人細(xì)小病毒B19抗體及抗心磷脂抗體(aCL)在流產(chǎn)人群中的檢測(cè)價(jià)值

高 陽,宋 陽，陳 陸，李 英，翟燕紅

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京100026)

非人為自然狀態(tài)下出現(xiàn)的提前終止妊娠被稱為自然流產(chǎn)，世界衛(wèi)生組織(WHO)一項(xiàng)報(bào)告指出，在全部確認(rèn)的妊娠中，發(fā)生自然流產(chǎn)的比例超過15%。目前認(rèn)為孕周<12周的流產(chǎn)為早期流產(chǎn)，孕周12-28周的流產(chǎn)為晚期流產(chǎn)。超過80%的流產(chǎn)發(fā)生于12周之前，隨后隨孕周增加流產(chǎn)率迅速降低[1]。雖然至今尚未完全明確自然流產(chǎn)的確切病理、生理機(jī)制，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其與染色體異常、母體內(nèi)分泌失調(diào)、母體生殖道的異常、生殖道感染等眾多因素均有一定聯(lián)系。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、診斷技術(shù)的提高，自然流產(chǎn)分子領(lǐng)域的研究取得一定進(jìn)展[2]。有報(bào)道稱約40%的胎內(nèi)死胎、自然流產(chǎn)婦血清能檢測(cè)到高滴度的B19IgM以及B19IgG，而這一比例在正常孕產(chǎn)婦中僅為3%-15%[3]。抗磷脂綜合征已被證實(shí)與稽留流產(chǎn)具有明顯的關(guān)系，而抗磷脂綜合征的發(fā)生與血清aCL水平具有直接的關(guān)系。aCL是一組異質(zhì)自身抗體，通過對(duì)血漿蛋白-磷脂免疫復(fù)合物的直接拮抗作用以及單純對(duì)血漿蛋白起作用參與到流產(chǎn)過程[4]。當(dāng)前國內(nèi)對(duì)B19與aCL與流產(chǎn)人群的關(guān)系報(bào)道較為缺乏，現(xiàn)進(jìn)一步研究人細(xì)小病毒B19抗體及抗心磷脂抗體(aCL)在流產(chǎn)人群中的檢測(cè)價(jià)值，為流產(chǎn)的預(yù)防提供理論依據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

本研究觀察對(duì)象為2015年1月-2017年1月于我院婦產(chǎn)科就診的386例自然流產(chǎn)患者以及年齡配對(duì)的200例自愿終止妊娠的孕產(chǎn)婦，分別設(shè)為觀察組與對(duì)照組。觀察組最低年齡21歲，最高43歲，平均(30.23±3.43)歲；有流產(chǎn)史176例，無流產(chǎn)史210例；有分娩史75例，無分娩史311例；自然流產(chǎn)孕周最短3周，最長22周，平均(10.34±1.21)周；對(duì)照組最低年齡20歲，最高39歲，平均(29.43±3.65)歲；有流產(chǎn)史86例，無流產(chǎn)史114例；有分娩史35例，無分娩史165例；要求流產(chǎn)孕周最短4周，最長15周，平均(7.34±1.03)周；本研究取得我院倫理委員會(huì)許可。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡>20歲；無停經(jīng)史；血清HCG檢測(cè)陽性；B超檢查子宮內(nèi)有孕囊；觀察組均于孕周28周發(fā)生自然流產(chǎn)；對(duì)照組自愿終止妊娠；孕產(chǎn)婦對(duì)研究知情并簽署知情同意書；單胎妊娠；排除標(biāo)準(zhǔn):跌倒、碰撞等其他物理因素導(dǎo)致的流產(chǎn)；合并肝病、高血壓、腎病等全身性疾病。比較兩組孕產(chǎn)婦年齡、流產(chǎn)史、分娩史差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

抽取空腹肘靜脈血4 ml，采用離心機(jī)以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心15 min，分吸上層血清后保存于-30℃恒溫冰箱。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)兩組孕產(chǎn)婦血清aCLIgG、aCLIgM水平，提取待檢血清，室溫下解凍，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測(cè)試劑盒(德國 AESKU公司)檢測(cè)aCLIgG、aCLIgM水平，根據(jù)配套的試劑及底物嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。根據(jù)試劑盒廠家陽性樣本單克隆抗體校驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行陽性評(píng)價(jià)，aCLIgG>3 U/mL、aCLIgM>20 U/mL判定為陽性。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)B19IgG、B19IgM水平，ELISA試劑盒由德國賽潤公司提供，試劑盒包括樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔以及空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔按照持續(xù)滴加濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl；樣本孔先加待測(cè)樣本10 μl，再加樣本稀釋液40 μl，空白孔不加，空白孔除外，樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔分別滴加100 μl已由辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記后的檢測(cè)抗體，反應(yīng)孔采用配套封板膜做密封處理，恒溫箱溫育(37℃，60 min)后丟棄液體并用專用吸水紙吸干，每孔加滿洗滌液，洗滌液為按1∶19比例的洗滌緩沖液與蒸餾水混合物，靜置1 min后將洗滌液甩干并采用吸水紙吸干，重復(fù)此步驟5次；每孔各加入50 μl A、B底物，避光孵育(37℃，15 min)。每孔添加終止液50 μl后15 min內(nèi)于450 nm波長處進(jìn)行各孔的光密度值的測(cè)定，根據(jù)試劑盒說明書得出濃度。所有操作均由我院檢驗(yàn)科經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師完成。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1兩組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率比較

觀察組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率分別為5.08%、41.71%、52.33%、55.44%，對(duì)照組分別為6.00%、11.00%、7.00%、7.00%，觀察組均顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率比較[n(%)]

2.2兩組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比較

觀察組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平分別為(1.65±0.23)U/mL、(1.76±0.27)U/mL、(4.54±0.23)U/mL、(22.43±3.32)U/mL，對(duì)照組分別為(0.67±0.12)U/mL、(0.54±0.15)U/mL、(2.34±0.15)U/mL、(6.51±1.02)U/mL，觀察組均顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比較(U/mL)

3 討論

所有妊娠中自然流產(chǎn)比例占到15%-30%，目前大量的流行病學(xué)調(diào)查以及影響因素報(bào)道均顯示引起女性自然流產(chǎn)的原因較多，有報(bào)道顯示母嬰血型不合、胎盤發(fā)育不良、外傷、生殖器官疾病、內(nèi)分泌功能失調(diào)、孕婦全身性疾病等均可能導(dǎo)致。近年來報(bào)道顯示50%-60%的自然流產(chǎn)與免疫因素有關(guān)，而其中約30%與抗磷脂抗體等自身免疫性抗體有關(guān)[5]。抗磷脂抗體(aPL)包括aCL、抗磷脂酰絲氨酸抗、抗磷脂酸抗體、狼瘡抗凝物(LA)等，又以LA與 aCL與流產(chǎn)關(guān)系最為緊密，已成成為當(dāng)前關(guān)于自然流產(chǎn)分子領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[6]。有研究證實(shí)表面而抗磷脂綜合征的發(fā)生與血清aCL水平具有直接的關(guān)系，aCL可能通過對(duì)前列環(huán)素(PGI 2)合成的阻止作用導(dǎo)致血栓素A2 (TXA 2)/ PGI2平衡失常，而TXA 2相對(duì)增多可造成孕產(chǎn)婦全身以及胎盤血管痙攣缺血而引起流產(chǎn)[7]。

近年對(duì) B19結(jié)構(gòu)研究顯示B 19是已知的結(jié)構(gòu)最簡單、體積最小的DNA病毒，屬于一類微小病毒科微小病毒屬病毒，編碼B19，能感染各年齡段人群并于人體細(xì)胞內(nèi)自主復(fù)制而出現(xiàn)相關(guān)疾病[8]。自首次報(bào)道B19感染可引起流產(chǎn)以來，研究人員逐步開展了B19與妊娠的相關(guān)研究,報(bào)道顯示B19感染能夠引起血管相關(guān)病癥、造血功能障礙、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染等，孕婦感染B19是造成胎兒死亡、流產(chǎn)、胎兒畸形、非免疫性胎兒水腫的常見原因[9]。孕婦感染B19 后30%出現(xiàn)母胎垂直感染，但部分孕產(chǎn)婦能分娩正常嬰兒，但流產(chǎn)、胎兒水腫、胎兒死亡等均會(huì)發(fā)生[10]。研究發(fā)現(xiàn)胎兒細(xì)胞處于快速分裂階段，而B19對(duì)快速分裂的細(xì)胞親嗜力較強(qiáng)，在感染B19后細(xì)胞內(nèi)可見特征性染色質(zhì)著邊現(xiàn)象以及核內(nèi)包涵體， 電鏡下觀察細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核明顯變性，包涵體內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒顆粒[11]。觀察組孕產(chǎn)婦血清B19IgG、B19IgM水平明顯高于對(duì)照組，提示B19含量增加，由于胎兒細(xì)胞受病毒的作用而變性死亡，引發(fā)一系列的功能障礙，胎兒發(fā)生缺氧、貧血，形成水腫，最終誘發(fā)流產(chǎn)[12]。

國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道均認(rèn)為aPL屬于一組自身免疫抗體，而aPL陽性率在患者妊娠并發(fā)癥等高危妊娠群體中明顯較高[13]。國內(nèi)報(bào)道aCL在所有人群中檢出陽性率為3%-7%，國內(nèi)有關(guān)報(bào)道顯示育齡婦女a(chǎn)CL陽性率約5%-11%[14]。本研究結(jié)果顯示對(duì)照組血清aCLIgG、aCLIgM陽性率均為7.00%，觀察組這一比例分別為41.71%與52.33%，與其研究結(jié)果相符。上文提到aCL可造成胎盤血管痙攣缺血，aCL還對(duì)爭奪胎盤血管內(nèi)的磷脂受體,磷脂受體缺乏引起胎盤栓塞及蛻膜血管病變。此外,有研究稱aCL 還能促進(jìn)合成血小板活性因子，蛋白C 活性降低，加速血小板聚積，促進(jìn)血栓形成[15]。血栓形成導(dǎo)致胎盤發(fā)生一系列病理改變,胎兒-胎盤單位功能受到損害,引起胎兒缺氧、缺血、死亡，最終誘發(fā)流產(chǎn)[16]。

綜上所述，自然流產(chǎn)孕產(chǎn)婦B19抗體、aCL抗體水平均顯著高于正常孕產(chǎn)婦，提示其可能參與孕產(chǎn)婦流產(chǎn)的發(fā)生，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)B19抗體、aCL抗體水平對(duì)自然流產(chǎn)的預(yù)防具有十分重要的意義。

作者簡介：高陽(1977-),女,蒙古族,主管技師,大學(xué)本科,從事檢驗(yàn)工作。