藏藥列赤阿湯顆粒制劑工藝及質量標準研究

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(西藏自治區藏醫院開發應用研究所，西藏 拉薩 850000)

藏藥列赤阿湯系傳統藏藥驗方。本品始載于公元17世紀藏醫藥學家第司桑杰加措編著的《藏醫醫決補遺》中，屬于95版《藏藥部頒標準》中的成方制劑，由訶子(去核)、毛訶子、寬筋藤、獐牙菜、余甘子等5味藏藥材制成，用于“陳普”病，“叱乃”病，風濕、類風濕性關節炎，痛風引起的關節紅、腫、熱、痛，活動受限等。原湯散服用時按照醫生醫囑由患者自行煎煮后服用，因此煎煮次數、加水量、煎煮時間以及服用量等難以保證，由此出現影響治療效果等問題。本次研究是在治療物質基礎不變前提下，本著方便、安全、療效確切、質量可控為目標，把本品原湯散經提取、濃縮、制粒、包裝并建立了質控標準等。

1 材料

1.1 儀器 WFH-201BJ 紫外可見投射反射儀(上海精科實業有限公司)；BT224S 十萬分之一克電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)；玻璃展開槽(200 mm×100mm)；TLC 常規預制板(200mm×100mm，青島海洋化工廠分廠)；DZF-6053真空干燥箱及DHG-9145A電熱恒溫鼓風干燥箱(上海齊欣科學儀器有限公司);HH-S數顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫療儀器廠)；AS20500BDT超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；prima-s15實驗室純水系統(上海和泰儀器有限公司)；U&M-Ⅱ多功能藥用試驗機(上海優譯柯機械科技有限公司)。

1.2 試藥 凈藥材訶子、毛訶子、余甘子、寬筋藤及獐芽菜從西藏自治區藏醫院制劑室購買并由本院生藥研究所格桑巴珠老師鑒定均為正品；試驗用三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、濃氨試液、冰乙酸等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 制劑工藝研究

2.1.1 提取溶劑 列赤阿湯為水煎煮后服用，為保持原湯劑的溶劑，故本顆粒劑提取溶媒確定為水。

2.1.2 提取工藝正交試驗 以煎煮次數(A)、煎煮時間(B)和加水量(C)為3個因素，每個因素選取3個水平，采用L9(34)正交法進行正交試驗，以出膏率為指標，優選提取最佳工藝條件。

表1 因素水平設計

2.1.3 試驗方法及結果 稱取處方藥材的十分之一，按表1安排實驗，將各次提取濾液合并后，加熱濃縮至相對密度1.20g/mL～1.23g/mL(55～60℃)，移入100mL的容量瓶中并定容，防止室溫后定容，測定前充分搖勻，分別測定出膏率，進行方差分析，結果見表2 、3、4。

從表2、表3、表4得出結論如下：A(次數)、B(時間)、C(加水倍)三因素中，對本次試驗的影響大小為A﹥C﹥B，最佳工藝為：A3B2C3，即煎煮次數是關鍵因素，加水量是次關鍵因素，煎煮時間的影響較小。結果：最佳方案為藥材加10倍量水浸泡1夜，水煎煮提取3次，每次1h。

表2 正交試驗結果

表3 方差分析結果表

表4 方差分析結果表

2.1.4 顆粒成型工藝試驗方法及結果

2.1.4.1 輔料選擇 采用(按照最佳提取工藝提取流浸膏)與輔料(糊精)按不同比例制備軟材，以軟材干濕、制粒難易度及色澤均勻為指標進行輔料配比試驗，方法與結果見表5和6。

結果：從表6可以看出，第三個輔料處方比例所制得的軟材適合制粒，因此我們優選了R2作為列赤阿湯的制備處方比例。

表5 制劑輔料處方比例篩選方法

表6 制劑輔料處方比例篩選結果

2.1.4.2 顆粒干燥試驗方法及結果 在恒溫干燥箱中進行干燥并設定溫度為60℃，用快速測定水分儀進行測定濕顆粒水分，測定結果如下表7。2015年版《藥典》顆粒水分小于8%。故確定在60℃下烘干2.5h。

2.1.4.3 顆粒吸濕性試驗方法及結果 取已恒重的稱量瓶5個，在底部分別放入列赤阿湯顆粒，厚度約為2mm，準確稱重后在室溫下敞開放置24、48、72、96、120h后稱重，結果顯示：在室溫下敞開放置時間越久，顆粒吸濕性越高，同時顆粒有濕潤的現象，表明本品有吸濕性，需隔絕空氣，故用鋁塑復合膜包裝。

2.1.4.4 顆粒流動性試驗方法及結果 粉粒流動性測定：為保證工業化生產分劑量的準確性，要求顆粒具有良好的流動性。取干燥顆粒100g5份，采用固定圓錐底法，測定各目數顆粒的休止角。結果休止角分別為35.5°、36.0°、36.5°、36.5°、37.0°，說明物料具有較好的流動性，可以滿足大生產要求。

2.2 質量標準

2.2.1 本品中獐芽菜鑒別方法及結果 供試品制備方法：取3批本品內容物2g，加甲醇30mL，超聲提取30min(超聲溫度為60℃)，提取溫度的高低影響鑒別斑點的亮度，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取獐牙菜陰性樣品(缺獐牙菜)1.17g、獐牙菜對照藥材細粉0.21g，加甲醇30mL同法制成陰性樣品、對藥材溶液。

鑒別方法：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各10μL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10:1:0.4:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。

結果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，但陰性樣品在相同的色譜位置上沒有顯相同顏色的熒光斑點，見圖1。

2.2.2 本品中寬筋藤鑒別方法及結果 供試品制備方法：寬筋藤主要含有生物堿，按照生物堿提取方法進行制樣。取3批本品內容物2g，加入適量10%濃氨水，浸潤10min，再加入甲醇30mL，超聲提取60min(超聲溫度60℃)，提取溫度高低影響生物堿的提取量，尤其是對照藥材影響比較明顯，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2mL使溶解，作為供試品溶液。另取陰性樣品(缺寬筋藤)1g、寬筋藤對照藥材細粉0.33g，加甲醇30mL同法制成陰性樣品、對藥材溶液。

鑒別方法：照薄層色譜法(中國藥典2015年版四部通則0502)試驗，吸取上述3種溶液各10μL，點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(6：2：1.5)為展開劑，適量濃氨水裝入小燒杯中，并放置展開槽另一側，氨蒸氣飽和15分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(300nm及365nm)下檢視。

結果：供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點。但陰性樣品在相同的色譜位置上沒有顯相同顏色的熒光斑點，見圖2。

3 討論

3.1 通過正交法優化提取工藝并摸索出生產工藝環節的關鍵參數，使得本品在工藝無質的改變情況下研制成顆粒劑，建立了可控的質量標準。顆粒劑與原湯散相比具有患者免煎、服用劑量準確、質量可控等優勢。當然，劑型上的優勢并不足以說明臨床療效的優勢，因此今后顆粒劑與原湯散兩者在臨床使用時，有關臨床療效的數據需要收集并加以分析，由此實現藏藥湯劑創新研究工作拓展于臨床療效研究方面，同時為制劑創新研究工作的可行性提供有利的佐證。

3.2 原湯散劑沒有建立相應的質控標準，通過此次研究建立了寬筋藤和獐芽菜薄層色譜鑒別和顆粒相應檢查向下的檢查標準，為產品質量控制提供了可靠、可行標準。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(四部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015.通則.

[2]衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥第一冊[S].西藏：西藏人民出版社， 1995.275.

[3]西藏、青海、四川、甘肅、云南、新疆六省衛生局.藏藥標準[S].西寧：青海人民出版社，1979.212.

[4]占堆，等.藏藥成方制劑現代研究與臨床用藥 [M].成都：四川出版集團·四川科學技術出版社，2009.537-542.