臨桂區(qū)雞大腸桿菌的分離與藥敏試驗初步研究

趙 蓉 廖炳次

大腸桿菌病是家禽養(yǎng)殖中最常見的一種疫病，針對臨桂區(qū)的桂林廣東溫氏家禽養(yǎng)殖有限責(zé)任公司和利源家禽養(yǎng)殖公司的養(yǎng)戶經(jīng)常發(fā)生雞大腸桿菌病，臨床治療效果不明顯，對這兩個養(yǎng)殖公司隨機采樣各10戶疑似大腸桿菌病的病例，進行細菌分離及藥敏試驗，為養(yǎng)殖戶在臨床用藥上提供指導(dǎo)。試驗結(jié)果表明本區(qū)主要敏感藥物是頭孢拉定、氟苯尼考、頭孢噻呋、諾氟沙星，用敏感藥物治療取得良好效果。

1 雞大腸桿菌病概況

大腸桿菌病是指由禽致病性大腸桿菌（APEC）所引起的局部或全身性感染的疾病。1894年Lignieres首先報道該病可引起家禽的大批死亡，并從心、肝、脾中分離到大腸桿菌。大腸桿菌屬于條件性致病菌，在衛(wèi)生條件差，飼養(yǎng)管理不完善等情況下都會引起該病的發(fā)生。臨床上主要表現(xiàn)為敗血癥、心包炎、肝周炎、腹膜炎等。本病可單一發(fā)病，也可以混合感染，給養(yǎng)禽業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。

病原為埃希氏大腸桿菌，需氧兼性厭氧，革蘭氏陰性桿菌，大多數(shù)菌株周身有鞭毛，能運動。在伊紅美藍瓊脂上形成黑色帶特殊金屬光澤的菌落；對理化因素敏感，常用消毒液在幾分鐘內(nèi)即可殺死本菌。已經(jīng)確定的大腸桿菌抗原體共有173種，國內(nèi)鑒定的雞源大腸桿菌有74個血清型。

大腸桿菌的致病性主要由該病原體的三個方面決定，即侵襲力、感染性和致病力。該病在雞的各個年齡均可發(fā)生，尤其是3～6周齡最為敏感。不同的大腸桿菌病例引起的癥狀和病變都不同，主要分幾種：一是死胚、弱雛，表現(xiàn)為腹部大、紅腫。二是敗血性，剖解見氣囊渾濁，腹腔內(nèi)充滿黃綠色水樣粘稠液體。三是臍炎或卵黃囊感染，充血、腫脹；四是輸卵管炎，引起產(chǎn)蛋量下降，產(chǎn)畸形蛋。五是關(guān)節(jié)滑膜炎，病雞關(guān)節(jié)腫脹，跛行。六是全眼球炎，表現(xiàn)為一側(cè)眼睛失明或積膿，頭部腫脹。七是氣囊炎，病雞剖解產(chǎn)生心包炎和肝周炎。

2 雞大腸桿菌病的研究進展

在養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展過程中，大腸桿菌病一直伴隨著養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。近十年來，大腸桿菌病的危害顯得越來越突出。當(dāng)前藥物防治一直是本病控制的主要手段，但臨床上普遍的養(yǎng)雞場反映很多常規(guī)的抗菌藥對肉雞大腸桿菌病的防治效果不明顯，從而出現(xiàn)盲目或超量應(yīng)用抗菌藥導(dǎo)致藥物產(chǎn)生毒副作用、耐藥性等不良后果。通過藥敏試驗，了解本地區(qū)雞大腸桿菌病的敏感性，使用有效的藥物進行治療是當(dāng)前的主要方向。近年來，中草藥具有不易產(chǎn)生耐藥性，使用中草藥進行該病的防治也是當(dāng)前研究的熱點。據(jù)王自然等報道使用止痢靈，對耐藥菌株或非耐藥菌株都有極好的治療效果，治愈率達96%以上，有效率達100%。

3 實驗材料

3.1 實驗器材

酒精燈、接種環(huán)、平皿、擦鏡紙、剪刀、鑷子、生物顯微鏡、玻片、培養(yǎng)箱、酒精棉球、棉簽、記號筆等。

3.2 實驗試劑

革蘭氏染色液、營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍、普通肉湯及18種藥敏試紙均購自桂林市貝爾實驗設(shè)備有限公司。

3.3 病料來源

病料來源于診斷疑似大腸桿菌的患病雞群，每群雞1只，無菌操作采取心、肝、脾病料。

4 實驗方法

4.1 細菌分離

采用平板劃線法，于營養(yǎng)凱瓊脂平板從病、死雞的心、肝、脾中直接劃線培養(yǎng)，于37℃培養(yǎng)24h，挑取單個菌落，再劃線培養(yǎng)。

4.2 病原菌生長性狀觀察

將分離菌種分別接種到麥康凱平板和伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基平板，于37℃培養(yǎng)24h，經(jīng)鑒定后，挑取單個菌落接種于普通肉湯，于37℃培養(yǎng)24h，放4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

5 藥敏試驗

參照Kirby-Barer氏法，將慶大霉素、多粘菌素、氟苯尼考、頭孢噻呋鈉、諾氟沙星等18種常用的抗生素的藥敏紙片貼到瓊脂平板的表面，37℃培養(yǎng)24h后，測量抑菌圈的大小。抑菌圈直徑小于10mm為耐藥、10mm 大于15mm為中敏、大于15mm為敏感。

6 結(jié)果

6.1 病原菌的分離鑒定

經(jīng)革蘭氏染色后，在油鏡下見大量散在紅色、中等大小、兩端鈍圓的無芽孢桿菌；在伊紅美藍瓊脂上出現(xiàn)特征性帶有金屬光澤的黑色菌落，可做出初步診斷。

6.2 藥敏試驗治療情況

6.2.1 18戶養(yǎng)雞戶分離到大腸桿菌并根據(jù)藥敏試驗結(jié)果進行用藥，死亡率、治愈率明顯提高。說明用敏感藥物進行治療有比較理想的治療效果。

6.2.2 不同的雞群，大腸桿菌對藥物的敏感性是不完全統(tǒng)一的，因此及時進行藥敏試驗是指導(dǎo)養(yǎng)殖戶臨床用藥的有效辦法。

7 分析與討論

7.1 雞大腸桿菌病發(fā)病的原因分析

由于大腸桿菌病在正常腸道內(nèi)都存在，屬于條件性致病菌，其典型病變?yōu)樾陌?、肝周炎及氣囊炎。?dǎo)致該病發(fā)生和流行的主要原因有：一隨直傳播。二飼養(yǎng)管理人員普遍文化素質(zhì)低。養(yǎng)殖公司的飼養(yǎng)人員都是臨桂區(qū)當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)民，沒有系統(tǒng)的專業(yè)知識，防疫意識淡薄。三養(yǎng)殖戶防疫管理不規(guī)范，雞場的消毒只是形式化。四飲水中大腸桿菌數(shù)超標(biāo)。雞場的飲用水未經(jīng)嚴(yán)格消毒，直接給雞飲用。五抗生素的濫用，隨意加大藥物的使用量，導(dǎo)致耐藥性的增加。六與其他疾病的混合感染，多數(shù)都是與新城疫、傳染性法氏囊等混合感染。

8 討論

8.1 根據(jù)藥敏試驗的治療效果表明：

高敏藥物在臨床治療上對大腸桿菌病的控制有很好的效果。藥敏試驗操作方便、簡單，非常適合廣大基層養(yǎng)殖場（戶）使用，臨桂區(qū)目前建成了獸醫(yī)實驗室，這為藥敏試驗的用提高了時效性，方便性。

8.2 試驗結(jié)果顯示：

這四種藥物目前在臨桂區(qū)對大腸桿菌病有較好的治療效果。但臨床上，應(yīng)注意有效的交替用藥、聯(lián)合用藥，防治菌株耐藥性的產(chǎn)生。

9 綜合防治

由于大腸桿菌病屬于條件性致病菌，其發(fā)生和雞舍的環(huán)境條件有著密切的關(guān)系，因此該病的防治不僅要正確使用藥物來控制，更應(yīng)做好環(huán)境衛(wèi)生的控制。應(yīng)用中草藥進行日常保健等措施綜合防控，最大限度減少大腸桿菌病對養(yǎng)殖帶來的損失。