GA3與CPPU對葡萄果銹相關物質合成及基因表達的影響

馮 嬌， 侯旭東， 董禮花， 陶建敏

(1.南京農業大學園藝學院，江蘇 南京 210095； 2.灌南縣蔬菜辦公室，江蘇 灌南 223500)

陽光玫瑰(VitislabruscanaBailey×V.viniferaL . Shine Muscat)是二倍體鮮食葡萄品種[1]，引自于日本，因其果粒較大，且品質優良，受到大量葡萄生產者和消費者的歡迎。但中國大多數地區栽培的陽光玫瑰成熟時漿果表面卻出現微小的紅褐色斑點，稱為果銹，影響果面光潔度，降低了葡萄的市場價值，嚴重影響經濟效益。果銹是一層褐色的木栓化次生保護組織，形狀為條狀或不規則銹斑，主要在果皮表面發生[2-4]。砂梨和蘋果上的果銹是由生長應力和外在因素導致微觀裂隙，隨后通過外表皮細胞的細胞壁內側木栓質的積累形成高塑性的外周膜引起的果皮生理性紊亂[5]。

果銹是果實成熟期的一種生理紊亂現象?；ㄆ诙嘤?、低溫、高濕、植株營養失調、病蟲害、用藥不當、機械損傷、果園通風不良等都是誘發果銹生成的外界環境因素[6]。Suehiro[7]等推測白藜蘆醇等酚類化合物、PPO等多酚氧化酶基因與葡萄果銹生成相關；研究結果表明，咖啡酸-O-甲基轉移酶基因(COMT)和肉桂酸-4-羥化酶(C4H酶)基因等木栓質合成基因的表達加強，外表皮細胞的細胞壁內側木栓質的積累，形成果銹[8-10]。從果銹的形成途徑來看，果銹的重要組分木栓層的形成與木質素合成有關[5,11]，木質素的合成，促進木栓形成層出現，從而在一定程度上促進銹斑的形成[12]。

GA3(赤霉素)和CPPU(氯吡脲)作為植物生長調節劑在葡萄的生產栽培中已有廣泛應用。GA3和CPPU的使用顯著抑制果銹的生成，提高葡萄的果實品質[13-14]。目前已有研究結果表明，外源GA3可防止蘋果果銹形成[15]，適當濃度的外源綠原酸處理可顯著降低金冠蘋果果銹指數[16]，套袋也可以在一定程度上控制蘋果、梨、葡萄果實表面果銹的生成，降低果銹發生程度，提高果面光潔度[17]。馮嬌等從轉錄組測序角度，初步探究了GA3和CPPU抑制葡萄果銹生成的機理[3]，本研究結合之前的測序結果以及相關文獻，同樣以GA3和不同濃度的CPPU組合處理陽光玫瑰葡萄果穗，通過體視顯微鏡觀察同一成熟時期不同處理的葡萄果皮特征，從果銹生成相關酚類物質和木質素含量等生理方面及相關基因表達等角度闡述GA3和CPPU對果銹生成的影響，探究該品種的防銹技術，旨在為新型品種陽光玫瑰的標準化生產栽培提供理論依據和技術指導。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗于2016年 5-10月在南京農業大學湯山葡萄實驗基地進行。供試品種為7年生陽光玫瑰葡萄，采用平棚架避雨栽培，株行距為 3.0 m×6.0 m，“H”型樹形，土、肥、水管理及病蟲害防治同常規。

1.2 方法

1.2.1 田間處理與樣品采集 選取樹體生長勢基本一致的陽光玫瑰葡萄樹，處理前將花穗修剪至距離穗尖約6 cm的位置。于花后2周分別用25 mg/L GA3(處理Ⅰ)，25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU(處理Ⅱ)，25 mg/L GA3+10 mg/L CPPU(處理Ⅲ)，25 mg/L GA3+15 mg/L CPPU(處理Ⅳ)浸蘸花穗 5～10 s。處理前集中疏果，每穗大小及遮陰情況保持一致。“H”型樹形的每一個主蔓作為一個處理，4個處理隨機分布于6棵樹，每個處理3個主蔓，余下主蔓用清水處理作為對照(CK)。

果實進入轉色期(7月31日)開始，每隔7 d取1次樣品，從每個處理果穗的上、中、下部隨機取50粒大小均勻、成熟度一致的果實，用冰袋帶回實驗室，剝離果皮，液氮速凍，-70 ℃冷凍保存，用于熒光定量PCR試驗；待果實完全成熟時(9月18日)，采集5個處理的葡萄果實，通過體視顯微鏡觀察果銹發生情況，取果皮置于-70 ℃冰箱中保存，用于測定白藜蘆醇、香豆酸、丁香酸等酚類物質及木質素含量等。

1.2.2 試劑與儀器 赤霉酸(上海同瑞生物科技有限公司產品)，CPPU(四川省蘭月科技有限公司產品)，Na2CO3、冰乙酸、溴乙酰、高氯酸、Folin-Ciocalteu試劑、甲醇分析純、乙酸乙酯、鹽酸、抗壞血酸、甲醇(色譜純)、乙醇、沒食子酸、香豆酸、咖啡酸、阿魏酸、兒茶素、丁香酸和白藜蘆醇標品均購自上海源葉生物公司，體視顯微鏡(LEICA S8AP0)，酶標儀(德國TECAN公司產品)，SB-5200DT超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司產品)，超高效液相色譜儀(美國Waters公司產品)等。

1.2.3 果銹指數統計 參照張勃等[12]的方法，從7月31日起，對CK和各處理果實分別進行分級和銹斑率統計。根據果銹程度將果實分級：無銹果為0級，果銹面積﹤5%為1級，果銹面積 6%～15%為2級，果銹面積 16%～25%為3級，果銹面積>25%為4級。

果銹指數=(0級×a+1級×b+2級×c+3級×d+4級×e)×100/(4級×n)。其中a、b、c、d、e分別為0～4級果的統計數，n為樣本總數。

1.2.4 體視顯微鏡觀察 利用體視顯微鏡(放大25倍)觀察同一成熟時期(9月18日)CK和4種不同處理陽光玫瑰葡萄果實的果皮特征，并拍照記錄果皮果銹的發生情況。

1.2.5 單體酚類物質含量測定 采用反相高效液相色譜法測定陽光玫瑰葡萄果皮中單體酚類物質的含量。分別取3 g同一成熟時期(9月18日)CK和不同處理的陽光玫瑰葡萄果皮，研磨后溶于25 ml 100%甲醇中，加入80 mg抗壞血酸(溶于15ml純水中)，再加入10 ml 6 mol/L鹽酸，將所有溶液置于100 ml錐形瓶中，超聲波降解處理2 min，充氮氣排出錐形瓶內的空氣，密封后置于35 ℃ 提取16 h后，12 000 r/min、4 ℃ 離心20 min，吸取上清液，40 ℃ 旋轉蒸發除去甲醇，用30 ml乙酸乙酯溶解后先萃取1次，之后再用20 ml乙酸乙酯萃取2次，合并所有萃取液，在40 ℃ 條件下旋轉蒸發至干再溶于5 ml 50%甲醇(色譜純)中，置于-70 ℃ 條件下避光保存。將經過處理的果皮樣品在確定的色譜條件下進樣，根據標準曲線定量。

1.2.6 白藜蘆醇含量測定 采用高效液相色譜法測定陽光玫瑰葡萄果皮中白藜蘆醇含量。分別稱取1 g同一成熟時期(9月18日)的CK和不同處理的果皮樣品，研磨后迅速與25 ml 80%的乙醇混勻，在60 ℃ 水浴鍋中水浴30 min，4 ℃ 8 000 r/min離心15 min，吸取上清液。在液氮中速凍至固態后，放入冷凍干燥器中凍干至粉末狀態(避光)，溶解在2 ml 50%的乙醇中，轉移至2 ml離心管中，離心后吸取上清液，儲存于-70 ℃ 備用。上樣前用1.0 ml注射器吸取處理好的樣品通過0.2 μm的有機系濾膜過濾，使用標準曲線法定量。

1.2.7 總酚含量測定 總酚含量的測定采用Folin-Ciocalteu試劑法。分別取同一成熟時期(9月18日)CK和不同處理的果皮經液氮研磨后，準確稱取2 g于50 ml錐形瓶中，加入10 ml甲醇(分析純，含2% HCl)，在室溫、黑暗條件下提取24 h，4 ℃、12 000 r/min離心10 min，吸出上清液。吸取200 μl上清液于5.0 ml的離心管中，加入1.0 ml的Folin-Ciocalteu試劑，0.8 ml 7.5%的Na2CO3溶液，緩慢攪拌反應30 min后，用酶標儀在765 nm處比色測定吸光度OD值。沒食子酸作標準品制作標準曲線。

1.2.8 木質素含量測定 樣品制備：將同一成熟時期(9月18日)CK和不同處理的陽光玫瑰葡萄果皮用剪刀剪碎，然后將樣品絕對烘干，研成粉末，用電子天平準確稱取果皮0.02 g各3份。將制備好的樣品粉末放入5 ml試管中，加入25%的溴乙酰-乙酸溶液(質量比)2.00 ml和高氯酸0.08 ml，將管口密封，于70 ℃ 恒溫水浴30 min，每隔10 min振蕩試管。取四分之一的反應液，移入已裝有1.0 ml 2 mol/L NaOH和2.5 ml冰乙酸混合液的容量瓶內，振蕩充分混勻并用冰乙酸定容至10.0 ml。以冰乙酸為空白溶液，用酶標儀對樣品溶液在波長260 nm處進行掃描測定吸光度。

參照Hatfield等[18]的方法，Lignin=Abs×liters×100%/Wsample，Lignin為木質素含量，Abs為樣品溶液木質素吸光度，Liters為樣品溶液定容體積(ml)，Wsample為樣品干質量(g)。

1.2.9 實時熒光定量PCR 用RNA試劑盒(Foregene)提取果皮總RNA，以總RNA為模板利用Takara Prime ScriptTMRT-PCR試劑盒反轉錄合成cDNA，并將合成后的cDNA用無菌ddH2O(雙蒸水)稀釋，濃度稀釋至150 μg/μl。實時熒光定量PCR以VvUbiquitin為內參基因(表1)。實時熒光定量PCR 20 μl反應體系為：Takara SYBR PremixExTaq(TaKaRa)10.0 μl，上游引物和下游引物各0.4 μl，稀釋10倍的cDNA 1.0 μl和8.2 μl去離子水。反應程序如下：95 ℃預變性4 min；95 ℃變性20 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸40 s，40個循環。每個樣品做3次平行反應，運用ABI7300軟件和2-△△Ct的方法計算相對表達量。

表1 實時熒光定量PCR引物序列

1.3 統計分析

所有測定重復3次，數據經Excel 2007和SPSS16.0進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 陽光玫瑰不同處理間果銹指數的比較

從7月31日開始，統計不同處理果面的果銹情況，并計算果銹指數。7月31日至8月14日CK和不同處理果面都沒有果銹發生。從8月16日起，極少數CK果面開始出現少量銹斑，隨著葡萄果實成熟，出現果銹的葡萄變多，銹斑面積增大，果銹指數急劇增長，直至9月中旬CK的果銹指數趨于穩定。處理Ⅰ自8月25日起果面出現少量銹斑，伴隨成熟，果銹指數呈上升趨勢。處理Ⅱ自8月31日起少量果實果面出現極少銹斑，不同于CK和處理Ⅰ，處理Ⅱ的葡萄果實銹斑面積小，出現果銹的葡萄少，果銹指數上升趨勢相對小。處理Ⅲ和處理Ⅳ的陽光玫瑰直至9月中旬開始成熟時才有極少量果實果面出現果銹，果銹指數很低，幾乎可以忽略不計(圖1)。

CK：對照；處理Ⅰ：25 mg/L GA3；處理Ⅱ：25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU；處理Ⅲ：25 mg/L GA3+10 mg/L CPPU；處理Ⅳ：25 mg/L GA3+15 mg/L CPPU。圖1 陽光玫瑰不同處理間果銹指數變化動態Fig.1 The dynamic change of fruit russet index of Shine Muscat under different treatments

2.2 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮特征差異

圖2顯示，同一成熟時期不同處理的陽光玫瑰果皮表面存在顯著差異。CK、處理Ⅰ和處理Ⅱ的葡萄果皮均有果銹出現，且果銹依次減少，處理Ⅲ和處理Ⅳ的葡萄果皮幾乎看不到果銹。從果皮顏色來看，CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ的葡萄果皮顏色從黃色逐漸到黃綠色。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。圖2 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄在體視顯微鏡下果皮特征差異Fig.2 Differences in peel characteristics of Shine Muscat grapes with different treatments at the same maturity stage under stereomicroscope

2.3 GA3與不同濃度的CPPU處理對陽光玫瑰葡萄果銹相關基因表達的影響

由圖3可知，陽光玫瑰葡萄果實發育過程中，從8月21日開始，對照果實PAL基因的表達水平急劇上升，此時CK果實表面開始出現果銹，在果實成熟時PAL基因的表達達到最大峰值，之后由于過于成熟，表達水平相對下降；處理Ⅰ和處理ⅡPAL基因在8月28日表達水平急劇上升，此時處理Ⅰ果實表面已出現銹斑，處理Ⅱ果實表面開始出現銹斑，且與CK果實相比，處于同一成熟時期時，與對照相比，PAL基因表達量相對降低；處理Ⅲ和處理Ⅳ在果實成熟過程中，基因表達水平呈緩慢上升趨勢，至果實成熟時表達量變化幅度不大，這與成熟時期處理Ⅲ和處理Ⅳ葡萄果實表面也未出現果銹有關。

圖4顯示，陽光玫瑰葡萄果實成熟過程中，白藜蘆醇合成酶(RS)基因的表達量緩慢上升，CK果實成熟期表達水平最高。與對照相比，處理Ⅰ的葡萄果實RS基因的表達水平相對降低，在8月14日、8月28日和9月4日之間差異顯著，其余時期差異不顯著；相比于對照，處理Ⅱ表達水平下降，差異顯著；相比于對照，處理Ⅲ和處理Ⅳ表達水平大幅下降，差異極顯著。表明，RS基因的表達趨勢與果實成熟進程相一致。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。圖3 果實成熟過程中PAL基因的表達水平變化Fig.3 Changes of expression level of PAL gene during fruit maturation

2.4 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮單體酚類物質含量差異

反相超高效液相色譜結果(表2)顯示，香豆酸、丁香酸和阿魏酸整體含量較高，變化幅度相對較大；沒食子酸、兒茶素含量偏低，咖啡酸含量最低。隨著CPPU處理濃度增大，香豆酸、咖啡酸、丁香酸含量呈下降趨勢，阿魏酸含量先降后升。CK兒茶素含量最低，處理Ⅰ和處理Ⅱ的兒茶素含量上升，處理Ⅲ和處理Ⅳ果皮兒茶素含量相對降低，但仍高于CK。CK和處理Ⅰ沒食子酸含量無顯著差異，與處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ含量差異顯著，呈先增大后降低的趨勢。6種單體酚的標樣色譜圖及經5種不同處理后葡萄果皮中6種單體酚含量的色譜圖如圖5。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。圖4 果實成熟過程中RS基因的表達水平變化Fig.4 Changes of expression level of RS gene during fruit maturation

表2 UPLC測得的陽光玫瑰葡萄果皮單體酚類物質含量

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。1:沒食子酸;2:香豆酸;3:兒茶素;4:咖啡酸;5:丁香酸;6:阿魏酸。圖5 標樣及不同處理色譜圖Fig.5 Chromatogram of different treatment and standard sample

2.5 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮白藜蘆醇含量差異

超高效液相色譜結果(圖6)顯示，同一成熟時期，與CK相比，經GA3+CPPU處理的陽光玫瑰葡萄果皮中白藜蘆醇含量降低，處理濃度越大，含量越低，且差異顯著。處理Ⅲ和處理Ⅳ之間差異不顯著，這與不同處理同一成熟時期成熟度不同有關，成熟度越高，白藜蘆醇含量越高。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖6 UPLC測得的不同處理陽光玫瑰葡萄果皮白藜蘆醇含量的差異Fig.6 Difference of resveratrol conent in different treatments of the peel of Shine Muscat grapes by UPLC

2.6 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮總酚含量差異

由圖7可知，同一成熟時期，經過GA3+CPPU處理后的陽光玫瑰葡萄果皮總酚含量下降，與CK相比，處理Ⅰ差異不顯著，處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ差異顯著；處理Ⅰ、處理Ⅱ和處理Ⅲ之間無顯著差異，處理Ⅲ和處理Ⅳ之間無顯著差異。以上結果表明，GA3+CPPU抑制陽光玫瑰葡萄果皮中總酚的合成，抑制作用與處理濃度成正相關。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖7 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮總酚含量差異Fig.7 Difference of total phenolic content in different treatments of the peel of Shine Muscat grapes at the same maturity stage

2.7 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮木質素含量差異

由圖8可知，同一成熟時期，經GA3+CPPU處理后的陽光玫瑰葡萄果皮木質素含量降低。與CK相比，處理Ⅰ無顯著差異，處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ差異顯著；處理Ⅲ和處理Ⅳ之間無顯著差異。結果表明，GA3+CPPU抑制陽光玫瑰葡萄果皮中木質素的合成，濃度增大，抑制作用越顯著,CPPU濃度達到10 mg/L和15 mg/L時，抑制作用不再增強。

CK、處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ見圖1注。不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖8 同一成熟時期不同處理陽光玫瑰葡萄果皮木質素含量差異Fig.8 Difference of lignin content in different treatments of the peel of Shine Muscat grapes at the same maturity stage

3 討 論

從果銹的發生結果來看，葡萄果實達到一定成熟度時才會出現銹斑，未處理的陽光玫瑰果銹更明顯，可能與其成熟度更高有關。這與前人在CPPU推遲脫落酸合成高峰且使其峰值變小上的研究結果相一致[19]。推測CPPU推遲了果實的成熟期，促進IAA 合成，IAA可能抑制果銹生成[11,20]，因而果銹減少，具體機理尚待研究。

GA3搭配不同濃度的CPPU處理陽光玫瑰葡萄果穗，伴隨處理濃度增大成熟期依次推遲，成熟時同一時期CK成熟度最高；與對照相比，處理濃度依次增大，白藜蘆醇含量和總酚含量依次降低，這與孫建平[21]的研究結果一致，高成熟階段的葡萄果實酚類物質生物活性高于低成熟階段的葡萄果實。香豆酸、丁香酸和阿魏酸3種酚酸類物質變化幅度較大，隨著CPPU濃度增大而下降，與總酚含量變化趨勢存在伴隨性?？Х人?、沒食子酸和兒茶素含量變化幅度相對較小，CPPU處理濃度增大，咖啡酸含量降低；CK果皮的兒茶素含量最低，處理Ⅰ和處理Ⅱ的果皮兒茶素含量上升，處理Ⅲ和處理Ⅳ的果皮兒茶素含量相對降低，但仍高于CK；與兒茶素類似，隨處理濃度增大，沒食子酸含量呈先升高后降低的趨勢。這可能是由于CK果皮中一部分兒茶素和沒食子酸最終轉化為木質素，促進木栓形成層出現，進而在一定程度上促進果銹形成，果銹指數升高。

苯丙烷類代謝途徑是植物次生物質代謝中的重要途徑，與酚酸、類黃酮和白藜蘆醇等酚類物質及木質素等許多次生代謝物的合成有關[12]。在蘋果和梨上的研究結果表明，苯丙烷代謝的次級產物代謝途徑參與了果銹形成過程[22]。苯丙烷代謝途徑中，苯丙氨酸在苯丙氨酸解氨酶(PAL)的催化下轉化為肉桂酸，肉桂酸羥化酶(C4H)催化肉桂酸轉化為香豆酸，香豆酸在4-香豆酸-CoA連接酶(4CL)的催化下活化為4-香豆酰-CoA，結合乙酰-CoA在白藜蘆醇合成酶(RS)的催化下合成白藜蘆醇；香豆酸在酶的催化作用下，經咖啡酸、阿魏酸和芥子酸等中間產物，生成香豆醇、松柏醇和芥子醇，依次聚合形成3種木質素單體，最終聚合成苯丙烷合成途徑的終產物——木質素[23-24]。木質素是木栓層形成，果實木質化的標志[25]。果銹是一層木栓化次生保護組織[2]，酚類物質、木質素的含量變化與果銹生成密切相關。

PAL是苯丙烷代謝途徑的起始限速酶，它的轉錄水平直接影響酚類物質和木質素的合成水平[26]。RS是二苯乙烯合酶(STS)中的一類，是白藜蘆醇等芪類化合物合成途徑中特有的酶[27]。在果實成熟過程中，PAL基因表達水平總體呈上升趨勢，果實成熟后有所下降，RS基因表達水平持續上調，與果實成熟進程相一致。果實成熟時期，CK果實成熟度最高，PAL和RS基因表達量呈最大值，對應于CK果實成熟時期總酚、香豆酸等單體酚、白藜蘆醇等酚類物質和木質素含量最高。與CK相比，果實成熟時期，處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ的基因表達水平總體依次呈顯著下降的趨勢，對應于同一成熟時期處理Ⅰ、處理Ⅱ、處理Ⅲ和處理Ⅳ的果實總酚等酚類物質和木質素含量依次下降。同時，各處理葡萄果皮PAL基因的轉錄水平變化趨勢與其表面果銹的出現時間順序相一致。以上結果表明，PAL和RS基因與葡萄果銹出現在一定程度上具有相關性。

從生理生化角度分析，同一成熟時期，CK葡萄果皮酚類物質含量最多，木質素合成最多，促進木栓形成層出現，從而在一定程度上促進果面銹斑形成[28]；處理Ⅰ和處理Ⅱ的陽光玫瑰葡萄果皮酚類物質和木質素含量依次減少，在一定程度上抑制木栓形成層的發生，但果皮表面仍有不同程度的銹斑生成，CPPU濃度加大，果銹顯著減少；處理Ⅲ和處理Ⅳ的葡萄酚類物質和木質素含量很低，木栓層活動弱，果實果面幾乎無銹斑。綜上所述，同一成熟時期，GA3+CPPU處理顯著降低葡萄果皮中白藜蘆醇、香豆酸等酚類物質含量和木質素含量，木栓層活動受到抑制，一定程度上抑制果銹生成，CPPU濃度為10 mg/L和15 mg/L時，果面幾乎無銹斑。

本試驗結果表明，GA3與不同濃度的CPPU組合處理陽光玫瑰果穗，能顯著減少果皮表面銹斑生成。然而在果皮表面果銹顯著減少的前提下，與5 mg/L CPPU相比，10 mg/L CPPU和15 mg/L CPPU處理后的葡萄果實成熟期推遲，成熟時風味下降，果實硬度提高，容易出現僵果，商品性顯著下降。因此總體來說，使用25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU處理的陽光玫瑰葡萄果面潔凈，銹斑較少，成熟期適中，顯著提高商品價值。因此，GA3與CPPU組合浸蘸果穗是生產上解決陽光玫瑰葡萄果銹問題的有效方法，推薦使用25 mg/L GA3+5 mg/L CPPU的處理。

參考文獻：

[1] YAMADA M, YAMANE A, SATO N, et al. New grape cultivar ‘Shine Muscat’[J]. Bulletin of the National Institute of Fruit Tree Science, 2008,7：21-38.

[2] OGORO A, ONO T, KAGAMI H, et al. Skin-browning occurred on berries of ‘Suihou’ grape[J]. Bull Okayama Agri Exp Sta, 2007, 25:5-10.

[3] 馮 嬌,王 武,侯旭東,等. 基于轉錄組測序技術探究GA3和CPPU抑制葡萄果銹產生的機理[J].江蘇農業學報,2017,33(4):895-903.

[4] 聶繼云,重雅鳳,馬智勇,等. 金冠蘋果果銹的發生原因及防治[J].北方果樹,2001(3):3-4.

[5] WANG Y Z, DAI M S, CAI D Y, et al. A review for the molecular research of russet/semi-russet of sand pear exocarp and their genetic characters [J]. Scientia Horticulturae, 2016，210：138-142.

[6] 吳 江,程建徽,張月華,等. 黃綠色葡萄品種果皮銹斑問題及防治措施[J]. 中外葡萄與葡萄酒,2006(6):41-42.

[7] SUEHIRO Y, MOCHIDA K, ITAMURA H, et al. Skin browning and expression ofPPO,STS, andCHSgenes in the grape berries of ‘Shine Muscat’[J]. Journal-Japanese Society for Horticultural Science, 2014, 83(2)：122-132.

[8] LEGAY S, GUERRIERO G, DELERUELLE A, et al. Apple russeting as seen through the RNA-Seq lens：strong alterations in the exocarp cell wall [J]. Plant Mol Biol, 2015, 88(1/2):21-40.

[9] WANG Y Z, DAI M S, ZHANG S J, et al. Exploring candidate genes for pericarp russet pigmentation of sand pear (Pyruspyrifolia) via RNA-Seq data in two genotypes contra sting for pericarp color[J]. PLoS One, 2014, 9(1):e83675.

[10] WANG Y Z, ZHANG S, DAI M S, et al. Pigmentation in sand pear (Pyruspyrifolia) fruit：biochemical characterization, gene discovery and expression analysis with exocarp pigmentation mutant[J]. Plant Mol Biol, 2014，85:123-134.

[11] JEAN-JACQUES M , JEAN-CLAUDE S, ANNIE F, et al. Phenolic compounds and polyphenoloxidase in relation to browning in grapes and wine[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 1991, 30(3):441-486.

[12] 張 勃. 套袋對黃冠梨果實銹斑形成和發育的影響[D]. 蘭州:甘肅農業大學,2004.

[13] 辛守鵬,劉 帥,余 陽,等.赤霉素與細胞分裂素對葡萄果實鄰近葉光合特性及果實品質的影響[J]. 應用生態學報,2015,26(7)：1814-1820.

[14] RETAMALES J, BANGERTH F, COOPER T, et al. Effects of CPPU and GA3on fruit quality of ‘Sultanina’ table grape[J]. Plant Bioregulators in Horticulture, 1995，394：149-158.

[15] BARANDOOZI F N, TALAIE A. The effect of gibberellins on russeting in ‘Golden Delicious’ apples[J]. Journal of Horticulture and Forestry, 2009, 1(4)：61-64.

[16] 李健花,高晶晶,馮新新,等. ‘金冠’蘋果與其無銹芽變的果皮性狀比較和防銹技術研究[J]. 園藝學報, 2014,41(1)：35-43.

[17] 柯凡君,張紹鈴,陶書田,等.不同果袋對′黃金′和′豐水′梨發育微環境及果實品質的影響[J]. 南京農業大學學報,2011,34(2)：33-37.

[18] HATFIELD R D, GRABBER J, RALPH J, et al. Using the acetyl bromide assay to determine lignin concentrations in herbaceous plants：some cautionary notes[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 1999, 47(2)：628-632.

[19] 王央杰,李三玉,王向陽. CPPU對巨峰葡萄果粒肥大和內源激素水平的影響[J]. 園藝學報, 1997,24(1)：84-86.

[20] MOCHIDA K, MAKI S, OHNISHI A, et al. Relationship between skin-browning symptom (called ‘kasuri-sho’) and mineral nutrient contents in the skin of ‘Shine Muscat’ grapes[J]. Bull Shimane Agri Exp Sta, 2013，41:41-50.

[21] 孫建平. 不同種葡萄果皮中酚類物質的分離及其生物活性研究[D]. 楊凌:西北農林科技大學,2003.

[22] HENG W, LIU L, WANG M D, et al. Differentially expressed genes related to the formation of russet fruit skin in a mutant of ‘Dangshansuli’ pear (PyrusbretchnederiRehd.) determined by suppression subtractive hybridization[J]. Euphytica, 2014, 196(2)：285-297.

[23] 秦晨亮,丁 玲,代紅軍. 赤霞珠葡萄果實發育過程中酚類物質含量與相關酶活性的關系[J]. 浙江農業學報,2015,27(1):1922-1926.

[24] VILLALOBOS-GONZALEZ L, PENA-NEIRA A, FREDDY IBAN E Z, et al. Long-term effects of abscisic acid (ABA) on the grape berry phenylpropanoid pathway：Gene expression and metabolite content[J]. Plant Physical and Biochemistry, 2016, (105):213-223.

[25] 吳錦程,唐朝暉,陳 群,等.不同貯藏溫度對枇杷果肉木質化及相關酶活性的影響[J].武漢植物學研究,2006,24(3)：235-239.

[26] CHEN J Y, WEN P F, KONG W F, et al. Changes and subcellular localizations of the enzymes involved in phenylpropanoid metabolism during grape berry development[J]. Journal of Plant Physiology, 2006,163:115-127.

[27] ZHANG E H, GUO X F, MENG Z F, et al. Construction, expression and characterization ofArabidopsisthaliana4CLandArachishypogaeaRSfusion gene 4CL:RSin Escherichia coli[J]. World J Microbiol Biotechnol, 2015,31:1379-1385.

[28] 陳建中,葛水蓮,王有年,等. 桃內果皮木質化與其相關酶的關系[J]. 河南農業科學,2008,37(9):100-103.