紫花苜蓿化學成分及其生物活性研究進展

劉學貴,黃明遠,呂夢超,孫羽俅,卞 珺,高品一,*,李丹琦

(1.沈陽化工大學制藥與生物工程學院,遼寧沈陽 110142; 2.沈陽化工大學功能分子研究所,遼寧沈陽 110142)

紫花苜蓿(MedicagosativaL.)為豆科(Leguminosae)蝶形花亞科(Papilionoideae)車軸草族(Trib. Trifolieae)苜蓿屬(MedicagoL.)植物,是當今世界分布最廣、應用最多的栽培牧草之一[1],被譽為“牧草之王”。紫花苜蓿的營養價值很高,富含蛋白質、維生素和各種礦物質,是迄今發現對人體健康營養最全面的植物之一[2-3]。紫花苜蓿原產于西域各國,始從大宛傳入,中國歷代本草均有記載,在我國有兩千多年的栽培歷史[4]。《本草綱目》中記載:“長安中乃有苜蓿園,北人甚重之,江南不甚食之”[5]。《名醫別錄》將其列為菜部上品,稱其“味苦、平,無毒,主安中,利人”,具有清熱解毒、涼血通淋、益氣健脾溫腎的功效[6]。近年來,越來越多研究者認識到其在農牧業、食品保健和醫藥領域蘊藏的重要價值,逐步開始對紫花苜蓿進行深入研究[7]。本文對紫花苜蓿化學成分及其生物活性作用的研究進展做了較為系統地概述,為高效充分的利用紫花苜蓿資源和開發出新型高附加值產品提供了依據。

1 紫花苜蓿化學成分研究

紫花苜蓿的莖葉、種子和根等部位富含多種化學成分[1],主要包括三萜皂苷類、黃酮類、香豆素和生物堿等。國內外學者對紫花苜蓿化學成分的研究報道較多,本文總結歸納如下。

1.1 三萜皂苷類化學成分

三萜皂苷多為白色無定型粉末,易溶于甲醇等有機溶劑,與水混合易產生泡沫。據文獻報道[8-9],紫花苜蓿中含有大量三萜皂苷類化學成分,已知發現的均為齊墩果烷(oleananc)型五環三萜,其3位均為β構型的羥基或苷化,28位多連接羧基并常苷化。苜蓿屬三萜皂苷多為醇苷,少數為酯苷,也的皂苷中既有醇苷鍵,又有酯苷鍵。有研究表明,紫花苜蓿葉和根中的皂苷生物合成途徑有所區別。紫花苜蓿葉的溶血性皂苷生物合成途徑中,β-amyrin合成酶的表達與基因表達相關。然而,在根中溶血性皂苷和非溶血性皂苷生物合成過程中,β-amyrin合成酶的表達與基因表達相關[10]。

紫花苜蓿中含有的皂苷成分存在于植物的各個部位(根、莖、葉、種子),尤其根部含量最為豐富[10]。到目前為止從紫花苜蓿中分離得到皂苷有60多種[10-14],分離得到的化合物結構骨架分別為:苜蓿酸型(medicagenic acid)、常春藤皂苷元型(hederagenin)、貝萼皂苷元型(bayogenin)、大豆皂苷元型(soyasapogenol)、zanhic acid型。組成三萜皂苷的糖有葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、芹糖。這些糖多為吡喃糖,也有呋喃糖。另外根據皂苷分子中糖鏈的多少,可分為單糖鏈皂苷(monodesmosidic saponins)、雙糖鏈皂苷(bisdesmosidic saponins)和三糖鏈皂苷(tridesmosidic saponins)[10]。具體類型及化學結構如圖1所示:

圖1 紫花苜蓿三萜皂苷類化學成分母核Fig.1 Triterpenoids from roots of Medicago sativa L.

1.1.1 苜蓿酸型三萜皂苷 在植物界三萜皂苷及其衍生物母核大多由30個碳原子組成,三萜皂苷母核又以四環三萜和五環三萜為主,而目前分離得到的紫花苜蓿皂苷類化學成分母核都為齊墩果烷型[10]。其中,苜蓿酸型三萜皂苷含量較其它幾類母核含量略高,而且根部的皂苷含量遠大于紫花苜蓿莖葉部分的皂苷含量[10]。苜蓿酸型三萜皂苷結構如表1所示:

表1 紫花苜蓿苜蓿酸型三萜皂苷Table 1 Medicagenic acid saponins isolated from Medicago sativa L.

續表

1.1.2 常春藤皂苷元型三萜皂苷 常春藤皂苷元型三萜皂苷與苜蓿酸型三萜皂苷主要區別在于其28位連有-COOH基團,而苜蓿酸型三萜皂苷28位一般多連有糖鏈基團[10]。在苜蓿根總皂苷中,常春藤皂苷元型三萜皂苷含量占比18%僅次于苜蓿酸型皂苷含量占比68%,同時常春藤皂苷元型三萜皂苷在根中的含量高于在莖葉中的含量1%[10]。有研究表明,皂苷的溶血作用與其結構類型有一定的相關性,常春藤型皂苷與苜蓿酸型皂苷比其它種類皂苷有較強的溶血作用[11]。常春藤皂苷元型三萜皂苷結構如表2所示。

表2 紫花苜蓿常春藤皂苷元型三萜皂苷Table 2 Hederagenin acid saponins isolated from Medicago sativa L.

1.1.3 貝萼皂苷元型三萜皂苷 貝萼皂苷元型三萜皂苷母核與常春藤皂苷元型三萜皂苷母核類似,二者最大的不同在于貝萼皂苷元型三萜皂苷母核2位多連有羥基[10,12]。貝萼皂苷元型三萜皂苷結構如表3所示。

表3 紫花苜蓿貝萼皂苷元型三萜皂苷Table 3 Bayogenin saponins isolated from Medicago sativa L.

1.1.4 大豆皂苷元型三萜皂苷 紫花苜蓿地上部分和根部提取的皂苷水解產物中含有大豆皂苷元型三萜皂苷,與其他皂苷元母核的區別一般在于21位,22位易連有取代基[10-12]。有研究表明,大豆皂苷元型三萜皂苷因其24位沒有羥基取代,所以并沒有溶血作用,這一特點也是此類型皂苷與其他類型皂苷最大的區別之一[10-11]。大豆皂苷元型三萜皂苷結構如表4所示。

表4 紫花苜蓿大豆皂苷元型三萜皂苷Table 4 Soyasapogenol saponins isolated from Medicago sativa L.

1.1.5 Zanhic acid型三萜皂苷 Zanhic acid型三萜皂苷在地上部分含量較高,含量高達25%,而根部含量較低,僅僅占根部總皂苷含量的1%[10]。Zanhic acid型皂苷與其他種類皂苷最大的區別在于16位連有羥基,Zanhic acid型三萜皂苷結構如表5所示。

表5 紫花苜蓿Zanhic acid型三萜皂苷Table 5 Zanhic acid saponins isolated from Medicago sativa L.

1.2 黃酮類化學成分

黃酮類化合物是一類天然具有抗氧化活性的化合物,廣泛存在于植物體內。到目前為止,從紫花苜蓿中分離得到的黃酮類化學成分將近50余種,這些物質具有抗氧化,延緩衰老、提高機體免疫力、調節心血管功能、協同雌激素作用以及抗癌功效。紫花苜蓿黃酮母核可分為黃酮及其苷類、異黃酮類、異黃烷及其苷類、查耳酮類、二氫黃酮類等[10]。

1.2.1 黃酮及其苷類 據報道,紫花中黃酮類成分的基本母核多為芹菜素、木犀草素、金圣草黃素、小麥黃素、苜蓿素,其糖基部分以葡萄糖或葡萄糖醛酸為主[10]。部分結構如表6所示。

表6 紫花苜蓿黃酮及其苷類化學成分Table 6 Flavones isolated from Medicago sativa L.

1.2.2 異黃酮及其苷類 有文獻報道,紫花苜蓿異黃酮類可以通過調節體液免疫和增強非特異性免疫來提高T細胞、NK細胞和K細胞的免疫機能以改善機體免疫功能[18],部分結構如表7所示。

表7 紫花苜蓿異黃酮及其苷類化學成分Table 7 Isoflavones isolated from Medicago sativa L.

1.2.3 二氫黃酮及其苷類 有文獻報道,應用聯合逆流色譜法和液相色譜的一種新穎制備分離技術從紫花苜蓿中制備出具有抗氧化活性的二氫黃酮類化合物[19],結構如表8所示。

圖2 紫花苜蓿黃酮類化學成分母核Fig.2 Flavonoids isolated from Medicago sativa L.

表8 紫花苜蓿二氫黃酮及其苷類化學成分Table 8 Flavonone isolated from Medicago sativa L.

1.2.4 異黃烷類 目前,文獻報道從紫花苜蓿中分離得到的異黃烷類有三個[20],部分結構如表9所示。

表9 紫花苜蓿異黃烷及其苷類化學成分Table 9 Isoflavans isolated from Medicago sativa L.

1.2.5 美迪紫檀素及其苷類 文獻報道[14]從紫花苜蓿中分離得到的化合物有:美迪紫檀素(medicarpin)、4-methoxymedicarpin、methylnissolin(10-methoxymedicarpin)、美迪紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷、美迪紫檀素-3-O-glucoside-6′-O-malonate等,部分結構如表10所示。

表10 美迪紫檀素及其苷類化學成分Table 10 Medicarpin isolated from Medicago sativa L.

1.2.6 查爾酮類 有文獻報道從紫花苜蓿地上部分分離得到大量具有降血脂以及抗血管生成活性的黃酮類化學成分[23],部分化合物結構如圖3所示。

圖3 紫花苜蓿查爾酮類化學成分Fig.3 Chalcones isolated from Medicago sativa L.

1.3 香豆素類化學成分

香豆素化學名稱:2H-1-benzopyran-2-one,即苯并α-吡喃酮,或1,2-苯并α-吡喃酮。香豆素可看作是鄰羥基肉桂酸的內酯,具芳香氣味。母核上取代基及其位置的不同,將香豆素分為簡單香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素等[24]。其中,coumestans型結構母核如圖4所示。

圖4 紫花苜蓿香豆素類化學成分Fig.4 Coumestans isolated from Medicago sativa L.

從紫花苜蓿中分離得到的香豆素類成分母核均為coumestan型結構[25-26],結構如表11所示。

表11 香豆素類化學成分Table 11 Coumestans isolated from Medicago sativa L.

1.4 生物堿類化學成分

生物堿,又名植物堿,是一類含氮的有機堿性化合物。生物堿多數結構復雜,有含氮雜環,只有少數生物堿為結構簡單的胺類化合物。大部分生物堿能與有機酸結合以鹽的形式存在,但極少數生物堿則以酰胺和糖苷以及有機酸酯的形式存在[27]。紫花苜蓿中的生物堿大多數為氨基酸類衍生物,具有吲哚環、吡啶環和吡咯環的結構[28],結構如圖5所示。

圖5 紫花苜蓿生物堿類化學成分Fig.5 Alkaloids isolated from Medicago sativa L.

1.5 其它化學成分

苜蓿中還存在著大量的其他營養成分如苜蓿多糖。另外,苜蓿葉蛋白營養成分豐富,包含多種人類必須氨基酸[29]。含有的揮發油類成分主要是醇酚類、烯烴、烷烴和醛酮類[2]。除此之外,苜蓿中含有多種天然素,包括葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素和類胡蘿卜素等[2]。近年來,人們對苜蓿高附加值產品開始進行深入研究與開發[30],以苜蓿為主要原料和輔料的功能性食品逐步被大家所認可。

2 紫花苜蓿生物活性研究進展

在阿拉伯及西方國家,紫花苜蓿被稱為“植物之父”、“生命之草”。我國民間常有“用飼牛草,嫩時人兼食之”之說。現代醫學研究發現紫花苜蓿中的化學成分具有抗菌、殺蟲、抗氧化、減少動脈硬化、預防心血管病、提高免疫力和抗癌等功效[10],對病體有極好的康復效果[29]。

2.1 抗菌、殺蟲作用

2.2 抗氧化作用

2.3 降血脂、抗動脈粥樣硬化的作用

脂質代謝是動物機體重要活動之一。研究報道,動物飼糧中添加苜蓿草粉能調控機體的脂質代謝。紫花苜蓿總皂苷能將小鼠血清TCH、TG、LDL-C含量顯著降低,HDL-C含量有所增高,低劑量組血脂變化不明顯[44]。Pietrzak等[45]發現苜蓿提取物能顯著改善血脂參數;總膽固醇水平降低和低密度脂蛋白降低。王先科等[46]研究發現降低機體內膽固醇含量的原因可能與下調肝臟ACAT-2的表達,同時降低體內對外源膽固醇的吸收有關。紫花苜蓿皂苷對機體內的脂質平衡有一定作用,能起到明顯的預防和治療作用。有研究者通過實驗初步探究皂苷對大鼠膽固醇代謝的作用機制[47],其實驗設計將SD大鼠隨機分成4組:正常對照組、皂苷組、高脂模型組和高脂皂苷組,分別飼喂給藥,實驗周期為四周,進行血液和組織樣本的采集,測定血清脂類相關指標;第四周末,與正常對照組相比較,皂苷組顯著降低高血脂大鼠體重、肝臟系數,可以降低血清中總膽固醇含量,以上實驗結果說明皂苷可以調節機體內膽固醇分布。

2.4 增強免疫力作用

有報道顯示飼料中添加苜蓿成分對機體的免疫性能存在影響。在動物日糧中,添加一定比例的苜蓿會影響動物的生產性能[48],有促進仔豬的免疫調節、加強仔豬抗病能力的作用;通過觀察在飼料中添加苜蓿對生長豬的消化能、代謝能及氨基酸標準回腸消化率的影響情況,可為開發利用具有潛在藥用價值的紫花苜蓿食品添加劑,提供前期實驗基礎[49]。現有實驗結果表明,在飼糧中添加一定量的苜蓿皂苷有利于降低血清、肝臟和肌肉中的膽固醇含量,調節仔豬的血脂代謝,并能提高仔豬的抗氧化性能和免疫機能,但其主要的物質基礎和生物活性機制尚不明確[50]。

2.5 抗腫瘤作用

目前,癌癥和腫瘤是威脅人類健康的一個主要因素。近些年來,對紫花苜蓿抗腫瘤作用的研究進一步深入。有研究證明紫花苜蓿可以提高機體的免疫調節、誘導腫瘤細胞死亡和逆轉腫瘤細胞多藥耐藥性,其中起到主要作用的成分為黃酮類化合物和三萜皂苷類化合物[51-52]。左曉昕[53]等在對紫花苜蓿黃酮化合物抗腫瘤活性研究中發現,苜蓿黃酮可以使人胃癌細胞MGC-803凋亡,抑制細胞增殖,生長抑制率增高,同時苜蓿的皂苷與皂苷元具有的防癌抗癌功效也得到了證實。Paparella等[54]初步篩選出紫花苜蓿7種皂苷和3種苷元進行不同腫瘤細胞毒活性測試,為了進一步研究它們的構效關系,首次利用透射電子顯微鏡(TEM)分析皂苷對植物細胞壁完整性的影響;而且通過紫花苜蓿葉中提取物在幾種敏感和多藥耐藥性腫瘤細胞系上評估其細胞毒作用。在近期的這項研究中,Gatouillat等[55]通過對紫花苜蓿甲苯提取物的分離,得到3種三萜類化合物和5種黃酮類化合物,其中(-)-美迪紫檀素,(-)-melilotocarpan E,millepurpan,麥黃酮和甲氧基木犀草素在P388以及P388/DOX細胞中顯示明顯的細胞毒作用。紫花苜蓿在體外有明顯的抗腫瘤作用,在預防和治療癌癥方面均有很好的功效,采用日常飲食的方式,也能起到一定的抗癌保健效果。

3 展望

我國紫花苜蓿資源極其豐富,價格低廉,研究開發具有極為廣闊的前景。在一些食品中已經得到廣泛的應用,在一些保健品和藥品的開發上也成為一些學者研究的熱點,如苜蓿掛面、苜蓿灌腸、苜蓿罐頭制品在市面上經常出現。除此之外,苜蓿飲料和苜蓿茶也早已上市銷售被大家認可[56]。隨著各化學成分被陸續鑒定出來,研究的重點和難點應依據不同藥理活性進行相關功能性食品的研發。苜蓿開發具有巨大潛在價值,尚需要優化加工工藝,保證有效成分不被破壞,更全面更清晰的結合新型藥理活性,形成系列功能食品,將產品生產多元化,實現對苜蓿資源的深層次開發。

[1]趙海福,趙強. 國產苜蓿種類與分布及化學成分的研究[J]. 中國奶牛,2013,33(14):53-58.

[2]荊常亮. 紫花苜蓿總黃酮的提取、純化及其抗氧化活性研究[D]. 中國農業科學院,2016.

[3]武海燕. 紫花苜蓿化學成分的研究[J]. 內蒙古石油化工2010,33(24):18-19.

[4]張曉娜,宋書紅,陳志飛,等.紫花苜蓿葉、莖產量及品質動態[J]. 草業科學,2016,33(4):713-721.

[5]陳立強,師尚禮. 42份紫花苜蓿種質資源遺傳多樣性的SSR分析[J]. 草業科學,2015,32(3):372-381.

[6]楊青川,康俊梅,張鐵軍,等.苜蓿種質資源的分布、育種與利用[J]. 科學通報,2016,61(2):261-270.

[7]蔡海霞,楊浩哲,王躍卿,等. 17個紫花苜蓿品種生產性能和營養成分分析[J]. 中國草食動物科學,2016,36(6):30-33.

[8]Tava A,Oleszek W,Jurzysta M,et al. Alfalfa saponins and sapogenins:Isolation and quantification in two different cultivars[J]. Phytochemical Analysis,2010,4(6):269-274.

[9]Tava A,Scotti C,Avato P. Biosynthesis of saponins in the genusMedicago[J]. Phytochemistry Reviews,2011,10(4):459-469.

[10]Katarzyna R,PaweP,Olga W,et al.Medicagosativaas a source of secondary metabolites for agriculture nd pharmaceutical industry[J]. Phytochemistry Letters,2017,20:520-539.

[11]Montanari R,Capelli D,Tava A,et al. Screening of saponins and sapogenins fromMedicagospecies as potential PPARγagonists and X-ray structure of the complex PPARγ/caulophyllogenin[J]. Scientific Reports,2016,6:27658-27668.

[13]Huhman D V,Sumner L W. Metabolic profiling of saponins inMedicagosativaandMedicagotruncatulausing HPLC coupled to an electrospray ion-trap mass spectrometer[J]. Phytochemistry,2002,59(3):347-360.

[14]Witkowska H E,Biay Z,Jurzysta M,et al.Analysis of saponin mixtures from alfalfa(MedicagosativaL.)roots using mass spectrometry with MALDI techniques[J]. Natural Product Communications,2008,3(9):1395-1410.

[15]Stochmal A,Simonet A M,Macias F A,et al. Acylated apigenin glycosides from alfalfa(MedicagosativaL.)var. Artal[J].Phytochemistry,2001,57(8):1223-1226.

[16]Stochmal A,Piacente S,Pizza C,et al. Alfalfa(MedicagosativaL.)flavonoids. 1.Apigenin and luteolin glycosides from aerial parts[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,2001,49(2):753-758.

[17]Stochmal A,Simonet A M,Macias F A,et al. Alfalfa(MedicagosativaL.)flavonoids. 2.Tricin and chrysoeriol glycosides from aerial parts[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2001,49(11):5310-5314.

[18]趙婭敏,馬好文,孟淑娟. 紫花苜蓿中黃酮類化學成分及其生物活性研究進展[J]. 中草藥,2013,44(22):3245-3252.

[19]Liang J,Yang Z,Cao X,et al. Preparative isolation of novel antioxidant flavonoids of alfalfa by stop-and-go counter-current chromatography and following on-line liquid chromatography desalination[J]. Journal of Chromatography A,2011,1218(36):6191-6499.

[20]Noguchi A,Yoshihara T,Ichihara A,et al. Ferric phosphate-dissolving compound,alfafuran,from alfalfa(MedicagosativaL.)in response to iron-deficiency stress[J]. Bioscience Biotechnology & Biochemistry,2008,58(12):2312-2313.

[21]Flamini G,Cioni P L,Morelli I,et al. Composition of the essential oil ofMedicagomarinaL. from the coastal dunes of Tuscany,Italy[J]. Flavour & Fragrance Journal,2003,18(5):460-462.

[22]Chung I M,Seigler D,Miller D A,et al. Autotoxic compounds from fresh alfalfa leaf extracts:identification and biological activity[J]. Journal of Chemical Ecology,2000,26(1):315-327.

[23]Ma Q G,Li T,Wei R R,et al. Characterization of chalcones fromMedicagosativaL. and their hypolipidemic and anti-angiogenic activities[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2016,64(43):8138-8145.

[24]鄭玲,趙挺,孫立新. 香豆素類化合物的藥理活性和藥代動力學研究進展[J]. 時珍國醫國藥,2013,24(3):714-717.

[25]Biggs D R,Shaw G J. Wairol,a new coumestan fromMedicagosativa.[J]. Phytochemistry,1980,19(12):2801-2802.

[26]Elkhrisy E A M,Abdelhafez O M,Khattab A A. Chemical constituents ofMedicagosativaL.[J]. Bulletin of the National Research Centre,1994,19:117-221.

[27]宮爽,孫佳明,田淋淋,等. 天然藥物中生物堿類成分抗腫瘤活性[J]. 吉林中醫藥,2014,34(9):927-931.

[28]Naidu B P,Paleg L G,Jones G P. Nitrogenous compatible solutes in drought-stressedMedicago,spp[J]. Phytochemistry,1992,31(4):1195-1197.

[29]蔡遵金,陳愛蓮,趙炎,等. 紫花苜蓿提取物及活性成分研究進展[J]. 草食家畜,2011(1):11-13.

[30]高宇,石杰,云云,等. 苜蓿的藥用功效和開發利用[J]. 畜牧與飼料科學,2011,32(12):25-26.

[32]Chen C H,Chang T C,Chen S Y,et al. Chemical composition and antioxidant,bactericidal,and matrix metalloproteinase inhibition activity of food-related plant[J]. LWT-Food Science and Technology,2017,82(1):411-419.

[33]Chavan SS,Jadhav RS,Khemnar KS,et al. Evaluation of antibacterial activity and phytochemical screening ofMedicagosativaleaves[J]. International Journal of Current Research and Academic Review,2015,3(5):308-313.

[34]李波,孫天穎,于鑫洋. 苜蓿皂苷的抑菌活性和抗氧化特性的研究[J]. 食品研究與開發,2013,34(2):1-2,33.

[35]Abbruscato P,Tosi S,Crispino L,et al. Triterpenoid glycosides fromMedicagosativaas antifungal agents against Pyricularia oryzae[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,2014,62(46):11030-11036.

[36]施偉梅,王妙飛,羅雙慧,等. 超聲波聯合酶法提取紫花苜蓿總黃酮及其抗氧化性能研究[J]. 作物雜志,2015,169(6):64-69.

[37]Wang S,Dong X,Tong J. Optimization of enzyme-assisted extraction of polysaccharides from alfalfa and its antioxidant activity[J]. International journal of biological macromolecules,2013,62(11):387-396.

[38]趙雁,馬向麗,畢玉芬,等. 不同提取系統中分析紫花苜蓿抗氧化酶活性和同工酶的比較[J]. 云南農業大學學報:自然科學,2014,29(5):636-641.

[39]郭金耀,楊曉玲. 苜蓿不同部位提取液的體外抗氧化活性研究[J]. 作物雜志,2013(3):45-48.

[40]劉香萍,王國慶,李國良,等. 響應面法優化提取紫花苜蓿葉總黃酮及其抗氧化活性研究[J]. 中國食品學報,2016,16(4):145-152.

[41]蘇效雙,占今舜,詹康,等. 苜蓿黃酮對體外培養的奶牛乳腺上皮細胞增殖與抗氧化的影響[J]. 草業學報,2015,24(12):139-145.

[42]王國慶,何小娟,孟博,等. 紫花苜蓿中主要黃酮類化合物抗氧化活性研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫,2015(1):109-111.

[43]Jing C L,Dong X F and Tong J M. Optimization of ultrasonic-assisted extraction of flavonoid compounds and antioxidants from Alfalfa using response surface method[J]. Molecules,2015,20(9):15550-15571.

[44]王先科,史瑩華,王成章,等. 苜蓿皂苷對高脂血癥大鼠膽固醇代謝及其相關基因表達的影響[J]. 動物營養學報,2012,24(5):983-990.

[45]Pietrzak K,Grela E R. Influence of alfalfa protein concentrate dietary supplementation on blood parameters of growing-finishing pigs[J]. Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy,2015,59(3):393-399.

[46]王先科,史瑩華,王成章,等. 苜蓿皂甙對高脂血癥大鼠膽固醇代謝及肝臟ACAT-2和HMG-CoAr基因表達的影響[J]. 草業學報,2012,21(3):287-293.

[47]袁德地,史瑩華,王成章,等. 苜蓿皂苷對SD大鼠膽固醇代謝的影響及其分子機理的初步探討[J]. 草業學報,2013,22(5):294-301.

[48]Eklund M,Rademacher M,Sauer W C,et al. Standardized ileal digestibility of amino acids in alfalfa meal,sugar beet pulp,and wheat bran compared to wheat and protein ingredients for growing pigs[J]. Journal of Animal Science,2014,92(3):1037.

[49]Chen,Liang,Li-xiang,et al. Effect of graded levels of fiber from alfalfa meal on apparent and standardized ileal digestibility of amino acids of growing pigs[J]. Journal of Integrative Agriculture,2015,14(12):2598-2604.

[50]王成章,王彥華,史瑩華,等. 苜蓿皂苷對斷奶仔豬脂質代謝、抗氧化和免疫的影響[J]. 草業學報,2011,20(4):210-218.

[51]張羽男,黃淼,張宇,等.紫花苜蓿總黃酮的微波輔助提取及體外抗腫瘤活性研究[J]. 時珍國醫國藥,2014,25(6):1300-1302.

[52]張羽男,劉立新,張強,等. 紫花苜蓿皂苷抗腫瘤活性研究[J]. 時珍國醫國藥,2013,24(5):1035-1036.

[53]左曉昕,趙倩明,隋雁南,等. 紫花苜蓿黃酮對人胃癌MGC-803細胞周期和凋亡的影響[J]. 時珍國醫國藥,2016,27(9):2104-2106.

[54]Paparella S,Tava A,Avato P,et al. Cell wall integrity,genotoxic injury and PCD dynamics in alfalfa saponin-treated white poplar cells highlight a complex link between molecule structure and activity[J]. Phytochemistry,2015,111:114-123.

[55]Grégory Gatouillat,Abdulmagid Alabdul Magid,Eric Bertin,et al. Cytotoxicity and apoptosis induced by alfalfa(Medicagosativa)leaf extracts in sensitive and multidrug-resistant tumor cells[J]. Nutrition & Cancer,2014,66(3):483-491.

[56]余凡,葛亞龍,楊恒拓,等. 苜蓿的營養價值及其在食品加工中的應用[J]. 包裝與食品機械,2013,31(6):51-54.