格按照長江大學鴕鳥研究所消毒程序進行。

1．2．3 樣品的采集與處理 飼養至第7天的非洲雛鴕鳥稱重。經跖靜脈注射10%的烏拉坦（1 g／kg）稀釋液進行全身麻醉，打開腹腔迅速取部分小腸組織，用0．85%生理鹽水洗凈食糜，隨后置于液氮中保存備用。

1．2．4 胃蛋白酶含量的測定 準確稱取組織質量，按 1∶9（g／mL）的比例加入勻漿介質，冰水浴條件下機械勻漿，制成10%的組織勻漿，2 500 r／min離心10 min，取上清液進行檢測。采用放射免疫法檢測其含量（北京北方生物技術研究所有限公司）。

1．3 統計分析

獲得的全部數據用SAS數據處理軟件進行統計分析。所得數據以平均值±標準差表示，通過t檢驗法比較各組間的差異顯著性。P＜0．05為差異顯著。

2 結果與分析

從表1中可以看出，當Ghrelin濃度為10 μg／kg時，雛鴕鳥所有小腸中胃蛋白酶的含量均有增加，且空腸和回腸中的含量與對照相比差異顯著 （P＜0．05）；當 Ghrelin 濃度為 50 μg／kg 時，十二指腸中胃蛋白酶的含量與對照相比顯著降低（P＜0．05），而空腸和回腸中胃蛋白酶的含量則顯著增加 （P＜0．05）；當Ghrelin濃度為100 μg／kg時，十二指腸胃蛋白酶的含量顯著降低（P＜0．05），回腸中胃蛋白酶的含量顯著增加（P＜0．05），空腸中變化不明顯。

表1 Ghrelin對小腸中胃蛋白酶含量的影響

3 小結與討論

就哺乳動物鼠類而言，Ghrelin可通過中樞和外周途徑參與胃腸功能的調節，給大鼠腦室或靜脈注射Ghrelin均可以促進其胃腸蠕動，促進胃酸分泌，加快胃排空，并發現此種作用可被阿托品和迷走神經切斷所阻斷，推測迷走神經依賴性的膽堿能途徑參與了Ghrelin對胃腸運動的調節［2］。此外，Ghrelin還能通過加強大鼠小腸的運輸功能來降低其腸梗阻的發病率［10］。Ghrelin對禽類胃腸運動的調節與哺乳動物相似。Kitazawa 等［11］研究發現，Ghrelin 可以促進雞胃腸道（食道、嗉囊、腺胃、十二指腸、空腸和結腸）平滑肌收縮，并且隨著雞日齡的增大，Ghrelin對其腺胃收縮的誘導作用逐漸下降［12］，而Ghrelin對禽類消化酶有何影響尚未見研究。本研究發現，一定劑量的Ghrelin（10 μg／kg）能夠促進雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶的含量增加，從而增強其消化吸收能力，促進雛鴕鳥的生長。

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