黃芪桂枝五物湯治療糖尿病配伍規(guī)律的研究※

● 高厚明 陳建平 劉志承

糖尿病是一組代謝性疾病，以長時間高血糖水平為主要特征。高血糖的癥狀包括尿頻、口渴增加和饑餓增加。糖尿病如果不及時治療，會導(dǎo)致很多糖尿病并發(fā)癥。急性并發(fā)癥可能包括糖尿病酮癥酸中毒、高滲性高血糖狀態(tài)等[1]。嚴(yán)重的長期并發(fā)癥包括心血管疾病、慢性腎臟疾病、足部潰瘍等。目前認(rèn)為糖尿病的病因主要是由于胰腺不能產(chǎn)生足夠的胰島素，或者身體的細胞對所產(chǎn)生的胰島素沒有適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)所導(dǎo)致[2]。

中醫(yī)理論將糖尿病歸為“消渴病”范疇。《內(nèi)經(jīng)》認(rèn)為五臟虛弱、過食肥甘厚味、情志失調(diào)是引起消渴的主要原因, 對其病機主要責(zé)之于陰虛內(nèi)熱。《金匱要略》則 將其病機責(zé)之于肺胃熱盛、津氣兩傷和腎氣虧虛。故此后世醫(yī)家皆宗《內(nèi)經(jīng)》《金匱要略》所論, 從“陰津虧損, 燥熱偏勝”入手論治。典型患者雖表現(xiàn)為口渴多飲、消谷善饑、形體消瘦等一派“陰虛熱淫”癥候, 但“血屬陰” “津血同源” 。陰虛津虧液少, 不能充盈脈絡(luò), 則致脈絡(luò)涸澀, 血液澀滯不暢可至瘀血內(nèi)停;且陰虛生燥熱,津虧血燥, 血液黏滯, 運行不暢, 燥熱耗津灼液, 血液枯澀, 加重瘀血內(nèi)生, 可見其“陰虛熱淫”與血瘀當(dāng)并存[3]。現(xiàn)代醫(yī)家雖對血瘀可產(chǎn)生消渴有所認(rèn)識,但僅限于將具有典型血瘀癥候者作為一個證型來辨治, 而少有人認(rèn)識到各型各期患者均具有血瘀征象。根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論從高血糖到產(chǎn)生典型消渴癥狀需歷經(jīng)數(shù)年時間, 而對于前期沒有或少有癥狀者如何辨治鮮有論及。

基于上述中醫(yī)理論，本研究選擇黃芪桂枝五物湯對糖尿病進行干預(yù)治療。黃芪桂枝五物湯源于張仲景《金匱要略》，由黃芪、桂枝、芍藥、生姜、大棗組成，為治療血痹證的經(jīng)典名方。主要功效為益氣溫經(jīng)，和血通痹。臨床常用于治療諸如糖尿病周圍神經(jīng)病變、手足綜合征等病癥[4]。但是到目前為止，黃芪桂枝五物湯治療糖尿病配伍規(guī)律的研究還未見報道。因此，為闡明黃芪桂枝五物湯治療糖尿病的配伍規(guī)律，筆者提出以正交實驗設(shè)計結(jié)合方差分析探索其配伍規(guī)律，為方劑配伍規(guī)律的研宄提供借鑒。

1 材料

1.1動物SPF級健康昆明種小鼠，體質(zhì)量22～26g，雄性，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，動物合格證號：SCXK(滬)2012-0005。

1.2處方黃芪桂枝五物湯組成：黃芪、桂枝、芍藥、生姜、大棗購自廣東省中醫(yī)院門診大藥房。按照黃芪桂枝五物湯處方，根據(jù)正交實驗表頭設(shè)計分別進行(黃芪18g、桂枝9g、芍藥9g、生姜9g、大棗9g)配藥，加入10倍的水煎煮，濃縮至各劑量組所需要的體積，保存?zhèn)溆谩＿x取兩水平(劑量)，采用具有交互作用的L16(215)正交表，考察藥材降糖的顯著性以及任意兩個藥材配伍之間是否存在有降糖的交互作用。

1.3試劑盒鏈脲佐菌素(STZ)購買自Sigma公司。血糖試紙購買自羅氏診斷產(chǎn)品上海有限公司。甘油三醋(TG)、總膽固醇(TC)測定試劑盒購買自南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1糖尿病模型的建立首先給小鼠喂高脂飲食4周，然后腹腔內(nèi)注射STZ溶液(80mg/kg，溶于0.1M檸檬酸鈉緩沖液)。注射后，小鼠繼續(xù)接受高脂飲食再2周。通過尾靜脈測量小鼠的血糖水平。當(dāng)血糖水平大于11.1mmol/L時，表明糖尿病模型造模成功。在此過程中，正常動物以正常飲食喂養(yǎng)，并注射0.1M檸檬酸鈉緩沖液。

2.2分組根據(jù)表1進行試驗分組。持續(xù)給藥4周。

2.3血糖檢測實驗結(jié)束之前，通過尾靜脈采血，采用血糖儀測量小鼠的血糖水平。

2.4 TG和TC檢測在實驗結(jié)束時測量TG和TC。從眶竇收集血液樣品，然后在4℃以3000r/min離心10分鐘后收集血清。根據(jù)試劑盒的說明檢測TC和TG。

表1 黃芪桂枝五物湯配伍正交實驗分組給藥表(n=10)

注：A=黃芪；B=桂枝；C=芍藥；D=生姜；E=大棗

3 結(jié)果

3.1黃芪桂枝五物湯對糖尿病小鼠血糖值的影響高脂喂養(yǎng)并采用STZ誘導(dǎo)后，小鼠血糖值顯著上升(P<0.01)。單因素方差分析表明，君藥黃芪配伍臣藥桂枝和佐藥生姜均能降低小鼠血糖值(P<0.01；P<0.01)。臣藥桂枝和臣藥芍藥配伍亦可降低糖尿病小鼠血糖值(P<0.01)。生姜雖然黃芪配伍芍藥、黃芪配伍大棗不能改善血糖值，但是四藥配伍(桂枝+芍藥+生姜+大棗、黃芪+芍藥+生姜+大棗、黃芪+桂枝+生姜+大棗、黃芪+桂枝+芍藥+大棗、黃芪+桂枝+芍藥+生姜)均能降低糖尿病小鼠的血糖值(P<0.01；P<0.01；P<0.01；P<0.01)。此外，佐使藥生姜和大棗配伍不能改善糖尿病小鼠的血糖值。通過雙因素方差分析，表明單用君藥黃芪和單用臣藥桂枝均可降低小鼠血糖值(P<0.01；P<0.01)，單用臣藥芍藥有降低血糖值的傾向(P=0.086)。且黃芪桂枝配伍、黃芪芍藥配伍均具有協(xié)同作用(P<0.05；P<0.05)。桂枝生姜配伍對降低小鼠血糖值也均有協(xié)同作用(P<0.01)。

3.2黃芪桂枝五物湯對糖尿病小鼠血清TG含量的影響高脂喂養(yǎng)并采用STZ誘導(dǎo)后，小鼠血清TG含量顯著上升(P<0.01)。單因素方差分析表明，君藥黃芪配伍臣藥芍藥和佐使藥生姜大棗均能降低小鼠血清TG含量(P<0.05；P<0.01；P<0.01)。臣藥桂枝和使藥大棗配伍亦可降低糖尿病小鼠血清TG含量(P<0.01)。四藥配伍(桂枝+芍藥+生姜+大棗、黃芪+桂枝+芍藥+大棗)也可降低糖尿病小鼠血清TG含量(P<0.05；P<0.01)。雙因素方差分析，表明單用君藥黃芪可降低小鼠血清TG含量(P<0.01)，且黃芪桂枝配伍具有協(xié)同作用(P<0.05)。此外，黃芪生姜配伍對降低小鼠血清TG含量也具有協(xié)同作用(P<0.05)。

3.3黃芪桂枝五物湯對糖尿病小鼠血清TC含量的影響高脂喂養(yǎng)并采用STZ誘導(dǎo)后，小鼠血清TC含量顯著上升(P<0.01)。單因素方差分析表明，除生姜大棗配伍和芍藥生姜配伍外，其余藥物組合均能降低小鼠血清TC含量。雙因素方差分析，表明單用君藥黃芪、單用臣藥桂枝可降低小鼠血清TC含量(P<0.01；P<0.01)，且黃芪桂枝配伍具有協(xié)同作用(P<0.01)。此外，黃芪生姜配伍、桂枝芍藥配伍、芍藥生姜配伍對降低小鼠血清TC含量也均有協(xié)同作用(P<0.05；P<0.01；P<0.05)。

表2 黃芪桂枝五物湯配伍對糖尿病小鼠血糖、TG和TC的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

表3 黃芪桂枝五物湯配伍方差結(jié)果分析

(續(xù)表3)

分組血糖P值TGP值TCP值黃芪×大棗0.3600.1270.346桂枝×芍藥0.0540.8760.007桂枝×生姜0.0080.0380.843桂枝×大棗0.9780.3560.101芍藥×生姜0.6680.8380.031芍藥×大棗0.4350.9560.227生姜×大棗0.0400.0370.733

4 討論

黃芪桂枝五物湯以黃芪為君藥，眾所周知黃芪為補氣之經(jīng)典藥，民國時期上海名醫(yī)陸仲安人稱“陸大黃芪”，因擅長用黃芪為人治病而得名。黃芪補益脾肺之氣，固表實衛(wèi)，是為君藥；桂枝溫經(jīng)通痹，輔助君藥溫陽強衛(wèi)，是為臣藥。二者合用合用，相得益彰，使益氣溫經(jīng)之功效大增；芍藥亦為臣藥，養(yǎng)陰斂營，養(yǎng)血和血，和桂枝配伍作為桂枝湯之經(jīng)典藥對，主攻調(diào)和營衛(wèi)；生姜具有助桂枝發(fā)散外邪的功效，大棗能輔助芍藥調(diào)和營陰，且生姜大棗同用，亦能調(diào)和脾胃，故此二味藥又共為佐使。此方五藥合用，改善氣血虧虛，疏通經(jīng)脈，故可使體液消痰致痰、口渴等癥狀消除。

血糖值是糖尿病最核心、也是最基本的檢測指標(biāo)，通常通過血糖的監(jiān)測來控制糖尿病患者服用藥物的療程和劑量。本實驗發(fā)現(xiàn)單用黃芪和單用桂枝均可降低小鼠血糖值，表明黃芪和桂枝在本方中的核心地位。此外，單用芍藥有降低血糖值的傾向，說明芍藥在本方中作為臣藥有其合理之處。黃芪桂枝配伍、黃芪芍藥配伍均具有協(xié)同作用，表明君臣合用產(chǎn)生了降血糖的協(xié)同作用。大量的前期研究發(fā)現(xiàn)黃芪及其提取物具有降血糖作用[5，6]，這種降血糖作用與抑制炎癥因子的產(chǎn)生有關(guān)[7]。本研究通過正交實驗也發(fā)現(xiàn)在黃芪桂枝五物湯中，單用黃芪效果最好。

TG占儲存在我們體內(nèi)脂肪的99%。由于比淀粉或蛋白質(zhì)以更密集的形式儲存，這些富含TG的脂肪作為人體長期能量的最重要來源。脂肪的形成需要胰島素的存在。當(dāng)禁食或胰島素水平較低時，脂肪中的TG可轉(zhuǎn)化為能量。但脂肪細胞具有巨大的儲存能力，這將可能導(dǎo)致肥胖[8]。隨著絕對胰島素缺乏，肝臟將脂肪分解產(chǎn)物轉(zhuǎn)化成酮。臨床發(fā)現(xiàn)，80%的II型糖尿病患者存在高TG的癥狀[9]。本研究發(fā)現(xiàn)只有單用黃芪才能降低糖尿病小鼠血清TG含量，體現(xiàn)了黃芪在本方中的中心地位，即君藥。黃芪桂枝配伍、黃芪生姜配伍具有協(xié)同降低血清TG的作用，說明本方臣藥桂枝和佐藥生姜輔助君藥黃芪發(fā)揮其降血清TG的作用。

膽固醇是一種蠟質(zhì)的脂肪樣物質(zhì)，存在于體內(nèi)所有細胞中。除了飲食會為身體提供膽固醇外，肝臟會產(chǎn)生膽固醇。臨床發(fā)現(xiàn)血液中含有過多的膽固醇，那么患糖尿病的風(fēng)險就會增加[10]。本研究發(fā)現(xiàn)單用君藥黃芪或單用臣藥桂枝可降低小鼠血清TC含量，佐證了黃芪和桂枝在本方中的核心地位，且黃芪桂枝配伍具有協(xié)同降低血清TC含量作用，證明君藥、臣藥單獨起效，但相互配合則效果更佳的組方思路。

本研究結(jié)果表明在黃芪桂枝五物湯中，臣藥桂枝和芍藥、佐使藥生姜和大棗在不同方面可以協(xié)同促進黃芪的降血糖、降血清TG和TC作用，從而佐證了黃芪桂枝五物湯選藥組方的科學(xué)性與合理性，為臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。