氣相指紋圖譜在加味藿香正氣制劑質量評價中的應用

高曉艷 吳 翠 畢宇安 凌 婭*

（江蘇康緣藥業股份有限公司，江蘇 連云港 222047）

藿香正氣散一方出自《太平惠民和劑局方》，用于治療寒濕型疾病[1-3]，加味藿香正氣制劑是由藿香正氣散加減得來，處方由廣藿香、紫蘇葉、白芷、炒白術、陳皮、半夏（制）、姜厚樸、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大棗幾味藥材組成，具有解表化濕，理氣和中之功效[4-5]。君藥藿香，芳香辛溫，理氣而宣內外，和中而治吐瀉；輔以紫蘇、白芷兩藥辛溫發散，助藿香外散風寒，芳化濕濁，為臣藥；揮發性成分是制劑主要藥效成分之一，目前中國藥典及相關文獻對加味藿香正氣制劑的質量控制主要是采用HPLC法測定和厚樸酚與厚樸酚的含量、橙皮苷、甘草苷含量、GC法測定百秋李醇含量[6-10]等，為了更全面的評價加味藿香正氣制劑的揮發性成分，本實驗采用GC法測定加味藿香正氣制劑的指紋圖譜。

1 儀器與試藥

Agilent 6890氣相色譜儀，FID檢測器，METTLER TOLEDO AL104電子分析天平；加味藿香正氣軟膠囊（江蘇康緣藥業股份有限公司生產，批號為160101，160102，160301，160401，160402，160403，160404，160512，160513，160518）；加味藿香正氣丸（水蜜丸，李時珍醫藥集團有限公司，批號為201603002）；加味藿香正氣丸（大蜜丸，北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠，批號為14011915）；正己烷（分析純，南京化學試劑有限公司）；百秋李醇（批號110772-201206，中國藥品生物制品檢定研究院）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：色譜柱：100%聚二甲基硅氧烷為固定相的非極性毛細管柱（30 m×250 μm，1 μm，Agilent HP-1）；柱溫為程序升溫：初始溫度150 ℃，保持8 min，以每分鐘2 ℃的速率升溫至180 ℃，保持5 min，再以每分鐘2 ℃的速率升溫至220 ℃；保持10 min，流速：1.0 mL/min；進樣口溫度280 ℃；檢測器溫度280 ℃；分流進樣，分流比10∶1；進樣量2 μL。

2.2 對照品溶液的制備：精密稱取百秋李醇對照品適量，加正己烷，制成每1 mL含百秋李醇1 mg的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備：分別稱取加味藿香正氣軟膠囊內容物約2.0 g，加味藿香正氣丸（水蜜丸）約6.0 g，分別加正己烷25 mL，超聲處理1 h，作為供試品溶液。取加味藿香正氣丸（大蜜丸）約10.0 g，加水100 mL使溶解，用正己烷萃取2次，每次25 mL，合并正己烷溶液，回收至25 mL ，作為供試品溶液。

2.4 系統適用性試驗：取對照品溶液、供試品溶液各2 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結果供試品溶液中各峰分離較好，見圖1。

圖1 加味藿香正氣軟膠囊圖譜

2.5 方法學考察

表1 加味藿香正氣軟膠囊相似度結果

2.5.1 精密度試驗：取加味藿香正氣軟膠囊（批號160301）內容物約2.0 g，按2.3項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖，以百秋李醇峰為S峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD。結果各共有峰相對保留時間的RSD均＜0.90%，相對峰面積的RSD均＜3.0%，表明儀器精密度良好。

2.5.2 重復性試驗：取加味藿香正氣軟膠囊（批號160301）內容物約2.0 g，按2.3項下方法制備供試品溶液6份，按2.1項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖，以百秋李醇峰為S峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD。結果各共有峰相對保留時間的RSD均＜0.90%，相對峰面積的RSD均小于3.0%，表明方法的重復性良好。

2.5.3 穩定性試驗：取加味藿香正氣軟膠囊（批號160301）內容物約2.0 g，按2.3項下方法制備供試品溶液6份，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣分析，記錄色譜圖，以百秋李醇峰為S峰，計算各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD。結果各共有峰相對保留時間的RSD均小于0.90%，相對峰面積的RSD均＜3.0%，表明加味藿香正氣軟膠囊供試品溶液在24 h內穩定。

2.6 指紋圖譜的建立與共有峰的確定：按2.3項下方法分別制備10批加味藿香正氣軟膠囊指紋圖譜供試品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，根據10批樣品的氣相指紋圖譜的檢測結果，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（2.0版），剪切去3 min之前的圖譜，多點校正，全譜峰匹配，時間窗0.1，生成共有模式的對照指紋圖譜，見圖2。共標定15個分離度、峰型、重復性均較好的共有峰。

圖2 對照指紋圖譜

2.7 指紋圖譜的相似度評價：采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（2.0版），以對照指紋圖譜為參照，剪切去3 min前的圖譜，多點校正，全譜峰匹配，時間窗0.1，計算10批加味藿香正氣軟膠囊的相似度，結果見表1；測定2批加味霍香正氣丸的氣相指紋圖譜，結果見圖4。結果表明，10批加味藿香正氣軟膠囊的相似度均大于0.98，相似度良好，不同批次間揮發性成分穩定，質量一致性較好；加味霍香正氣丸的共有峰較少，相似度僅為0.721、0.304。

3 討 論

3.1 不同劑型的對比：通過采用氣相指紋圖譜對加味藿香正氣軟膠囊和加味藿香正氣丸的揮發性成分分析，可以看出軟膠囊制劑在保存揮發性成分上較丸劑具有巨大的優勢，而揮發性成分（廣藿香、紫蘇、白芷、蒼術、厚樸、陳皮含揮發性成分）又為該藥的主要有效組分之一，發揮解表化濕、理氣和中、清熱解毒的功效，因此加味藿香正氣軟膠囊相較加味藿香正氣丸更能發揮出藥物的整體療效。

圖4 加味霍香正氣丸指紋圖譜

3.2 質量一致性評價的思路：無論是藿香正氣系列還是其他系列制劑[11-12]，各劑型在研發階段單從使用方便、攜帶方便、服用方便的角度考慮是不足的；中藥制劑不同于化學藥，中藥組分復雜、作用靶點多元、藥效成分與質量控制成分不完全一致，中藥品種目前很難通過化學等效性評價及生物等效性來進行質量一致性評價，而采用臨床有效性研究評價則勢必帶來臨床資源的大量浪費，而目前的中藥品種質量標準還不夠完善，產品檢驗合格還不能完全代表其臨床療效一致性。因此，開展中藥制劑的質量一致性評價只能先從完善質量評價標準入手，除了進行各藥味鑒別和含量測定，還要摸索采用多成分指紋圖譜、多介質溶出曲線對比等方法進行質量一致性評價。