手術創傷對在體口腔黏膜細胞狀態的影響研究

賈江

【摘 要】目的：探討手術創傷對在體口腔黏膜細胞狀態的影響。方法：回顧性分析性了12例保乳術患者以及15例乳腺癌根治術患者的臨床資料，于手術前后分別采用亞G1峰法以及Ki-67法分別對其口腔黏膜凋亡率以及增殖率進行檢測、分析，并對兩組手術前后口腔黏膜細胞狀態以及組間細胞狀態進行比較。結果：兩組患者在年齡、性別、營養狀態等方面的差異均無統計學意義（P>0.05）；保乳術組手術前后口腔黏膜凋亡率分別為（27.49±2.27）%及（26.97±1.78）%，保乳術組患者手術前后增殖率分別為（16.02±2.19）%及（16.32±2.38）%；根治術組手術前后口腔黏膜凋亡率分別為（27.28±2.08）%及（27.44±2.17）%，根治術組手術前后口腔增殖率分別為（16.11±1.28）%及（16.35±1.30）%；兩組手術前后口腔黏膜凋亡率及增殖率差異均無統計學意義（P>0.05），且兩組術后口腔黏膜凋亡率及增殖率差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：手術創傷對在體口腔黏膜細胞狀態不產生顯著性影響。

【關鍵詞】手術創傷；在體口腔黏膜；凋亡率；增殖率

【中圖分類號】R318 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-3783（2018）06-03--01

外科營養在臨床上受到了廣泛地關注，尤其對于圍術期患者，營養支持已經被提升至營養治療的地位[1]。所以，如何及時以及有效地對單個機體的營養狀態加以評價，具有十分重要的意義與價值，以往關于外科營養的評價標準還存在著時間滯后以及特異度低下等方面的缺陷，已完全不能滿足指導臨床營養治療[2]。因此，探索一種及時、特異度高以及高效的營養評價標準已經逐漸發展成為人們的迫切需求。

之前，我們的研究團隊已經發現，口腔黏膜細胞狀態受到人體營養狀態的影響，營養不良患者的口腔黏膜凋亡率以及增殖率顯著低于正常人，且提出可通過檢測口腔黏膜細胞凋亡率以及增殖率來對機體的營養狀況加以評價[3-4]。然而，圍術期患者機體口腔黏膜細胞的凋亡率以及增殖率除了受到營養等因素的影響以外，是否同樣也會受到手術創傷等方面因素的影響呢？本研究帶著這個問題進行逐一探討，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年12月至2013年12月入住我院的12例保乳術患者以及15例乳腺癌根治術患者作為研究對象，術前采用患者總體主觀評價法PG-SGA進行營養評定，結果顯示均無營養不良。采用ELSIA法對各項生化營養指標均顯示正常；年齡23～54歲，平均（38.90±2.33）歲；無肝腎功能不良、無惡液質以及無代謝性疾病；無口腔局部性疾病；圍術期基本可進行正常的飲食。

1.2 口腔黏膜細胞的收集及處理 分別于手術前1、2d，術后1、2d，于晨起洗漱以及進食之前，采用經消毒的生理鹽水將口腔清潔干凈之后，再用經消毒的醫用棉簽搔刮擦拭雙側口頰黏膜，每側擦拭次數各為3次，然后用棉簽放入約為15mL的生理鹽水的清潔容器之中進行緩緩地震蕩，以500目的篩網進行過濾，再經轉速為800rpm的離心機離心5min，制作成細胞懸浮液，將上清液棄去，后用質量濃度為80%的C2H5OH溶液加以固定，最后置于-20℃溫度的冰箱中放置24h備用[5]。

1.3 亞G1峰法檢測口腔黏膜細胞凋亡率 首先取已經固定好的口腔黏膜細胞液，按照轉速為800rpm離心5min，將上清液棄去，使用磷酸鹽緩沖溶液（PBS）將細胞洗滌2次之后于80μL PC緩沖液于冰上孵育半小時；然后再使用PBS溶液將細胞洗滌2-3次，用10mg/L碘化丙錠（PI）以及濃度為0.1%的RNA酶于室溫條件下避光行DNA染色20min；經上述方法處理的細胞使用FACSort流式細胞儀檢測分析。然后采用波長為488nm的激光進行激發，被標記的細胞發射紅色熒光被FACSort流式細胞儀透鏡接收；最后使用Cellquest軟件對上述所測細胞的熒光強度加以處理[6]。

1.4 Ki-67/DNA雙參數法檢測口腔黏膜細胞增殖率 首先取已經固定好的口腔黏膜細胞液，按照轉速為800rpm離心5min；經固定的細胞采用PBS洗滌2次，濃度為0.25%的Triton X-100 BSA稀釋的鼠抗人Ki-67單克隆抗體于溫度為4℃的條件下孵育24h；第二天再使用PBS將細胞洗滌2-3次之后，再加入標有熒光標記的FITC的羊抗鼠IgG抗體，于室溫條件下避光孵育半小時；PBS溶液洗滌2-3次之后，再采用濃度為10mg/L的PI以及濃度為0.1%的Rnase A于避光、室溫條件下用細胞核DNA染色約20min；使用FACSort流式細胞儀進行檢測分析，經波長為488nm的激光進行激發，檢測被標記的細胞發射的熒光，最后使用Cellquest軟件對上述所測細胞的熒光強度加以處理[7]。

1.5 觀察指標 對兩組手術前后口腔黏膜細胞狀態以及組間細胞狀態進行比較。

1.6 統計學方法 數據均采用SPSS14.0軟件加以統計及處理，計量資料均以均值±標準偏差（）的形式進行表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組手術前后口腔黏膜細胞凋亡率及增殖率對比分析 見表1。由下表可知，兩組手術前后口腔黏膜細胞凋亡率及增殖率差異均無統計學意義，且兩組術后上述兩個指標的差異也均無統計學意義（P>0.05）。

2.2 兩組手術前后營養指標對比分析 見表2。由下表可知，兩組手術前后營養指標（包括前白蛋白、轉鐵蛋白及視黃醇蛋白）水平相比，差異均無統計學意義（P>0.05），且兩組術后上述指標差異也均無統計學意義（P>0.05）。

3 討論

近代營養學發展日新月異，目前營養支持已成為臨床綜合治療重要的措施之一，它已經由既往的輔助治療，發展為現代臨床治療中重要部分之一，臨床營養的角色從既往的營養支持正轉變為營養治療[8]。現代外科營養被認為是20 世紀后半葉醫學發展的重要里程碑，據研究顯示，住院病人中約有15﹪-60﹪的患者存在營養不良，并且有約50﹪為嚴重營養不良[9]。營養不良可導致疾病并發癥發生率和醫療費用增加、住院時間延長、疾病恢復緩慢，而合理的營養支持有利于改善上述情況。特別在圍手術期應用營養支持能減少手術并發癥和病死率，縮短住院時間，減少醫療費用；在危重癥患者給予積極的營養支持能改善預后，使機械通氣時間、住ICU 時間、MODS 發生率及病死率明顯下降。本研究主要對如下觀察指標進行了探討與分析：對兩組手術前后口腔黏膜細胞狀態以及組間細胞狀態進行比較。結果顯示：保乳術與乳房根治術組手術前后口腔黏膜細胞凋亡率及增殖率差異均無統計學意義，且兩組術后上述兩個指標的差異也均無統計學意義（P>0.05）；保乳術與乳房根治術組手術前后營養指標（包括前白蛋白、轉鐵蛋白及視黃醇蛋白）水平相比，差異均無統計學意義（P>0.05），且兩組術后上述指標差異也均無統計學意義（P>0.05）。綜上所述，手術創傷對在體口腔黏膜細胞狀態不產生顯著性影響。

參考文獻

尹小平，龔建平.手術創傷對口腔黏膜細胞凋亡和增殖的影響[J].中華實驗外科雜志，2011，28（11）：1927-1929.

高純，魏欣，朱真闖，等.口腔黏膜細胞凋亡和增殖率與化療患者營養狀況的關系[J].華中科技大學學報（醫學版），2009，38（1）：56-58.

金莉.化療對患者口腔黏膜細胞凋亡和增殖的影響及中藥的干預作用[J].浙江中醫藥大學學報，2012，36（2）：162-163.

羅曉秋，吳華裕，劉承武，等.巴馬地區壯族人群口腔黏膜細胞端粒的長度[J].中國老年學雜志，2013，33（1）：17-20.

鄒游，李小蘭，肖徽.腸外瘺對患者口腔黏膜細胞凋亡和增殖的影響[J].臨床口腔醫學雜志，2011，27（3）：131-133.

魏欣，高純.化療對患者口腔黏膜細胞生長狀態的影響[J].臨床口腔醫學雜志，2009，25（4）：199-201

金莉.化療對患者口腔黏膜細胞凋亡和增殖的影響及中藥的干預作用[J].浙江中西藥大學學報，2012，36（2）：162-163.

李毅萍.hBD-2在口腔黏膜下纖維性變、扁平苔蘚、口腔鱗癌中表達的研究[J].口腔醫學研究，2012，28（12）：1291-1295.

羅剛，董俊英，陳謙明，等.細胞周期素D1過表達在口腔黏膜癌變過程中的作用[J].廣東醫學，2011，32（23）：3083-3087.